大肠杆菌F18菌毛E亚单位基因克隆与序列分析

根据已发表的F18ab菌毛E亚单位的基因序列(fedE／ab)，设计1对引物，利用PCR技术从10株大肠杆菌(F107／86、YCED1、YCED2、C、D、E、12F、2134P、8199、8813)中分别扩增到1个片段，并克隆至pGEM-T载体，获得重组质粒TF107E、TYCED1E、TYCED2E、TCE、TDE、TEE、T12FE、T8813E、T8199E、T2134PE。琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析表明，这10个片段大小均为516bp。通过与已发表的fedE／ab序列进行比较，发现这10个菌株的fedE序列高度同源，其中F107／86、YCED2、C、D、E、8813、8199、2134P的fedE序列完全相同，只有YCED1株在第45位碱基处存在1个G—A转换、12F株在第316位碱基处存在1个G—A转换。这说明F18ab和F18ac菌毛的fedE基因相同，fedE是F18菌毛的保守性亚单位。     

猪三十九肽胆囊收缩素(CCK39)基因的克隆和表达

以猪十二指肠中提取的总RNA为模板，根据GenBank已发表的猪三十九肽胆囊收缩素（CCK39）基因序列设计1对特异性引物。用RT-PCR扩增CCK39基因的cDNA，纯化后克隆人pUC18载体，BamHⅠ／EcoRⅠ双酶切后插入pGEX-6P-1质粒获得原核表达载体。0．5mmol／L IPTG诱导表达并纯化产物，以纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备单因子血清；用抗GST抗体和自制的抗CCK39的单因子血清Westen blot检测融合蛋白。结果表明：成功地克隆出CCK39基因的cDNA，构建的原核表达载体pGEX-CCK39成功地表达约32kD的融合蛋白，抗GST抗体和抗CCK39单因子血清能识别融合蛋白，证明获得的融合蛋白具有较好的抗原性，为制备抗CCK抗体及研究CCK的各种生理功能提供大量、低廉和抗原性较强的胆囊收缩素。     

大肠埃希菌ETT2毒力岛ECs3703基因和HPI毒力岛irp2基因双重LAMP检测方法的建立

根据GenBank中大肠埃希菌ETT2毒力岛保守基因ECs3703和HPI毒力岛的保守基因irp2分别设计一套LAMP引物,在同一体系中进行LAMP扩增,通过对体系Mg2+、dNTP、内引物及反应温度和反应时间等进行优化,建立了在60℃恒温下对大肠埃希菌ETT2和HPI毒力岛进行同步检测的LAMP方法,并进行了特异性和灵敏性试验。结果显示,所建立的双重LAMP检测方法同时检测ETT2和HPI毒力岛大肠埃希菌检测限均可达到100fg,比常规PCR灵敏度高100倍。利用该方法对8株非大肠埃希菌进行LAMP扩增,结果均为阴性。用该方法对采集的20份临床样品进行检测,与双重PCR检测结果一致。结果显示,该双重LAMP方法可用于大肠埃希菌ETT2和HPI毒力岛的同步快速检测,可作为临床疫病诊断的有效手段。     

猪水肿病大肠杆菌分离、鉴定及药敏试验

本实验从疑似猪水肿病的病例分离到5株大肠杆菌,O抗原鉴定结果表明所有菌株均为O139血清型;应用F18ab菌毛单克隆抗体对这5株大肠杆菌能否表达F18ab菌毛进行了鉴定,结果表明其中2个菌株能表达F18ab菌毛;利用聚合酶链式反应(PCR)对志贺氏菌样毒素Ⅱ型变异体(SLT-Ⅱe)操纵子基因保守区进行了扩增,结果发现在能表达F18ab菌毛2个菌株中可扩增一段特异性序列。以上数据表明这2株大肠杆菌为致仔猪水肿病大肠杆菌。药敏试验表明这两株菌株均对氟哌酸、妥布霉素、庆大霉素、利福平等抗生素高度敏感。     

鸡蛋中沙门氏菌的快速检测

选择江苏省不同地区来源的鸡蛋296枚,分别取蛋黄蛋清混合液以沙门氏菌增菌液快速增菌.取增菌培养物100 μl,离心去上清后,重新悬浮于100 μl超纯水中;以煮沸法制备可能存在的细菌DNA模板.通过对沙门氏菌毒力岛SPI-3的mgtC基因的PCR快速检测,确定其中18.24%的鸡蛋为沙门氏菌阳性.通过与细菌分离检测结果对比,揭示该方法明显提高了沙门氏菌的检出率,表明PCR是一种快速、敏感和高度特异性的沙门氏菌检测方法,值得在畜产品沙门氏菌的检测中推广应用.     

大肠杆菌F18菌毛F亚单位基因的多样性分析

根据已经发表的F18ab菌毛F亚单位(FedF/ab)的基因(fedF/ab),设计一对引物,利用PCR技术从本实验室保存的10株大肠杆菌(F107/86、YCED1、YCED2、C、D、E、12F、2134P、8199、8813)中分别扩增到一段序列,并克隆至pGEM_T载体,获得重组质粒TF107F、TYCED1F、TYCED2F、TCF、TDF、TEF、T12FF、T8813F、T8199F、T2134PF。琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析表明,该10个序列大小均为903bp。通过与已发表的fedF/ab进行比较,可将这10个菌株分为2个主要遗传分支;其中F107/86、YCED1、YCED2、C、D、12F与fedF/ab具有高度同源性,属于fedF/ab;另外E、8813、8199、2134P虽与fedF/ab具有99.4%的同源性,推导的氨基酸序列具有98.3%的同源性,但通过基因树分析证明其已成为一个单独的分支,属于fedF/ac。     

表面表达猪水肿病毒素保护性抗原重组大肠杆菌激发仔猪黏膜免疫反应的研究

以菌体表面表达猪水肿病毒素保护性抗原(SLT-ⅡeB)的重组大肠杆菌(PZBSPAX),对1日龄、15日龄仔猪口服免疫,用ELISA法对口服免疫后10 d、15 d、30 d仔猪肠黏液中特异性SIgA和血清中特异性IgA、IgG进行检测,结果显示口服免疫猪能产生较高水平的肠黏液特异性SIgA及血清特异性IgA和IgG,证明该重组菌能有效激发肠道黏膜免疫反应,同时也能激发全身性体液免疫反应.     

羊食管阻塞诊治要点

<正>羊食管阻塞是由于食团、食块或异物突然阻塞食管导致。根据阻塞程度,临床上分为不完全阻塞和完全阻塞两种类型。该病通常是由于羊采食过多块根类饲料,吞咽过急或突然受到惊吓,导致食管被食物阻塞。病羊主要出现吞咽障碍,嗳气、流涎、摇头症状。一、病因分析1.原发性食管阻塞羊在采食块根类饲料时,如萝卜、马铃薯、甘蓝、甘薯、苹果或西瓜皮等,由于采食速度过快而出现阻塞;     

苏北地区肉羊寄生虫感染的检测与流行病学分析

为了解肉羊的寄生虫感染情况,本研究从江苏省肉羊产业技术体系的3个基地(高邮基地、睢宁基地、泗阳基地)的示范点羊场共采集了104份山羊粪便样品和40份绵羊粪便样品,通过虫种鉴定,分析2020年度的流行情况,为苏北地区制定肉羊寄生虫病的防治对策提供理论依据.结果发现96.15％的山羊感染寄生虫,其中96.15％感染球虫,5...