猪视网膜上皮细胞的分离培养与鉴定

旨在建立猪视网膜上皮细胞(PRECs)的分离纯化及传代培养方法。采用组织块贴壁法和消化法分离猪视网膜细胞(PRCs),经差速消化法纯化细胞,筛选确定最优培养条件并鉴定细胞生物学特性。结果：消化法分离的细胞约1周长成单层,组织块贴壁法约2周长满单层,但活力更高;PRCs主要形态为长梭形和大理石样,呈现为2种形态细胞混合生长;差速消化法纯化细胞后,经间接免疫荧光鉴定细胞角蛋白(CK18和CK19),确定该细胞为上皮细胞;细胞接种猪圆环病毒2型(PCV2)可产生明显病变。综上,本试验成功分离获得PRECs,含胎牛血清浓度为12%的α-MEM为最优培养基,该细胞支持PCV2增殖并产生明显的细胞病变,为进一步建立稳定传代的猪视网膜上皮细胞系及研究PCV2感染及致病机理提供基础。     

猪圆环病毒2型广东株全基因组的克隆与序列分析

根据GenBank已发表的猪圆环病毒2型(PCV2)全基因组序列,设计2对特异性引物,对广东省不同地区规模化猪场采集的疑似断奶仔猪多系统消耗综合征(PMW S)组织病料进行了PCV2全基因组克隆和序列分析.结果表明,PCV2核苷酸序列较稳定,不同地区6个PCV2毒株全基因组序列均由1 767 bp组成,彼此间核苷酸序列相似性达95.3%~99.8%,亲缘关系密切;与GenBank已发表的国内不同地区PCV2参考毒株的相似性介于70.1%~99.1%;与欧洲各地区毒株的相似性介于67.7%~98.8%;其中与美国的毒株(AY094619)差异性最大,介于69.4%~70.8%之间.     

鸡免疫抑制性疾病的免疫抑制机理研究

病毒感染机体后可直接或间接损害免疫系统的细胞,引起鸡群免疫应答功能不全,导致免疫抑制,使机体免疫力低下,造成疫苗免疫失败,并增加继发感染的发病率.本文针对鸡的几种主要病毒性免疫抑制性疾病的作用机理进行综述,但在临床实践中,多以二重感染或多重感染存在,还可以继发其他感染,如何预防和控制此类疾病还有待于进一步研究.     

基因芯片快速检测奶牛乳房炎主要致病菌的应用

奶牛乳房炎是对奶牛业影响最大的疾病之一，主要由多种致病菌感染引起，它不仅造成重大的经济损失，还影响到乳的品质，危及人的健康。常规的检测方法和PCR法在乳房炎主要致病菌的检测鉴定方面都存在不同程度的局限性。随着人类基因组计划（human gene project，HGP）的胜利完成，已积累了大量的基因序列数据。     

复合酸化剂对热应激文昌鸡生长性能及血清生化指标的影响

为研究复合酸化剂对热应激文昌鸡生长性能及血清生化指标的影响,选取遗传背景相同、体重相近(634.11±1.77)g的45日龄文昌鸡384只,随机分为4个处理组,每个处理组设4个重复,每个重复24只。分别饲喂添加0、1、2和3 g/kg复合酸化剂的基础日粮。试验期为39 d。结果显示:(1)2 g/kg酸化剂组末重和日增重均显著高于对照组(P0.05),料重比显著低于对照组(P0.05);(2)与对照组相比,2 g/kg酸化剂组白蛋白水平显著升高(P0.05),尿酸水平显著降低(P0.05)。研究表明,添加2 g/kg复合酸化剂可改善热应激文昌鸡生长性能。     

海南省规模猪场猪传染性胸膜肺炎的血清学调查

为了解海南省规模猪场猪传染性胸膜肺炎(PCP)的感染情况,采集海南省8个市县16个不同规模猪场血清样品1 286份,用ELISA方法对猪胸膜肺炎放线杆菌(APP)ApxⅣ抗体进行检测,分析APP的感染情况。结果显示,1 286份猪血清样品共检出阳性样品436份,抗体阳性率为33.90%。其中,检测母猪血清326份,抗体阳性率为47.85%;检测哺乳仔猪血清324份,抗体阳性率为37.65%;检测保育猪血清316份,抗体阳性率为18.99%;检测育肥猪血清320份,抗体阳性率为30.63%。8个市县均有APP感染,其中文昌市APP抗体阳性率最高;不同规模猪场均有APP感染,其中中型规模猪场APP抗体阳性率最高;不同品种猪均有APP感染,其中杜长陆三元杂猪APP抗体阳性率最高。说明PCP在海南省部分规模猪场中普遍存在,对猪场进行PCP的控制是十分必要的。     

两株猪圆环病毒2型ORF2基因的克隆和序列分析

根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV-2)ORF2基因序列,设计一对引物,从分离的PCV-2 GZ株、HN株的细胞培养物中扩增出ORF2基因(702 bp).将此基因片段克隆入pMD18-T载体,筛选获得重组质粒pMD-ORF2,并对其测序.结果表明,所克隆的ORF2基因与其他PCV-2的ORF2基因核苷酸序列同源性在90.6%～99.6%之间,推导的氨基酸序列同源性在88.9%～98.7%之间.     

PRRSV ZQ-GD-2010株的分离及ORF5和ORF7基因的序列分析

为了给研制基因工程疫苗选取毒株奠定基础,研究采集广东肇庆某猪场疑似患高热症猪的病料,通过RT-PCR检测、病毒分离传代,证实分离到1株猪繁殖与呼吸综合征病毒,命名为ZQ-GD-2010株,并对其ORF5和ORF7基因进行序列测定,绘制遗传进化树。结果表明:该毒株为美洲型,其ORF5和ORF7基因核苷酸与近年来我国分离到的美洲型毒株的相似性为96%～100%,而与欧洲型毒株LV株的相似性仅为58.9%～62.8%;其与2007—2009年国内分离株的遗传演化关系较近。     

猪瘟的流行特点、免疫失败原因及防制对策

猪瘟(SF)又称古典猪瘟(CSF),是由猪瘟病毒(CSFV)引起的一类烈性上报传染病.其特点是传染性强,发病率和死亡率较高,偶有耐过猪只则成为僵猪,失去饲养价值,因其严重威胁着养猪业的发展而倍受重视.     

鸡柔嫩艾美耳球虫HN株3-1E基因的原核表达与鉴定

根据已报道的柔嫩艾美耳球虫3-1E基因序列设计引物,以孢子化卵囊总RNA为模板,用RT-PCR方法扩增得到1条特异片段,将扩增产物克隆至p MD-18T载体,转化感受态菌JM109,经酶切鉴定获得阳性重组质粒并对其进行测序。测序结果与已发表的国内外相关虫株的3-1E基因序列比较,核苷酸的同源性均在99.2%~99.8%,氨基酸的同源性均在98.2%~100%。然后将重组质粒和表达载体p GEX-4T-1分别用Xho I和EcoR I酶切后构建重组表达载体p GEX-3-1E,并将其转化入大肠杆菌BL21中,提取质粒经酶切和PCR鉴定正确后,用IPTG诱导表达。表达产物经SDS-PAGE和Western blot检测显示,3-1E基因在大肠杆菌中成功表达,融合蛋白的分子量为44.7 ku,诱导表达5 h的蛋白表达量可达到30%以上。