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根据已知禽流感病毒(AIV)的8个基因序列设计合成12对特异引物,通过反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,分别成功扩增出分离于野鸭(Mallard)的1株H3N8亚型禽流感病毒的全基因片段,将其分别克隆到pMD18-T载体后进行序列测定.同时将8个基因片段与GenBank发表的相应序列进行比较,绘制各基因的进化... 相似文献
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传染性法氏囊病毒VP_2在酵母细胞内的高效表达及其免疫原性研究 总被引:6,自引:0,他引:6
应用Pichia酵母表达系统高效表达了传染性法氏囊病毒 (IBDV)VP2 基因片段。首先用OLIGO设计 1对引物P5、P6 ,以插入IBDVVP2 基因的 pUC19为模板 ,扩增出带有终止密码子的 1.5kb片段 ,将此片段正向亚克隆到 pPICZA表达载体上 ,将构建好的载体pPICVP2 用SacI内切酶线性化后 ,转染酵母PichiapastorisGS115细胞 ,经PCR鉴定 ,筛选出 5 0多个重组子。分别用甲醇诱导后 ,经SDS PAGE凝胶电泳、琼脂扩散试验、Dot ELISA检测 ,得到 9个不同程度表达 4 1kuVP2 活性蛋白的阳性重组子。经凝胶薄层扫描仪分析 ,表达蛋白占酵母细胞总蛋白的最高比率为 16 % ,表达量为 0 .6 2 0 8g·L-1。表达产物免疫SPF鸡可诱导产生特异性抗体 ,并能保护鸡抵抗超强毒致死性攻击 ,具有良好的免疫原性。 相似文献
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2017年在江苏省野生豆雁粪便中分离得到1株H6N1亚型禽流感病毒A/Anser fabalis/Jiangsu/J746/2017(H6N1)(J746)。本研究对J746进行了全基因组测序,并对其进行了遗传进化分析。遗传进化分析结果表明:与HA和NA基因同源性最高的毒株为A/wild waterfowl/Korea/F14-5/2016(H6N1),同源性为99.4%。HA基因与流行于韩国、日本和孟加拉的N1、N2、N8亚型毒株处于同一分支,NA基因与韩国野生水禽的H6、H7亚型毒株处于同一分支,PB2基因与中亚及东亚地区低致性病毒株处于同一分支,PB1基因和NP基因与流行在东南亚的低致病性毒株处于同一分支,PA基因和M基因均处于欧亚分支,但PA形成了独立的小分支,NS基因与分离于中国中南部和日本的毒株聚集在一起。氨基酸位点分析表明,神经氨酸(NA)蛋白存在H274Y突变,该突变可增强病毒对神经氨酸酶抑制剂药物的耐药性;同时在PB2蛋白中发现与增强对小鼠致病性有关的L89V突变,在NS1蛋白中发现与增强对小鼠致病性、提高复制能力和改变宿主嗜性有关的P42S、L103F、I106M、N205S突变。综上所述,J746毒株基因组构成来源复杂,是由多个国家和地区形成的一株多元重组病毒。 相似文献
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为满足人们对营养保健和饮食多元化的强烈需求,同时提高冬季农田利用效率,中农富玉国际农业科技有限公司在玉林连续多年试验示范草莓种植,取得了可喜效果。公司在种植草莓的过程中,不但保障了当地果蔬市场的需求,而且增加了当地人们的采摘乐趣,同时经过反复摸索、认真对比,总结出了一套适合玉林地区农民需求的草莓种植技术;其中优良品种和优质种苗的选择、喷洒赤霉素破除种苗休眠、苗期施用复合肥+土壤调理剂促根改土、覆盖薄膜抑制杂草丛生等措施,保证了草莓的种植成功及优质高产;起垄高度、地膜铺设、棚室建造方面的探索与总结为草莓设施栽培提供了很好的借鉴。 相似文献
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CEF-9是传染性法氏囊病病毒超强毒株vvIBDV-Gx在鸡胚成纤维细胞上传代致弱过程中的第9代毒。我们对其分子生物学及生物学特性进行了研究,结果表明其VP2基因序列即具有超强毒的特性,又兼有部分致弱毒的特征;其致病性介于超强毒株和致弱株之间;在体内外均不稳定的,体外继续传代可继续致弱,回归体内可迅速返强。这说明CEF-9是vvIBDV驯化时,毒力强弱转化的中间过渡形式。 相似文献