奶牛S100A12基因克隆、原核表达及体外抗菌活性分析

克隆奶牛S100A12基因并在大肠杆菌中高效表达.采用RT-PCR扩增奶牛外周血白细胞中S100A12基因,构建原核表达载体pCold TF-S100A12,在大肠杆菌BL21(DE3)中IPTG诱导表达并纯化.SDS-PAGE和Westernblotting分析显示S100A12基因以融合蛋白形式表达,表达量占菌体总蛋白的46.7％,纯化的重组蛋白(80 mg/L).琼脂扩散法测定重组蛋白对乳腺炎主要致病菌大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的抗菌活性.结果显示:重组蛋白对大肠杆菌有抗菌活性,而对金黄色葡萄球菌无抗菌活性.本研究为S100A12蛋白抗体制备及基因功能研究奠定了基础.     

紫茎泽兰甲醇提取物对石膏样小孢子菌的抑制作用及其机制

通过硅胶柱层析、薄层层析和气相色谱-质谱联用方法,从紫茎泽兰(Ageratina adenophorais)甲醇提取物中分离、鉴定出3类化合物,分别为9-羰基-10,11-去氢泽兰酮(euptox A)、3-烯-2,7-二酮-杜松萜烯(CED)和烯烃类化合物。使用含毒介质法分别检测125、62.5、31.25、15.6、7.8、3.9、1.95和0.98 μg·mL^-1的euptox A和CED在48、72、96、120、144 h时对石膏样小孢子菌(Microsporidium gypsum)的抑制率。对euptox A处理过的石膏样小孢子菌开展碘化丙啶(PI)染色试验,并测定其细胞膜麦角固醇含量,以及细胞外液中总蛋白质和总磷的含量。结果显示,紫茎泽兰甲醇提取物中euptox A和CED具有一定的抗真菌活性,且以euptox A的效果更好。经euptox A作用后,石膏样小孢子菌的菌丝在荧光显微镜下呈现出强红色荧光,细胞外液中总蛋白质和总磷含量显著(P<0.05)增加,麦角固醇的含量显著(P<0.05)降低。据此推测, euptox A作用于石膏样小孢子菌后,可通过抑制其麦角固醇合成,使细胞膜完整性受到破坏,导致细胞内外物质交换紊乱,从而最终引起真菌细胞死亡。     

超低温冷冻对德国牧羊犬顶体酶类活性的影响

为了探讨超低温冷冻对德国牧羊犬透明质酸酶(HYD)、顶体酶(ACE)和酸性磷酸酶(ACP)活性的变化,试验分别对冷冻前后德国牧羊犬精子采用改良明胶底膜法、改良BNPNA法、磷酸苯二钠法对精子HYD、ACE和ACP活性进行研究。结果表明:超低温冷冻前后精子HYD、ACE和ACP活性极显著降低(P0.01);解冻后精子3种顶体酶类活性分别与精子活率和顶体完整率呈正相关,其中ACE活性与顶体完整率呈极显著正相关,相关系数为0.487(P0.01)。3种顶体酶类活性与畸形率均呈显著负相关(P0.05),ACE活性与精子顶体完整率的相关系数为0.487,相关度大于HYD(0.439和0.459)和ACP(0.440);而HYD活性与精子活率的相关系数为(0.404和0.423),相关度大于ACE(0.377)和ACP(0.369)。说明超低温冷冻使德国牧羊犬精子3种顶体酶类活性均显著降低;3种顶体酶类活性分别与精子活率和顶体完整率呈正相关,与畸形率呈负相关。     

乳酶LDH作为奶牛隐性乳房炎早期诊断指标的研究

为了筛选敏感的奶牛隐性乳房炎早期诊断指标,选择220头荷斯坦泌乳奶牛,分别采集乳汁进行体细胞计数和乳酸脱氢酶(LDH)活性测定.结果显示,隐性乳房炎奶牛乳汁中LDH活性显著高于健康奶牛(P＜0.05),乳汁体细胞数(SCC)与LDH活性呈正相关(r2=0.93).选择LDH活性>100 IU/L作为隐性乳房炎的判定阈值,诊断的敏感性为70%,特异性为82.3%,Jouden指数为0.52.结果提示,LDH可作为奶牛隐性乳房炎早期诊断指标.     

