规模化猪场寄生虫病的控制

猪寄生虫病是造成规模化猪场经济损失的一个重要疾病。根据规模化猪场寄生虫流行病学特点和国内驱虫药物资源,用０．２％阿维菌素预混剂进行防治,取得了满意的效果。文章介绍了规模化猪场寄生虫病控制工作中的一些实用方法     

世界绵羊(Ovis aries)球虫种类与地理分布

为了解绵羊(Ovis aries)球虫的种类及在世界各地的分布情况,本文收集整理了世界上报道绵羊球虫的相关资料,按照虫种学名的字母为序,介绍了寄生于绵羊的17种艾美耳球虫(Eimeria),其中3种在中国发现与命名的球虫为卵状艾美耳球虫(Eimeria oodeus Hu and Yan,1990)、厚膜艾美耳球虫(Eimeria pachmenia Hu and Yan,1990)、固原艾美耳球虫(Eimeria guyuanensis Xiao,1992)。每种球虫包括中文名称与学名、宿主名称、寄生部位、地理分布,部分种类有同物异名,地理分布按照国家或地区的英文或拼音字母为序。在收录的56个国家中,记录球虫种类最多的国家为中国(17种),其次为巴西(13种),记录11～12种球虫的国家占32.14%,6～10种球虫的国家占35.71%,1～5种球虫的国家占28.57%。在17种绵羊球虫中,分布最广的球虫为小型艾美耳球虫(49个国家),其次为类绵羊艾美耳球虫(46个国家),分布40～45个国家的球虫种类占29.41%,20～39个国家的球虫种类占23.53%,1～19个国家的球虫种类...     

柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶真核表达质粒的构建与鉴定

为构建柔嫩艾美耳球虫乳酸脱氢酶(Eimeria tenella Lactate dehydrogenase,EtLDH)的真核表达质粒,分别以柔嫩艾美耳球虫第二代裂殖子和鸡脾脏cDNA为模板,PCR扩增出EtLDH和鸡IFN-γ基因,PCR产物经酶切回收目的片段后与相应酶切的真核表达载体pCAGGS连接,构建了真核表达质粒pCAGGS-EtLDH和pCAGGS-EtLDH-IFN-γ。所构建的真核表达质粒经酶切和测序鉴定为正确后转染293T细胞进行表达,分别用Western blot和间接免疫荧光鉴定EtLDH基因的表达情况。Western blot结果可见大小约为37 kDa的目的蛋白条带,间接免疫荧光可以检测到特异性红色荧光。结果表明成功构建了EtLDH的真核重组表达质粒pCAGGS-EtLDH和pCAGGS-EtLDH-IFN-γ,并能在真核细胞中表达,为深入研究EtLDH的生物学功能和球虫DNA疫苗的研制奠定了基础。     

柔嫩艾美耳球虫延伸因子1α特性与功能初步分析

鸡球虫病在世界范围内对家禽业具有重大的经济影响,导致高死亡率、低增长、低生产力和高防治成本。由于球虫耐药性问题严峻,球虫病的防治重点倾向于研究方便安全,并且与活疫苗相比更容易生产的亚单位疫苗。因此,迫切需要新的方法来有效地控制球虫病,包括寻找特定的分子靶标。本文以柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA第一链为模板,扩增了延伸因子1α（EtEF1α）的ORF序列,生物信息学分析显示,该基因编码450个氨基酸,预测相对分子质量为49.1 ku,等电点为4.7;编码的蛋白无信号肽和跨膜结构域,但都含有N-肉豆蔻酰化位点。qRT-PCR和Western blot分析EtEF1α在虫体不同发育阶段的mRNA转录水平和蛋白翻译水平,结果显示,EtEF1α在子孢子（Spz）和裂殖子（Mrz）的mRNA转录水平高于未孢子化卵囊（UO）和孢子化卵囊（SO）,翻译水平在UO和Mrz高表达;间接免疫定位发现,EtEF1α主要定位于Spz一端和整个Mrz,随着虫体在细胞内发育,荧光强度逐渐增强。分泌试验显示该蛋白为分泌蛋白,但不是由微线体分泌的。入侵抑制试验结果表明,兔抗rEtEF1α多克隆抗体能抑制子孢子入侵DF-1细胞,抑制率约为22%。综上表明,该蛋白可能参与了虫体在宿主细胞内的生长发育和子孢子入侵宿主细胞的过程。     

