复方Closantel驱除绵羊体内外寄生虫的试验

应用中国农业科学院上海家畜寄生虫病研究所研制的新型高效、低毒、广谱驱虫药——复方 Closantel片剂,对严重感染体内外寄生虫的绵羊50只,分组后分别从5mg·kg~(-1)、10mg·kg~(-1)、20mg·kg~(-1)的剂量给绵羊一次口服;同时用虫克星口服作药物对照.结果表明:驱除绵羊体内外寄生虫的有效剂量为5mg·kg~(-1)、有效率为100%,对消化道线虫、肝片吸虫和前后盘吸虫的虫卵减少率分别是为47.40%和37.50%;     

抗球佳、克球灵防治鸡柔嫩艾美耳球虫笼饲试验

鸡球虫病是一种对养禽业危害极为严重的全球性寄生虫病,每年都给养禽业造成巨大的经济损失.为了防治此病,广大科研工作者在过去的几十年间做了大量的研究工作,取得了巨大的成绩.目前球虫病主要依靠药物预防和免疫预防,在免疫预防还未能取得突破性效果的今天,药物仍是防治鸡球虫病的可靠方法.然而,由于药物产生耐药性或其他原因造成药物低效,至今球虫病仍然经常发生.在研制新药远远跟不上实际需要的情况下,如何合理使用现有抗球虫药,延长药物使用周期,是目前需要探索的问题,通过两种或两种以上药物联合使用仍是目前值得探索的一个方法.基于上述目的,我们进行了本次试验.     

柔嫩艾美耳球虫泛素蛋白功能初步研究

泛素是真核生物中普遍存在的一种小分子蛋白,广泛参与细胞内蛋白质的平衡代谢过程,对维持细胞内环境的稳态具有重要作用.为研究泛素在柔嫩艾美耳球虫中的功能,本研究利用PCR方法克隆了柔嫩艾美耳球虫泛素(EtUb)基因,将其亚克隆至原核表达载体pET28a(+),转入大肠杆菌BL21,诱导表达制备rEtUb蛋白,用纯化的重组蛋...     

巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫早熟株对8种抗球虫药的敏感试验

为检测巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫早熟株对常用抗球虫药的敏感性,选用地克珠利、氯苯胍、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星、盐霉素和拉沙洛西等8种抗球虫药进行鸡体试验,通过抗球虫活性百分比（percent of optimum anticoccidial aetivity,POAA）、病变记分减少率（reduction of lesion scores,RLS）、相对卵囊产量（relative oocyst production,ROP）和抗球虫指数（anticoccidial index,ACI）4项指标进行综合评价。结果表明,巨型艾美耳球虫早熟株对8种药物敏感;柔嫩艾美耳球虫早熟株对盐霉素轻度敏感,对地克珠利、氯苯胍、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星和拉沙洛西敏感。本研究结果可为对球虫早熟株疫苗的开发与应用提供实验依据。     

重组牛皮蝇素A蛋白的免疫试验

用由毕赤酵母表达的皮蝇素A（Hypdermin A，HA）蛋白分别免疫新西兰大白兔和牦牛，了解该蛋白免疫效果。用两种不同分子量的重组HA蛋白分别免疫新西兰大白兔1次和2次，ELISA测其抗体消长规律。结果表明，3周后抗体水平达到峰值，后缓慢下降。50KD蛋白免疫效果较30KD蛋白好，差异非常显著（P〈0．01）。用其中50KD的重组HA蛋白分别在7月和9月免疫自然感染牛皮蝇蛆病牦牛，观察感染率和感染强度，ELISA测其抗体消长规律。结果表明，7月免疫组与9月免疫组感染率分别为83．3％和36．3％（对照组为55．5％）；平均感染强度分别为6．5和4．2（对照组为13．0），差异不显著（P〉0．05）。免疫后，抗体水平上升，3个月后缓慢下降。9月免疫组免疫效果较7月免疫组好，三组抗体水平差异非常显著（P〈0．01）。上述研究结果为防治牛皮蝇蛆病疫苗的深入研究和实践运用提供了参考依据。     

用卡片PCR法检测卡耶他环孢子虫

使用FTA卡片法提取卡耶他环孢子虫DNA,利用特异性引物组F1E/R2B、CC719/CRP999进行巢式PCR,得到1条298bp的特异条带。并以柔嫩艾美尔球虫、贝氏隐孢子虫等作为对照,结果显示,除卡耶他环孢子虫外,均无特异性条带。用卡耶他环孢子虫卵囊进行巢式PCR敏感性试验,结果显示敏感度最高达1.0×100个/mL。     

柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3在293T细胞中的表达研究

为构建柔嫩艾美耳球虫钙依赖蛋白激酶3（Eimeda tenella calcium-dependent protein kinases3,EtCDPK3）基因的重组质粒pCAGGS-EtCDPK3,并转染293T细胞进行表达,以柔嫩艾美耳球虫孢子化卵囊cDNA为模板,经PCR扩增其含完整开放阅读框的序列,将其克隆至pGEM．Teasy载体,构建pGEM—Teasy-EtCDPK3重组质粒,双酶切回收目的片段后与相应酶切的真核表达载体pCAGGS连接,构建真核重组表达质粒pCAGGS-EtCDPK3。该重组质粒经酶切和测序鉴定正确后转染293T细胞进行表达,分别用免疫印迹和间接免疫荧光鉴定EtCDPK3基因的表达情况。结果显示所构建的真核重组表达质粒pCAGGS—EtCDPK3经过双酶切鉴定,可见1条大小约为1302by的目的条带,测序结果与实验室已获得的EtCDPK3序列完全一致;Western blot结果可见大小约为49kDa的目的蛋白条带,间接免疫荧光实验可以检测到红色荧光。这些研究结果表明已成功构建了EtCDPK3的真核重组表达质粒pCAGGS-EtCDPK3,并在真核细胞中获得表达,为深入研究EtCDPK3的功能和制备DNA疫苗奠定了基础。     

上海市奶牛隐孢子虫感染现状调查

隐孢子虫病（Crytosporidiosis）是由隐孢子虫（Crytospridum spp）引起的一种全球性的人兽共患原虫病。主要症状为腹泻,一旦食物或水源遭到隐孢子虫卵囊污染即可经口传染给人和动物。该病正日益受到国内外广大学者关注,其原因是作为一种水源性疾病,它能引起免疫缺陷或免疫抑制者致死性腹泻,且迄今没有特效治疗药物。隐孢子虫对家畜的危害尤以对反刍动物牛的危害最大,     

利用BiFC技术研究柔嫩艾美耳球虫顶膜抗原1结构域Ⅰ与棒状体颈部蛋白2互作关系

为了验证柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)顶膜抗原1结构域Ⅰ(apical membrance antigen 1 domain I,E tAMA1-DⅠ)与棒状体颈部蛋白2(rhoptry neck protein 2,EtRON2)的互作关系,以柔嫩艾美耳球虫子孢子cDNA为模板,PCR扩增出492 bp的E tAMA1-DⅠ片段和1395 bp的E tRON2片段,并与pGEM-T-easy载体连接构建相应重组质粒。获得的阳性重组质粒及双分子荧光互补技术的真核表达载体pBiFC-VN155和pBiFC-VC155用E c oRⅠ和B g I II进行双酶切,将E tAMA1-DⅠ、E tRON2分别与pBiFC-VN155、pBiFC-VC155连接,构建真核重组质粒pBiFC-VN155-E tAMA1-DⅠ和pBiFC-VC155-E tRON2。将2个真核重组质粒分别转染BHK细胞进行表达,经间接免疫荧光鉴定,可在BHK细胞中成功表达。将2个真核重组质粒共转染至BHK细胞中,同时将pBiFC-bJunVN155和pBiFC-bFos(deltaZIP)VC155、pBiFC-bJunVN155和pBiFC-bFos(delta)VC155共转染至细胞中分别作为阳性和阴性对照组。BiFC结果发现真核重组质粒共转染组和阳性对照组的BHK细胞均产生绿色荧光,而阴性对照组无荧光,表明E tAMA1-DⅠ与E tRON2蛋白之间存在互作关系。本研究结果为深入研究E tAMA1及E tRON2在球虫入侵过程中的功能与作用机制奠定基础。     

IgG1型单克隆抗体和吡喹酮协同预防日本血吸虫病的研究

6组昆明系小鼠人工感染日本血吸虫尾蚴前2小时,组1和组2胃饲低剂量吡喹酮(20mg/kg),并分别腹腔注入鼠抗日本血吸虫IgG_1型单克隆抗体ISj51和ISj55作被动免疫,4天后重复1次,4周后剖杀集虫。结果表明,单抗合并吡喹酮的组1和组2的减雌率分别为45.32％和42.95％,均明显高于(p<0.01)仅作腹腔被动免疫转移ISj 51和ISj 55单抗的组3和组4(分别为15.11％和19.44％),亦高于(p>0.05)仅用单剂吡喹酮的组5(37.41％)。2株单抗在巨噬细胞和嗜酸性粒细胞的介导下,杀伤童虫率接近1:2稀释的8周阳性鼠血清(分别为37.50％,46.88％和48.00％,41.18％)。提示:鼠抗日本血吸虫IgG_1型单抗协同低剂量吡喹酮,具有预防日本血吸虫感染,提高灭雌率,降低吡喹酮毒副作用的优点,对控制和预防日本血吸虫病的传播具有一定的意义。