复方天然植物制剂对奶牛回乳效果及调控激素的影响

【目的】探究复方天然植物制剂对奶牛回乳效果及回乳期奶牛血清胰岛素(INS)、氢化可的松(HC)、生长激素(GH)和胰岛素生长因子1(IGF-1)含量的影响。【方法】试验于2016年1—6月进行,选择四川省某规模化奶牛场半封闭统一舍饲,体重(582±41)kg、第2—4胎中国荷斯坦奶牛150头。从中选取体况良好,健康,乳房、乳汁均正常,即将进入回乳期,产奶量为(15.42±0.71)kg的妊娠后期即将干乳的健康奶牛80头。随机分为A、B、C、D组,每组20头,均采用逐渐干奶法回乳,回乳开始当天记为第0天,A组为对照组,不饲喂复方天然植物制剂。B、C、D组均从回乳开始第1天,每日上午8:00分别饲喂复方天然植物制剂400、500、600g,回乳完成后停止饲喂复方天然植物制剂。复方天然植物制剂由麦芽,朴硝,升麻,柴胡,香附,薏仁,蚕蜕,白术,黄芩,知母,苏梗,芡实,五味子,蒲公英,甘草等按一定比例组成。分别采集奶牛回乳期第0、1、3、5、7、9和11天尾静脉血,置于未加抗凝剂的离心管中,室温下静置1h,置离心机352×g离心10min,转移上层血清于EP管中,-20℃冻存。采用双抗体夹心酶联免疫吸附技术(ELISA)法检测血清INS、HC、GH和IGF-1含量,并记录回乳期奶牛单日产奶量。【结果】A、B、C、D 4组奶牛回乳时间分别为11、7、5、5天。各组回乳期奶牛血清IGF-1和HC含量均呈下降趋势,且对照组下降趋势较各复方天然植物制剂组慢,复方天然植物制剂组血清IGF-1、HC和GH含量在回乳期后回升,对照组血清INS含量上升趋势较各复方天然植物制剂组慢,第0至1天,各组奶牛血清HC、IGF-1和GH含量差异均不显著(P0.05);第3—7天,A组奶牛血清HC、GH和IGF-1含量极显著高于B、C、D组(P0.01),而血清INS含量极显著低于B、C、D组(P0.01);第9天,A、D组奶牛血清HC含量均显著高于C组(P0.05),A、B组奶牛血清GH和IGF-1含量均极显著低于C、D组(P0.01),A组奶牛血清INS含量极显著低于B、C、D组(P0.01);第11天,A组奶牛血清HC、GH和IGF-1含量极显著低于B、C、D组(P0.01),A组奶牛血清INS显著低于D组(P0.05),但极显著低于B、C组(P0.01);C、D组奶牛血清IGF-1、GH、HC和INS含量在整个回乳期均差异性不显著(P0.05)。在奶牛回乳期,产奶量、HC、GH和IGF-1两两间均呈极显著正相关(P0.01),INS与产奶量、HC、GH和IGF-1均呈极显著负相关(P0.01)。【结论】复方天然植物制剂能显著促进回乳期奶牛回乳,饲喂500g/日复方天然植物制剂,奶牛回乳时间为5d,回乳效果即可达到最佳。回乳期奶牛血清INS、HC、IGF-1含量和产奶量变化两两间均呈极显著相关,IGF-1、GH和HC对奶牛回乳起负向调控功能,而INS对奶牛回乳起正调控作用。     

一例犬创伤性膈疝的诊疗

<正>腹腔内脏器官通过天然或外伤性横膈破裂孔突入胸腔,称为膈疝,疝内容物以胃肠和肝脏多见,犬猫均有发生。本病分为先天性和后天性两类。先天性膈疝的发病率很低,是膈的先天性发育不全或缺陷,腹膜腔与心包腔相通或膈的食道裂隙过大所致。后天性     

蛋白质组学及其在奶牛乳房炎研究中的应用

蛋白质组学是功能基因组学的重要组成部分,已被广泛应用于人类疾病等相关研究领域。二维凝胶电泳、质谱和生物信息学是蛋白质组学研究的三大关键技术。文章概述了蛋白质组学研究技术的最新进展和白细胞蛋白质组学、微生物蛋白质组学、差异蛋白质组学的研究进展,以及蛋白质组学在奶牛乳房炎发病机理、诊断和防治等相关研究中的应用与前景。     

基于高通量测序技术分析奶牛场垫沙和橡胶垫卧床中的菌群差异

为探究奶牛场沙土垫层和橡胶垫层菌群特征及差异,分别采集四川省两个规模化奶牛场的沙土垫层样本和橡胶垫层样本各6份,利用高通量测序技术对16S rRNA基因的V4区进行测序和生物信息学分析。结果显示,两个奶牛场的卧床垫层12个样本共获得1 443 818条优化序列(clean reads),将相似度为97%的有效序列进行操作分类单元(operational taxonomic units, OTUs)聚类,共得到2 311个OTUs。在属分类水平上,沙土垫层优势菌属为不动杆菌属(Acinetobacter)、海杆菌属(Marinobacter)、里氏杆菌属(Riemerella)、棒状杆菌属(Corynebacterium)、节杆菌属(Arthrobacter);橡胶垫层优势菌属为棒状杆菌属(Corynebacterium)、藤黄单胞菌属(Luteimonas)、梭杆菌属(Fusobacterium)、盐单胞菌属(Halomonas)、弧菌属(Vibrio)。沙土垫层样本中不动杆菌属(Acinetobacter)、里氏杆菌属(Riemerella)的相对丰度显著高于橡胶垫层样本(P<...     

奶牛胎盘还原性多肽不同蛋白酶酶解方法建立与优化

为高效制备奶牛胎盘还原性多肽,试验选择自然分娩脱落健康中国荷斯坦奶牛新鲜胎盘,冰浴条件下12000 r·min-1匀浆化,分别采用木瓜蛋白酶和胃蛋白酶酶解,以奶牛胎盘组织匀浆为底物,基于Box-Behenken中心响应法,在底物浓度10％、30％、50％,酶底比1％、3％、5％,酶解时间3、5、7 h条件下制备胎盘多肽...