应用在大肠杆菌中表达的猪2型圆环病毒ORF2蛋白建立一种ELISA诊断方法

根据GenBank中猪2型圆环病毒(PCV2)序列(AY035820)，设计1对引物，并以包含PCV2全基因组的重组质粒pT-PCV为模板，扩增出含ORF2全基因的片段(709bp)，回收PCR产物，将其克隆入pMDl8-T载体，获得重组质粒pTORF2，并对其进行序列测定。重组质粒经Bal I和Sal I双酶切，回收ORF2基因，将其插入pGEX-KG的Sma I和Sal I位点间，构建原核表达质粒pGEXORF2，阳性重组质粒转化E．coli BL21(DE3)，进行原核表达。用此表达产物包被酶标板，建立EUISA诊断方法，并对临床676份送检血清进行了检测，结果表明其总阳性率为62．7％(424／676)，仔猪阳性率为38．9％(74／190)，肥猪阳性率为63．2％(84／133)，母猪阳性率为74．6％(249／334)，公猪阳性率为89．5％(17／19)。     

猪圆环病毒研究进展

猪圆环病毒（Porcine circovirus,PCV)是断奶猪多系统衰竭综合征（Postweaning multisystemic wasting syndrome,PMWS)的病原。本文对其流行病学、理化特性、致病机理、诊断方法及分子生物学作了较为全面的综述。     

小反刍兽疫在中国的流行趋势及应对措施

小反刍兽疫是由小反刍兽疫病毒感染小反刍兽的一种严重的急性、烈性、接触性传染病,以高热、口炎、胃炎、腹泻和肺炎为特征。该病呈全球性自西向东流行趋势,我国目前已有9省市发生该疫情,其他省份防控局面也颇为严峻,对我国畜牧业发展造成了极其严重的影响。论文对小反刍兽疫在中国流行趋势进行分析,并提出相应的防控措施。     

乙型脑炎病毒NS1蛋白亚单位疫苗制备及其免疫效果评价

为制备乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)NS1蛋白亚单位疫苗并评价其免疫效果,将JEV NS1基因克隆至杆状病毒表达载体,构建重组杆状病毒。将重组杆状病毒感染High5细胞,收集培养基上清,并用镍柱亲和方法纯化NS1蛋白。将纯化的NS1蛋白与弗式佐剂制成亚单位疫苗,并通过小鼠免疫接种和攻毒模型评价该疫苗的免疫效果。结果表明,50,100,200μg/只剂量的亚单位疫苗免疫组的保护率分别为70%,80%,90%;同时,较非疫苗免疫组,NS1亚单位疫苗免疫可以显著降低小鼠脑组织中的病毒载量和炎症因子的表达,减轻小鼠的神经症状和脑部病理损伤。以上结果表明NS1蛋白作为亚单位疫苗具有较好的免疫保护效果,具有开发为JEV新型疫苗的潜力。     

siRNA对乙型脑炎病毒复制的抑制效果

以JEV的NSl基因mRNA为靶序列,设计合成了4个siRNA序列,构建了各自的表达质粒pS-NSlA、pS-NSlB、pS-NSlC和pS-NSlD.通过间接免疫荧光、Western blot检测、RT-PCR和病毒空斑检测等方法对这些siRNAs抑制JEV复制的效果进行了评价.结果表明4个siRNA表达质粒均对JEV在细胞中的复制具有不同程度的抑制作用,其中pS-NSlC、pS-NSlD有显著的抑制作用.说明针对NSl基因的siRNAs可以有效抑制JEV的复制,并有望成为应对JEV感染的治疗方法.     

猪圆环病毒(PCV)序列分析与进化

从 Gen Bank数据库下载了世界各地分离的猪圆环病毒基因组全序列 ,并对其进行多重比对 ,绘制系统进化树 ,发现来自同一国家或地区的 PCV毒株亲缘关系较近。提取 PCV ORF1编码的蛋白质序列 ,进行多序列比较 ,分析保守氨基酸序列 ,搜索结构域相似序列 ,结果发现玉米线条病毒属与 PCV的起源有密切的关系。此外 ,在数据处理过程中通过自编程序结合互联网及免费软件 ,能迅速进行大规模序列比较分析 (35个序列以上 ) ,提高了生物数据分析处理的速度。     

猪圆环病毒研究进展

圆环病毒是近年来兽医界广泛关注的新发现畜禽类病毒之一,具有重要的经济意义。在2000年墨尔本国际猪病会议(IPVS)和1999年北京国际禽病会议(ICEVP)上均成为受到重视的热门话题。圆环病毒除引起畜禽机体发生原发感染甚至死亡之外,更重要的是使感染畜禽的免疫功能受到损害,结果导致机体抵抗力下降,易遭受其它病原的并发或继发感染,使病情加重,造成更大损失。这种可导致免疫抑制的病毒,由于常以亚临床感染的形式出现,常易为我们所忽视,     

中国小反刍兽疫疫情分析

为分析中国PPRV毒株分子演变特点和疫情传播路线,从NCBI下载中国和世界其他国家全部PPRV毒株N和F基因全序列,应用分子生物学软件,并结合疫情发生的地理位置进行系统分析。结果显示,中国西藏阿里地区PPRV毒株之间核苷酸同源性为100%,其与西藏那曲地区毒株核苷酸同源性为99.9%;中国毒株与其他国家毒株F基因核苷酸序列分析显示,同源性为89.7%~98.8%,同源性最低的为科特迪瓦1989年毒株,同源性最高的为孟加拉国2010年毒株;N基因核苷酸序列分析显示,同源性为69.5%~98.5%,同源性最低的为朝鲜2002年毒株,同源性最高的为印度1995年毒株;F和N基因系统进化关系分析均显示,中国西藏3株PPRV均属于基因Ⅳ系;截止2014年3月30日,中国由西至东9省份发生该疫情。更加全面的分析结果,有待于更多PPRV流行毒株N或F基因全序列在GenBank的公布。     

斑点叉尾鮰病毒多克隆抗体的制备及其生物活性鉴定

利用斑点叉尾鮰卵巢细胞增殖斑点叉尾鮰病毒,然后将经过超速离心纯化的病毒免疫4周龄BABL/C雌鼠.每2周免疫1次,第4次免疫2周后,经眼眶采血,分离血清,通过酶联免疫吸附试验检测其抗体效价,并利用间接免疫荧光试验和与病毒孵育试验检测所制备多克隆抗体的生物活性.结果表明,制备的多克隆抗体ELISA效价为1:25 600,...