牛病毒性腹泻病毒CC13B株全基因组序列及分析

从长春地区某牛场发生疑似为牛病毒性腹泻-黏膜病的病牛粪样中分离到1株病毒,经序列测定为牛病毒性腹泻病毒命名为BVDV CC13B株。核苷酸序列的测定结果显示,CC13B毒株的完全基因组序列由12 265个核苷酸组成,其中5′端非编码区包含380个核苷酸,3′端非编码区包含188个核苷酸。病毒基因组含有1个大的读码框架,编码1个由3 898个氨基酸组成的前体多聚蛋白。序列对比结果显示,CC13B毒株的核苷酸和氨基酸序列与国外CP-5A毒株同源性最高,分别为为96.2%和97.3%;而与国内分离株JZ05-1的同源性最低,分别为69.8%和71.0%。系统进化树分析结果表明,CC13B毒株与国内分离的长春184、Xinjiang-3156和H等分离株归类为BVDV基因Ⅰ型的Ib基因亚型。结果表明,长春地区近年发生的牛病毒性腹泻-黏膜病依然主要由BVDV基因Ⅰ型毒株引起。     

奶牛新孢子虫病的检测方法

新孢子虫病（Neosporiasis）是由犬新孢子虫寄生于犬、牛、羊等多种动物细胞内而引起的原虫病。虽然新孢子虫病是多种家畜共患的原虫病,但其对奶牛危害尤为严重。本病主要造成母牛流产、产死胎以及新生儿的运动神经系统疾病,同时该病可垂直传播,带虫母牛可将虫体直接传给新生犊牛。     

小檗胺对牛病毒性腹泻病毒感染BALB/c小鼠的影响研究

试验旨在研究天然小分子化合物小檗胺(berbamine, BBM)对牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)感染BALB/c小鼠的影响。共分为预防保护和治疗两部分试验。预防保护试验将24只BALB/c小鼠随机分成3组,每组8只,使用0、50、100 mg/kg BBM提前灌胃,每24 h灌胃1次,连续灌胃3 d,滴鼻感染BVDV 48 h后再次感染,于感染后继续每24 h灌胃,感染后5和10 d时分别处死4只,取肝、脾、肾、小肠等组织使用荧光定量PCR(qPCR)检测BVDV 5′UTR水平;制备病理切片并使用H&E染色检测各组织病变情况。治疗试验中将24只BALB/c小鼠随机分成2组,BVDV滴鼻感染,48 h后再次感染后使用0和100 mg/kg BBM灌胃BALB/c小鼠,每24 h灌胃1次,于感染后3、6和10 d时分别处死4只小鼠,使用qPCR检测BVDV载量,通过病理切片检测各组织病变情况。结果显示,预防保护试验发现,与对照组相比,50和100 mg/kg BBM使BVDV感染后各组织5′UTR水平最大降低约72倍,处理...     

猪瘟病毒E0+E2基因的串联表达及多克隆抗体制备

串联表达猪瘟病毒(classical swine fever virus, CSFV)E0和E2蛋白，并制备多克隆抗体鉴定其免疫原性，为进一步研究亚单位疫苗和猪瘟ELISA抗体检测方法提供材料。应用PCR技术分别扩增CSFV E0和E2基因片段，运用重叠PCR将其串联扩增后克隆至pET-28a载体，构建重组表达质粒pET-28a-E0+E2。通过大肠杆菌表达系统表达重组蛋白E0+E2,切胶纯化后免疫昆明小鼠制备血清，通过间接ELISA方法测定抗体水平，间接免疫荧光(IFA)分析多克隆抗体的免疫原性和特异性。结果显示，37℃,1 mmol/L IPTG诱导条件下，E0+E2蛋白能够以包涵体形式表达，经纯化复性后免疫小鼠，制备的血清能与感染CSFV的细胞特异性反应。在大肠杆菌中高效表达了E0+E2蛋白，制备的多克隆抗体具有较高的特异性和反应性。     

