营养转运相关基因调控区多态性与黄羽肉鸡饲料转化率关联分析

旨在探讨多个营养转运相关基因调控区的多态性,并筛选影响肉鸡饲料转化率的关键变异位点。本研究采集了439只雄性黄羽肉鸡的血液DNA样本,利用PCR直接测序的方法在鸡群高、低饲料转化率的两尾样本组中(高FCR组>3.40,低FCR组<2.35,样本数均为12个)对3个单糖转运基因(GLUT2、GLUT5和SGLT1)、8个氨基酸转运基因(B⁰AT1、B⁰⁺AT、CAT1、CAT2、LAT1、y⁺LAT1、y⁺LAT2和rBAT)和1个营养调控基因(FGF1)上游1 kb内的多态性位点进行检测。依据两尾样本组中基因型频率的差异,筛选潜在影响饲料转化率的变异位点。采用PCR-RFLP技术在全群样本中对变异位点进行基因分型,并分析这些多态性位点与饲料转化率等性状的关联性。结果显示,本研究在12个基因的上游1 kb范围内共寻找到111个SNPs位点,其中有8个SNPs位点在两尾样本组中的基因型频率存在差异,分别为GLUT2基因的-379A>G,SGLT1基因的-490G>A,B^...     

羊驼MC1R基因克隆及其在不同毛色个体中表达水平研究

为了获取羊驼MC1R基因序列,探索MC1R基因表达水平与羊驼毛色之间的相关性,根据GenBank已发表序列(EU1358800)设计1对引物,以羊驼皮肤总RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增并成功获得了中华白色羊驼MC1R基因cDNA序列,长度为1 081 bp,编码317个氨基酸,与已发表序列进行对比,同源性为99%,发现7处突变.根据所克隆序列设计引物,采用实时荧光定量PCR技术(QRT-PCR),分析MC1R基因在白色和棕色羊驼皮肤中的基因表达量,并对结果进行统计分析.结果表明:经过内参基因校正后,棕色羊驼皮肤中MC1R基因的相对表达量是白色羊驼相对表达量的4.32倍(P<0.01).MC1R基因表达量的差异与羊驼毛色表型之间可能存在一定的相关性.     

基于Label-free技术分析牛卵泡蛋白质组分及关键调控蛋白

旨在研究牛卵泡发育过程中蛋白质组表达变化并筛选卵泡发育关键调控蛋白,利用非标记(label-free)定量蛋白质组学技术对牛卵泡颗粒细胞(granulesa cells, GCs)蛋白质组分进行比较分析。采集牛发情周期优势卵泡(dominant follicles, DF)和从属卵泡(subordinate follicles, SF),分别分离GCs,并提取总蛋白,胰蛋白酶酶解,液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)进行蛋白质组分分析,数据库检索分析DF和SF中蛋白质表达情况,并应用生物信息学方法筛选牛卵泡发育关键调控蛋白。结果表明:本试验从30 321个肽段中共成功鉴定出3 409种蛋白质(FDR≤0.01),其中,DF中表达2 895种蛋白质,SF中表达3 102种蛋白质,获得差异表达蛋白质(差异倍数>2,P<0.05) 259种,17种差异表达蛋白质可能与牛卵泡优势化过程相关,SERPINB2可能调控牛卵泡闭锁。该研究筛选获得的牛卵泡差异表达蛋白质和特异表达蛋白质,丰富了牛卵泡发育调控理论,为进一步研究卵泡闭锁及优势化奠定基础。     

miRNA在皮肤组织中的作用研究进展

miRNA参与生命过程中的一系列重要进程,包括发育进程,造血过程,器官形成,凋亡,细胞增殖,甚至是肿瘤发生。近期的研究发现,miRNA在毛囊的形成及毛发的生长中起着重要的作用,这类小RNA作为一类新型的转录后调控小分子,所调控的靶向基因众多,为研究动物毛发形成提供了新的方向。     

