河南某规模化猪场仔猪腹泻病的诊疗体会

<正>自2011年10月份开始,全国各地尤其是南方地区,如广东、广西、福建、浙江、海南、湖南,以及东北三省等地,猪场仔猪发生腹泻疫情比较严重,仔猪死亡率很高(个别发病场连续几个月哺乳仔猪成活率不足50%),包括一些管理及防疫做得较好的猪场也有发生。有些场发病持续时间长达数月还没稳定下来,有些猪场暂时稳定了,2～3周后又有反复发病的情况,给养猪生产带来严重危害。笔者分析了一个典型发病猪场的成功控制经验,以期为规模化猪场有效防控仔猪腹泻疫     

猪德尔塔冠状病毒研究进展

猪德尔塔冠状病毒（Porcine Deltacoronavirus,PDCoV）为 δ 冠状病毒成员,是 2012 年新发现的 一种感染猪的冠状病毒,临床特征是引起母猪和仔猪腹泻症状,以呕吐、水样腹泻、脱水和食欲下降为基本特征, 发病仔猪中的死亡率为 30%~40%。该病于 2014 年在美国猪场爆发,同年在我国内陆爆发,随后几年该病已经 蔓延至世界上许多国家和地区,给养殖业带来了巨大的经济损失。目前针对 PDCoV 已经建立了一系列检测方法, 检测结果显示 PDCoV 既存在单独感染,也存在与其他猪肠道冠状病毒混合感染情况,然而目前针对 PDCoV 的 致病机制研究较少,对该病的认识不够全面,仍没有有效疫苗防控该病的发生。综述了 PDCoV 基因组特征、 蛋白功能、流行病学、遗传进化分析、检测方法及防控措施等方面的研究现状,以期为 PDCoV 致病机制研究 和临床研究提供借鉴。     

慢病毒介导shRNA干扰MAT2A与MAT2B基因抑制猪肌内脂肪细胞分化

【目的】腺苷甲硫氨酸转移酶(MAT)在ATP的作用下,催化生成体内重要的甲基供体S-腺苷甲硫氨酸(SAMe)。通过构建慢病毒介导的pLenti-H1干扰载体,探究腺苷甲硫氨酸转移酶MAT2A和MAT2B对猪肌内脂肪细胞分化的影响。【方法】无菌条件下采集3—7日龄小猪背最长肌,采用差速贴壁法分离猪肌内脂肪细胞。根据GenBank中猪MAT2A基因序列（Accession No.NM_001167650.1）和MAT2B基因序列（Accession No. NM_001142832.1）,获得其CDS序列。利用Invitrogen 公司在线软件BLOCK-iTTM RNAi Designer分别设计shRNA靶序列, 将合成的单链寡核苷酸退火形成双链,与经过Bam H I和Xho I (TaKaRa) 双酶切后的pLenti-Hl载体连接,转化,并提取质粒进行酶切和测序鉴定。采用X-tremeGENE-HP DNA转染试剂与测序成功的重组质粒以及包装质粒（CMV-Δ8.9和CMV-VSVG）共转染293T细胞,48 h后观察绿色荧光蛋白(GFP)的表达,并进行滴度测定。在猪原代脂肪细胞密度达到70%—80%时,侵染病毒;细胞密度融合时诱导分化。提取分化第8天的猪肌内脂肪细胞的RNA,按照反转录试剂盒操作说明进行反转录,合成cDNA第一链。采用primer primer 5软件设计MAT2A、MAT2B、PPARγ、aP2、CEBP/α、β-actin基因的定量引物,实时定量和Western blot试验检测MAT2A和MAT2B基因的干扰效率。油红O染色和实时定量鉴定MAT2A和MAT2B基因对猪肌内脂肪脂质积累的影响。【结果】酶切及测序证明重组慢病毒载体pLenti-Hl-MAT2A/MAT2B构建成功;包装的慢病毒sh-MAT2A和sh-MAT2B病毒滴度分别为6.7×10 ⁷和7×10 ⁷ pfu/mL,侵染肌内脂肪细胞72 h后,可出现90%的绿色荧光蛋白(GFP),表明所包装的病毒可满足侵染猪前体肌内脂肪细胞需要。实时定量结果显示其显著抑制了MAT2A和MAT2B的mRNA水平表达,其干扰效率分别在70%和60%以上;进一步采用Western blot试验及蛋白分析表明,干扰MAT2A基因后,MAT2A蛋白表达水平降低40%左右,差异达到极显著水平(P<0.01);干扰MAT2B基因后,MAT2B蛋白表达水平降低25%左右,差异达到显著水平(P<0.05)。油红O染色和吸光度定量结果显示,与sh-scramble对照组相比,干扰MAT2A和MAT2B基因后,脂滴聚积能力显著抑制猪肌内脂肪细胞脂质积累。实时定量结果显示,干扰MAT2A和MAT2B基因抑制成脂标志基因PPARγ,aP 2及CEBP/α的表达。 【结论】成功构建了猪MAT2A和MAT2B基因的慢病毒sh-MAT2A和sh-MAT2B干扰载体。获得的重组慢病毒感染细胞后,能有效降低猪肌内前体脂肪细胞内MAT2A和MAT2B基因的mRNA和蛋白水平表达;进一步试验证明,干扰MAT2A及MAT2B基因后,显著抑制猪肌内脂肪细胞的脂质积累以及成脂关键基因表达。     