磺胺氯吡嗪处理弓形虫速殖子抑制消减文库的构建和初步分析

为了研究和探索磺胺氯吡嗪抗弓形虫的作用机理,构建磺胺氯吡嗪处理弓形虫的抑制性消减文库.将刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)RH株速殖子腹腔注射(10000个/只鼠)感染昆明系小鼠,大量收集并纯化速殖子.用250 mg/mL磺胺氯吡嗪PBS溶液和PBS分别浸泡速殖子,37℃恒温箱孵育2h,分别提取虫体的总RNA和mRNA,以PBS处理的正常虫体cDNA为驱动组,以药物处理虫体cDNA为实验组,构建药物处理前后弓形虫速殖子的抑制性消减文库,对部分阳性克隆进行测序和序列分析.结果显示,提取的虫体总RNA纯度高,合成的双链cDNA经RsaⅠ酶切反应较完全;从消减文库中随机选择100个阳性克隆进行PCR扩增,其插入片段长度在200～750 bp之间,文库的重组率达93％以上;随机挑取30个阳性克隆进行测序,获得11个单一序列,Blast分析显示有7个单一有效EST序列与已知蛋白质相似性较高.结果表明,已成功构建磺胺氯吡嗪处理弓形虫速殖子的抑制性消减cDNA文库,并对部分阳性克隆进行了初步分析,为深入研究磺胺氯吡嗪的抗弓形虫机制和寻找药物作用的关键靶分子奠定了基础.     

巨型艾美耳球虫早熟株选育及其相关生物学特性研究

为了选育巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)早熟株并观测其生物学特性,运用Jeffers创立的球虫早熟株选育方法,对实验室保存的E.maxima进行了早熟株选育,并比较了所获得的早熟株与母株在卵囊大小、繁殖能力、致病性、免疫保护力等生物学特性上的差异。经过17代早熟株选育,E.maxima的潜在期由母株的142 h缩短至107 h,缩短了35 h。早熟株卵囊的长、宽及大小均比母株小,且差异显著(P0.05);卵囊形状指数比母株的稍大,但差异不显著(P0.05)。早熟株的卵囊繁殖能力较母株的低,排卵囊高峰出现在接种后d6,较母株提前1 d。在同等剂量之下,早熟株的致病性低于母株,但免疫保护力和免疫原性与母株相当。早熟株的选育成功,为球虫早熟株弱毒疫苗的研制以及早熟株相关基因的筛选提供了重要材料。     

奶牛隐孢子虫的检测技术

隐孢子虫病是一种重要的人畜共患原虫病。在家畜中以对反刍动物—奶牛的危害最大。当前，奶牛隐孢子虫主要还是以粪便检测为主，如改良抗酸染色法、金胺一酚改良抗酸复染法等。现在还有应用日趋广泛的免疫学检测方法，如ELISA、IFA、McAb等；分子生物学检测方法。如常规PCR、巢式PCR等。本文对上述各种检测方法作一综述，以供广大寄生虫病学和兽医工作者参考。     