济南市谷子生产现状、制约因素及产业发展建议

济南市谷子种植面积和总产量均居山东省首位，单产略低于全省平均水平。自济南市农业农村局开展杂粮提质增效工程以来，济南市谷子产业迎来发展良机。为保持谷子产业良好的发展势头，本文作者通过分析近年来济南市谷子主要品种、面积和产量、农民种植习惯、农机具的使用等因素，找出了制约济南市谷子生产的关键因素，并提出了切实可行的发展建议。     

不同地膜覆盖对谷子产量及田间杂草防效影响

为提高谷子产量，有效防除谷田杂草，选取5种不同地膜（普通黑膜、普通银灰膜、0.006 mm100 d降解膜、0.008 mm 70 d降解膜、0.006 mm 70 d降解膜）进行谷子覆膜栽培试验，研究不同类型地膜对谷子产量、田间农艺性状及杂草防除效果的影响，并调查不同类型地膜的降解情况。结果表明，覆膜种植对谷子增产效果显著，平均增产11.1%，其中覆盖0.008 mm 70 d降解膜的处理产量最高，达291.8 kg/亩，较对照增产20.2%。覆膜处理分别提高谷子出米率和千粒重6.1%和5.7%。谷田覆膜有效降低了田间杂草生物量，起到了较好的防草效果，5个覆膜处理较对照减少杂草生物量达48.7%，其中覆盖银灰膜、0.006 mm 100 d降解膜和0.008 mm 70 d降解膜处理防草效果较好。在本试验条件下，选用0.008 mm 70 d降解膜进行谷子覆膜种植，既能有效减少杂草，又能提高谷子产量，为最优处理。     

猪细小病毒VP2蛋白的原核表达及其免疫原性评估

利用原核表达载体pET28a和pColdⅠ与猪细小病毒VP2基因分别构建重组表达质粒，并采用与伴侣蛋白共表达和低温诱导表达猪细小病毒VP2蛋白，并以电镜观察、血凝效价测定等进行鉴定。结果显示，2个表达载体均能对重组蛋白进行可溶性表达。冷休克载体组pColdⅠ-VP2蛋白在上清中表达效率更高且杂蛋白较少，诱导时不需要额外添加L-阿拉伯糖，表达过程工艺相对更简单。纯化后的pColdⅠ-VP2蛋白具有一定的免疫反应性，能在体外组装成病毒样颗粒(virus-like particles, VLPs),且具有血凝活性，使用206佐剂混合乳化重组蛋白免疫豚鼠后，血清中能检测到高滴度血凝抑制抗体。上述结果为进一步研究新型安全高效的猪细小病毒疫苗提供了数据支持。     

牛ATG10基因的克隆、原核表达、纯化和生物信息学分析

为了获得牛自噬相关基因10(ATG10)蛋白，试验参照GenBank中牛ATG10基因设计引物，PCR扩增ATG10基因，与pET-N-His-TEV载体连接，测序鉴定正确后用IPTG诱导ATG10蛋白表达，利用Ni-TED琼脂糖树脂进行蛋白纯化，Western-blot鉴定ATG10蛋白表达情况，通过生物信息学在线软件对ATG10蛋白进行分析，获得其相应的理化性质及参数。结果表明：克隆得到的ATG10基因序列长度约为705 bp,测序鉴定正确后得到pET-N-His-TEV-ATG10原核表达载体，IPTG成功诱导表达了ATG10蛋白，分子量为28 ku; ATG10蛋白与兔抗ATG10抗体特异性结合；ATG10蛋白是一种较为稳定的、含38个潜在的磷酸化位点、无跨膜区及信号肽的亲水性蛋白，二级结构中无规则卷曲占比44.44%,与ATG5、ATG12、ATG16L1、ATG3等多个自噬相关蛋白相互作用。说明试验成功构建出pET-N-His-TEV-ATG10原核表达载体，并获得ATG10蛋白。