牛卵泡CMKLR1基因CDS区克隆及结构分析

[目的]旨在确定牛卵泡趋化因子样受体1(Chemokine-like receptor 1,CMKLR1)全CDS区序列结构并对其分子特征和三级结构进行预测。[方法]采集正常发育牛卵泡分离颗粒细胞(Granulosa cells,GCs),提取总RNA后反转录,特异性引物扩增、测序,获得全CDS区后生物信息学方法进行结构分析和功能预测。[结果]CMKLR1CDS区全长1 089bp,编码362个氨基酸;蛋白质一级结构中分别包含4个O-糖基化位点、1个N-糖基化位点和50个磷酸化位点;三级结构和功能域分析表明,CMKLR1有7个横跨胞膜的平行的α螺旋结构,属于典型的G蛋白偶联受体。[结论]多糖基化、磷酸化位点的存在以及蛋白定位的特殊性,提示该蛋白功能较为复杂。该研究为后期深入探讨CMKLR1与牛卵泡发育的关系奠定了基础。     

基于Illumina平台转录组测序筛选牛卵泡发育调控基因

运用超声波监测技术,采集母牛发情期出现偏差前的第一大卵泡PDF1和出现偏差后的第二大卵泡ODF2,分别分离卵泡颗粒细胞(GCs),构建RNA文库,用Illumina2000测序;测序结果经数据库搜索和差异表达筛选,采用DAVID软件GO和KEGG pathway分析,经Genecards功能查询,筛选牛卵泡发育相关基因。结果表明:数据库搜索共获得35 325个基因,其中有意义的表达基因15 645个,从中筛选获得差异表达基因608个;GO分析表明,608个差异表达基因中参与生物过程的基因占60.46%,细胞组分的基因占20.08%,分子功能的基因占11.46%;KEGG pathway分析表明,608个差异表达基因通过9条信号通路参与牛卵泡发育调控(P0.05),经Genecards功能筛选,共获得11个与牛卵泡发育密切相关的调控基因——SESN3、COL3A1、CCNE1、CAV1、CACNA1H、ITPR1、PIK3R3、MYC、PTGFR、CDK6、GAPDH,它们直接参与细胞增殖分化及信号通路调节。     

核糖体蛋白S5（RPS5）基因对羊驼毛色调控的研究

本研究利用southern blotting技术从羊驼皮肤cDNA文库中筛选出核糖体蛋白S5（Ribosomal proteinS5，RPSS）基因，测序后利用生物信息学方法对该基因进行了相关分析。经分析发现羊驼RPS5基因序列中存在CCGG位点，推测羊驼RPS5基因在此位点发生甲基化。RPS5基因通过调节处于不同凋亡方式的黑色素细胞，保证黑色素数量的产生，从而对羊驼毛色产生调控作用。     

黑色素细胞相关调控因子研究进展

黑色素细胞是皮肤组织中的一种特殊细胞,黑色素细胞能够产生黑色素并且传递给周围的角质细胞。黑色素传递并停留在这些角质细胞中,能够防止光线辐射对染色体产生损伤,对细胞产生一定的保护作用。黑色素的合成受到许多复杂的调控因子的调控,小眼畸形转录因子在调控黑色素的合成及黑色素细胞的迁移和生存起着非常重要的作用。在小鼠中,干细胞因子或者是它的感受器c-Kit的突变会导致黑色素细胞异常表型。黑色素细胞通过福斯匹林和α黑色素细胞刺激素与黑素皮质素受体结合刺激黑色素的生成;刺鼠信号蛋白会抑制酪氨酸蛋白酶的活性,进而减少黑色素的产量。WNT信号对于神经嵴细胞分化为黑色素细胞有影响,影响黑色素细胞的数量进而影响黑色素的产量。促肝细胞生长素是酪氨酸激酶的感受器,能够促进和保持黑色素细胞产生黑色素的活性。控制合成内皮缩血管肽的受体及配体EDN3的基因的突变会导致黑色素细胞的缺失。     

催乳素及其受体在青年公羊驼皮肤中分布的研究

羊驼是一种经济价值很高的毛用动物，研究包括激素在内的各种因素对羊驼毛生长的调控极为重要。作者采用基因芯片杂交技术发现青年公羊驼皮肤中不仅存在PRL及其受体基因，而且还存在PRL相关蛋白基因，提示羊驼皮肤是PRL的一个垂体外合成部位，同时羊驼皮肤还可以合成PRL相关蛋白及PRL受体；通过荧光定量分析比较，认为羊驼皮肤合成的PRL是极少量的，垂体是PRL合成的主要部位；通过免疫组织化学技术确定PRL及其受体蛋白主要分布在羊驼毛囊上皮根鞘、表皮、皮脂腺等，提示PRL对羊驼皮肤及其衍生物可能以内分泌、自分泌和旁分泌的方式发挥作用。