巨型艾美耳球虫早熟株免疫剂量研究

为了确定巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)早熟株合适的免疫剂量,本文设立7个早熟株免疫攻虫组、7个母株免疫攻虫组、1个不免疫攻虫组和1个不免疫不攻虫组,7个早熟株/母株免疫组的免疫剂量为孢子化卵囊100、200、400、600、800、1000和2000个/羽,经嗉囊感染,7日龄首次免疫,14日龄以同等剂量进行第二次免疫,21日龄以8×104个/羽的同源母株进行攻虫,28日龄结束试验,以增重、肠道病变记分和卵囊减少率为试验指标。对早熟株中免疫保护效果较好的2个免疫剂量进行重复试验,免疫方法、试验周期、试验指标和攻虫剂量同第一批试验。结果显示:早熟株和母株200、400、600、800、1000、2000个/羽免疫组攻虫后的增重与健康对照组差异不显著(P>0.05),100个/羽免疫组明显低于健康对照组(P<0.05);各免疫组的卵囊减少率均达90%以上,肠道病变记分均与不免疫攻虫组差异不显著(P>0.05)。用早熟株200、400个/羽进行免疫重复试验,两个免疫组攻虫期间的增重和肠道病变记分均与健康对照组差异不显著(P>0.05),而与不免疫攻虫组差异显著(P<0.05),其卵囊减少率均在86%以上。研究结果表明,该巨型艾美耳球虫早熟株保持了良好的免疫原性,每只鸡免疫200或400个孢子化卵囊均可诱发鸡产生良好的免疫保护力,可考虑以200个孢子化卵囊作为该早熟株在疫苗制备中的推荐免疫剂量。     

上海市鸽球虫感染情况初步调查与种类鉴定

为了调查上海市鸽球虫的感染情况和种类,分别采集奉贤区肉鸽场和信鸽场的110份和44份粪便,以及南汇区肉鸽场的100份粪样,采用麦氏虫卵计数法对粪便球虫卵囊进行计数,收集阳性粪便中的卵囊,经孢子化后进行种类鉴定。结果显示,上海市鸽球虫的平均感染率为52.8%(134/254),平均每克粪便卵囊数(oocyst per gram,OPG)为50 159个,为中度感染。肉鸽感染率(55.2%)和平均OPG(52 110个)均高于信鸽(40.9%和37 583个),奉贤肉鸽感染率(60.9%)高于南汇(49.0%),但南汇肉鸽的OPG(88 634个)明显高于奉贤(25 400个)。从肉鸽阳性粪便中鉴定出5种球虫,即拉氏艾美耳球虫(Eimerialabbeana)、鸽艾美耳球虫(E.columbae)、原鸽艾美耳球虫(E.columbarum)、杜氏艾美耳球虫(E.duculai)以及卡氏艾美耳球虫(E.kapotei),拉氏艾美耳球虫为优势种。在信鸽阳性粪便中鉴定出4种球虫,即拉氏艾美耳球虫、杜氏艾美耳球虫、鸽艾美耳球虫以及原鸽艾美耳球虫,原鸽艾美耳球虫为优势种。本次调查表明上海市肉鸽和信鸽的球虫感染率和粪便OPG均偏高,调查结果为及时做好鸽球虫病的防治提供了基础数据。     

五种抗球虫药对肉鸽球虫病的防治研究

为筛选有效的抗鸽球虫药物,选用地克珠利(1 mg/kg)、磺胺喹恶啉钠(300 mg/kg)、磺胺氯吡嗪钠(300 mg/kg)、托曲珠利(25 mg/kg)、白头翁散(500 mg/kg)等5种抗鸡球虫药物进行了本试验,试验重复3次,每次分为用药感染组和不用药感染组,人工感染主要含有拉氏艾美耳球虫和鸽艾美耳球虫的混合孢子化卵囊,剂量为15×104个,以相对卵囊减少率作为抗球虫效果的指标。结果显示磺胺喹恶啉钠、磺胺氯吡嗪钠效果最好,相对卵囊减少率分别为99.9%和99.5%;其次是托曲珠利、白头翁散,相对卵囊减少率分别为96.7%和92.0%;地克珠利效果最差,相对卵囊减少率仅为75.6%。