加强重视动物源细菌的耐药性监测

本文从耐药性的危害、耐药性监测的意义、加强耐药性监测的措施等方面论述,呼吁政府和畜牧兽医工作者加强重视畜牧养殖业中抗菌药物的耐药性监测。     

仔猪猪瘟病毒和大肠杆菌混合感染的鉴别与治疗

气候突然变化会造成仔猪应激,引发大肠杆菌在体内增殖,使仔猪机体抵抗力下降,进而引发与猪瘟混合感染;借助实验室化验、检测可作出鉴别,采取综合防治措施可控制病情。     

断奶仔猪链球菌病并发硒缺乏症的诊断与防治

近年来，集约化养猪业得到了较大地发展。由于品种引进，生猪频繁交易等原因，使得过去很少发生的猪链球菌病严重流行，损失惨重。2000年7月份，在我省某种猪场断奶仔猪连续发病和死亡，后经综合诊断，确诊为仔猪链球菌病并发硒缺乏症，现将有关情况报告如下：1 发病情况2000年4月初，某年生产长大二元种猪3000头，商品猪4000头之工厂化养猪场保育舍开始出现断奶(28日龄断奶)后1～2周突然发病死亡的病例，开始只是零星发病，发病率不足1％，没有引起重视，仅在饲料中添加土霉素0.04％3至5天，发展至7月份，发病剧增，其后一个月内三批断奶仔…     

高职高专院校宠物医疗专业理论教学体系与课程设置模式的研究

高职院校宠物医疗专业教学体系与课程设置改革一直是备受关注的热点问题之一。宠物医疗专业理论教学体系与课程设置在借鉴兽医教学体系的基础上,重点解决了宠物医疗专业合理课程的综合与整合、加大实践教学比例、突出创新思维和创业意识的培养、专业课程教学内容的更新和优化公共课以及调整专业基础课与专业课的比例等问题,确定了宠物医疗专业总学时2910学时,其中,公共课660学时,占22.7%;专业基础课550学时,占18.9%;专业课630学时,占21.7%;生产实践课680学时,占23.4%;专业选修课390学时,占13.3%。实验、实训、生产实践与实习教学学时1244学时,占总课时的42.7%;专业基础课、专业选修课和专业课理论总学时736学时,专业理论教学与专业实践教学比例为1:1.7,提高了实践教学比重。根据社会对高职院校宠物医疗专业人才的需求,确定了高职院校宠物医疗专业的公共课、专业基础课与专业课设置模式比例为660学时:550学时:630学时。通过对四所高职院校毕业学生的综合效果分析,评价为优秀的为66%,良好的有34%,优良率为100%。我们认为制定的宠物医疗专业教学体系和课程设置模式,在今后一段时期内的运用是可行的。