乙醇固定中华绒螫蟹组织的DNA提取方法

<专刊>= <栏目>=研究简报 <图片>=N <表格>=N <连载>= <来源>= <中图分类号>=Q523；Q959．223 <主题分类>= <行业分类>= <本刊专题>= <本刊编号>= <基金项目>= <注释>= <参考文献>= <责任编辑>= <备注1>= <备注2>= <备注     

桑园土壤和柔叶叶面丝状真菌优势属分布

对桑园生态系统中的丝状真菌进行初步分析表明，在表土和浅层土中分布着含量较高的毛霉、曲霉、青霉、木霉、根毒等丝状真菌，同时还含有少量能使植物致病的镰孢霉、葡萄孢霉、枝孢霉等。在桑叶叶面上附生的丝状真菌主要类型与土壤中相近，但木霉、根霉、葡萄孢霉、枝孢霉等含量在两者存在较大差异。     

网络版蚕病诊断与防治专家系统设计

为普及家蚕病害的基础知识,辅助提高蚕病诊断的准确率和蚕病防治技术水平,采用微软成熟的IIS+ASP+ACCESS技术建立了基于Internet的包含19种主要家蚕病害在内的诊断与防治专家系统(http:∥211.90.162.131:8099/)。该系统包括蚕病基本知识、识别与诊断知识、发病规律与防治知识、辅助诊断系统以及咨询与影像系统。计算机模糊判断法是辅助诊断系统的核心模块,该模块通过将专家经验转化为可供计算的模式概率值,建立数据库,即可从已知的病征(事实、证据)出发,采用模糊产生式诊断规则给出模糊断言的最大值作为诊断结果,并自动提出相应的防治措施。     

中国野桑蚕mtDNA中A+T丰富区片段的克隆及序列分析

对中国野桑蚕mtDNAA +T丰富区片段进行了克隆和序列分析。在所测定的 72 0bp左右的片段中 ,A +T含量为 92 0 8% ,与不同家蚕品种的mtDNA相近 ,中国野桑蚕与家蚕之间的核苷酸序列呈高度同源性 (98%以上 ) ;但与日本野桑蚕相比 ,中国野桑蚕mtDNA的A +T丰富区片段 ,缺少 2个 12 6bp的重复单位 ,A +T含量低 0 9% ,核苷酸序列同源性也较低 (72 % )。该片段与中系家蚕mtDNA比较 ,有 15个变异位点。对mtDNAA +T丰富区的中国野桑蚕和日本野桑蚕及中系、日系和韩国的 4个家蚕品种进行聚类分析表明 ,日本野桑蚕有可能由中国野桑蚕分化而来。     

家蚕JAK/STAT信号通路相关基因克隆与分析

【目的】鉴定家蚕JAK/STAT信号通路组成原件,并预测家蚕JAK/STAT信号通路主要相关基因的功能。【方法】在电子克隆的基础上,通过RT-PCR获得家蚕JAK/STAT信号通路的主要相关基因;利用在线软件对相关蛋白进行结构域分析;基于microarray数据库或qPCR分析各基因的组织表达特征。【结果】克隆了家蚕JAK/STAT信号通路主要相关基因,包括BmSTAT、BmHOP、BmSOCS2、BmSOCS5A、BmSOCS5B、BmSOCS6、BmDRK、Bmken、BmPIAS1、BmPIAS2以及BmPI3K,但没有能克隆到果蝇Upd1、Upd2和Upd3的同源体基因。序列分析显示BmHOP具CRD_FZ、Kringle、转膜区域和PKc超家族蛋白激酶催化结构域TyrKc;BmSTAT有2种亚型,均具SH2、STAT_bind、STAT_int和STAT_alpha结构域;在克隆的BmSOCS家族的3个基因中,BmSOCS2A和BmSOCS6A具典型的SH2和SOCS结构域;BmDRK由SH3和SH2两种结构域形成了SH3-SH2-SH3串联结构;BmKen存在BTB和锌指结构域,BmPIAS1和BmPIAS2具有LCR结构域,BmPI3K具有2个SH2结构域。【结论】成功克隆了家蚕JAK/STAT信号通路主要相关基因。相关蛋白的保守结构域分析显示,在家蚕JAK/STAT信号通路中,BmHOP是JAK激酶的一种,可以磷酸化BmSTAT转录因子,激活靶基因转录;BmSOCS、Bmken、BmPIAS1以及BmPIAS2对JAK/STAT通路起负反馈作用。     

