猪蛔虫雄虫cDNA文库的构建

采用Tripure Isolation Reagent抽提猪蛔虫雄虫成虫的总RNA,用poly(A)PuristTM纯化试剂盒分离mR-NA。分离mRNA后,用Clontech公司的CreatorTMSMARTTMcDNA文库构建试剂盒构建了猪蛔虫雄虫成虫的cDNA文库。结果获得了7.26×105独立克隆,重组率达96.7%,插入片段的平均长度约为1 kb。猪蛔虫雄虫cDNA文库的成功构建为利用文库筛选雄虫差异表达基因提供了材料来源,为研究猪蛔虫性别发育的分子机制奠定了基础。     

Contracaecum rudolphii姊妹种特异 PCR鉴定方法的建立

参考已测得的C．rudolphii姊妹种（C．rudolphii A和C．rudolphii B）及C．septentrionale的核糖体DNA（rDNA）内转录间隔1、2（ITS-1及ITS-2）核苷酸序列，设计、合成了针对C．rudolphii A、C．rudolphii B及C．septentrionale的特异性引物HFA（F）、HFA（R）、HFB（F）、HFS（F），通过PCR条件优化和扩增后，它们均能特异地扩增出目的DNA片段，分别是323、321、108bp，而其它对照样品均未扩增出特异性片段，敏感性试验可检测到最低浓度分别为1．6、21．8、0．27ng／μL。从而初步建立了鉴定C．rudolphii姊妹种的特异PCR方法。该方法特异性强、敏感度较高、重复性好，不仅可用于C．rudolphii姊妹种的分类鉴定，也可用于它们所导致的寄生虫病的诊断和流行病学调查。     

基于线粒体nad4基因探讨土耳其斯坦东毕吸虫的系统发生位置

为探讨土耳其斯坦东毕吸虫在血吸虫中的系统发生位置,本研究设计一对特异性引物,通过PCR方法对土耳其斯坦东毕吸虫(绵羊源)线粒体烟酰胺脱氢酶亚基Ⅳ基因(nad4)进行扩增和测序分析,并与GenBank中相关血吸虫nad4基因进行比对。结果显示,本研究克隆的该吸虫线粒体nad4基因序列大小约为1030bp,与已发表的其它血吸虫线粒体nad4基因的同源性为51.6%～66.7%,其系统发生位置属于非洲血吸虫种群。     

我国猪毛尾线虫线粒体NADH脱氢酶亚单位1基因遗传变异的研究

毛尾线虫又称鞭虫,为人体和动物肠道常见的人兽共患寄生线虫[1].全世界鞭虫感染人数已超过10亿[2],而猪的鞭虫病更为普遍,一年四季均可发生且感染强度较高,对养猪业的发展威胁很大[1].有鉴于此,对鞭虫的防控刻不容缓,而正确分析不同地区猪毛尾线虫的遗传变异,不仅具有重要学术价值,而且对预防和控制该病也具有重要意义.     

犬弓首蛔虫感染比格犬不同阶段肝circRNAs表达模式的分析

旨在探究终末宿主肝环状RNA （circRNAs）在犬弓首蛔虫诱导致病过程中的潜在调控作用。18只6~7周龄的比格犬被平均分为3组（感染后0.5 d组、感染后1 d组和感染后36 d组）,每组包括感染和对照各3只,分别于感染后对应的时间点收集肝样品。提取感染和对照组肝的总RNA,利用高通量RNA测序,构建circRNA文库,对差异表达的circRNAs进行分析,并对差异表达circRNAs的亲本基因进行GO注释和KEGG富集分析。随机选取9个差异表达circRNAs进行实时荧光定量PCR验证。结果显示,与对照组相比,在感染后0.5、1和36 d分别有94、103和84个犬肝的差异表达circRNAs。Venn图显示,3个感染阶段没有共同表达的差异circRNAs;GO和KEGG分析显示,差异表达的circRNAs参与了宿主肝免疫与炎症的相关通路,其中差异表达的circRNA novel_circ_0016108、novel_circ_0016184和novel_circ_0027468与犬弓首蛔虫引起的天然免疫相关;novel_circ_0002212参与了犬弓首蛔虫引起的肝炎症反应;novel_circ_0002212和novel_circ_0019907在宿主肝抵抗犬弓首蛔虫侵袭的过程中发挥作用。RT-qPCR验证结果显示大多数差异表达的circRNAs与高通量测序结果一致。结果表明,肝circRNAs在犬弓首蛔虫感染终末宿主的过程中发挥着重要作用,这为进一步探究犬弓首蛔虫与宿主之间的相互作用提供了新的信息,并且也为促进疾病干预措施的制定提供参考。     

旋毛虫的化学组成

旋毛虫是一种宿主范围很广的寄生线虫。它的发育史可分为三个阶段:成虫、新生幼虫及肌幼虫。成虫寄生于人畜小肠,发育成熟后产新生幼虫。新生幼虫随血流侵入全身横纹肌组织中发育为肌幼虫,肌幼虫再     

长颈鹿血矛线虫ITS的PCR扩增与序列分析

目的利用分子生物学方法对来自长颈鹿皱胃的血矛线虫进行虫种鉴定。方法对样品XM9和XM11的核糖体DNA内转录间隔区(ITS-1、5.8 S、ITS-2)进行PCR扩增及序列分析,并与GenBank公布的血矛线虫(Hae-monchus)相应序列进行比较。结果来自长颈鹿皱胃的2条血矛线虫具有相同的ITS序列,5.8 S与ITS-1分别为153 bp、404 bp,与GenBank分布的捻转血矛线虫序列是一致的。ITS-2序列为231 bp,第753位是一个多态位点,该序列与来自国外的H.contortus,H.placei,H.longistipes存在0-18个碱基差异。结论来自长颈鹿的血矛线虫是捻转血矛线虫。     

我国片形吸虫线粒体NADH脱氢酶亚单位1基因(nad1)多态性的研究

用γ^33P对引物进行标记，首次对来自国内不同地区、不同宿主的片形吸虫线粒体烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)脱氢酶亚单位Ⅰ基因部分序列(pnad1)进行PCR扩增及DNA单链构象多态性(PCR-SSCP)分析，结果76个虫体均成功地扩增出约200bp的基因片段；76个样品经过PCR-SSCP分析后，筛选出11个代表性样品进行测序。测序结果显示我国片形吸虫pnad1序列种间差异大于种内变异，表明nad1序列可以作为片形吸虫种内和种间遗传多态性研究的标记。     

广西片形吸虫中间宿主-小土窝螺线粒体rrnL基因遗传多态性研究

为研究广西小土窝螺不同地理株线粒体大亚基(large subunit ribosomal rRNA,rrnL)基因的遗传多态性,对广西大片吸虫6个流行地区96个小土窝螺样品的rrnL基因进行PCR扩增,通过单链构象多态性(single strand conformation poly-morphism,SSCP)技术筛选出具有代表性的样品进行克隆、测序,并用DNAStar 5.0及MEGA 4.0软件加以比对分析。结果显示,6个地区小土窝螺rrnL基因PCR扩增长度约500 bp,在长度为273 bp的序列中检测到15个变异位点,占核苷酸总数的5.49%。百色、南宁和桂林3个地区相同地理株间存在较大的遗传差异。种系发育分析表明,线粒体rrnL基因在一定程度上不是研究小土窝螺种群遗传变异的良好分子标记。本研究为阐明片形吸虫中间宿主—小土窝螺的种群遗传关系提供了基础数据。