四种甲壳动物超氧化物歧化酶活性检测初报

本文用NBT比色法检测了罗氏沼虾、克氏螫虾、无齿相手蟹、锯齿华溪蟹不同组织的超氧化物歧化酶（SOD）活性。结果显示,肝胰腺中SOD活性高于其它组织,无齿相手蟹略高于其它三种,雄性个体略高于雌性个体。     

草鱼出血病病毒VP6蛋白的原核表达、纯化及免疫效果

为了探讨草鱼出血病病毒(GCRV)VP6亚单位疫苗对草鱼出血病的免疫保护作用,将vp6基因克隆进原核表达载体pET-28a(+),构建了重组质粒pET28a(+)-VP6。SDS-PAGE和Western-blotting显示,重组VP6蛋白的分子量约为43 ku,主要以包涵体形式存在,重组蛋白占菌体总蛋白的20%左右;Ni2+柱纯化后的重组蛋白,以每尾500μg肌肉注射免疫草鱼(14～20 cm,60～120 g),并在第14、21、28、49、70天通过间接凝集反应检测抗体水平,结果显示,免疫注射后第14天可检测到鱼体产生的特异性抗体,第21天达到最高峰,第70天仍可检测到抗体的存在;免疫注射第21天人工接种GCRV,免疫后的草鱼对出血病的保护力达100%。     

TTC快速药敏试验在虾细菌病诊断中的应用

针对罗氏沼虾细菌性病原菌进行TTC快速药敏试验，包括平板药物筛选试验和微孔板定量试验。结果表明，在30种抗菌药物中，痢特灵和庆大霉素的药效最好，其最小抑菌浓度（MIC）分别为12.5μg/mL和25μg/mL，试验所需时间是常规药敏试验时间的25%。     

表达短lef-1dsRNA转基因家蚕对BmNPV的抵抗能力与主要经济性状

为了提高家蚕对核型多角体病毒(BmNPV)的抵抗能力,将带有BmNPV晚期表达因子基因(lef-1)dsRNA表达盒和新霉素抗性基因(neo)表达盒的转基因载体pigA3-LEF-Neo通过精子介导法导入家蚕卵,经G418和GFP双重筛选并结合分子生物学鉴定,证实获得了转基因家蚕。对G6代转基因家蚕2龄幼虫接种BmNPV,结果显示转基因家蚕的死亡率比正常家蚕(对照组)下降了10～30个百分点,表明转基因家蚕对BmNPV的抗性有所提高;对接种BmNPV的5龄转基因家蚕A、B系统的定量PCR检测结果显示,2个系统体内的lef-1 mRNA转录水平比对照组平均降低了72倍和26.5倍,最高下降了104倍,进一步表明表达lef-1 dsRNA的转基因家蚕抑制了BmNPV lef-1基因的表达。转基因家蚕的饲养成绩显示其全茧量、茧层量和茧层率等主要经济性状与正常家蚕无明显差异。     

蟹源温和气单胞菌的体外中药药敏试验

近年来有关温和气单胞菌所致水产动物疾病的报道逐年增加,在蟹的养殖中,疾病的预防和治疗是相当重要的。由于水产养殖中抗生素的使用受到一定的限制,探讨中草药对各种致病菌的抑制作用及其机制变得越来越重要。由于细菌的高繁殖速度以及水体的易传播性,对细菌性疾病的最有效控制方法是重在预防。由于中草药的毒副作用相对较小,而且不易引发细菌耐药性,有些中草药还具有免疫增强作用,使得中草药在水产养殖动物的防病抗病方面展现出越来越广阔的应用前景。1材料与方法1.1试验材料虎仗、白芍、龙葵、败酱草、牛蒡、鱼腥草、肿节风、大青叶、板…