猪链球菌9型荚膜多糖cps9G基因的原核表达

本研究旨在克隆表达猪链球菌9型荚膜多糖部分抗原表位。设计1对引物,采用PCR法以猪链球菌9型河南分离株PY-2的基因组DNA为模板扩增出cps9G全基因序列。用限制性核酸内切酶BamHⅠ、XhoⅠ进行双酶切后,将其定向克隆到pET32a（＋）中,构建重组表达质粒pET32a—cps9G,并将其转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中进行诱导表达,并优化表达条件。结果表明,经1．2mmol／L IPTG诱导4h后SDS-PAGE分析表明,重组菌株表达出了约50700的融合蛋白条带,与预期一致。Western-blotting分析表明,该融合蛋白具有特异的生物学活性。这为以后建立快速、简便、特异的免疫学检测方法及制备单克隆抗体提供了较好的抗原,同时为研制猪链球菌亚单位疫苗和诊断试剂盒奠定了基础。     

牛病毒性腹泻/粘膜病的研究进展

牛病毒性腹泻／粘膜病（Ｂｏｖｉｎｅｖｉｒａｌ　ｄｉａｒｒｈｅａ／ｍｕｃｏｓａｌ　ｄｉｓｅａｓｅ，ＢＶＤ／ＭＤ），简称牛病毒性腹泻（ＢＶＤ）或牛粘膜病（ＢＭ），是由牛病毒性腹泻／粘膜病病毒（ＢＶＤ／ＭＤＶ）感染牛引起的以发热、粘膜糜烂溃疡、白血胞减少、腹泻、咳嗽及怀孕母牛流产或产出畸形胎儿为主要特征的一种传染病。１９４６年Ｏｌａｆｓｏｎ等首次报道病毒性腹泻病。１９５３年Ｒａｍｓｅｙ和Ｃｈｉｖｅｒ发现粘膜病。１９６１年Ｇｉｌｌｅｓｐｉｅ等研究证明，这两种病毒是有共同抗原性的同种病毒，１９７１年由美国…     

猪源沙门菌分离鉴定与耐药性分析

2015年9月和2016年10月,河南省两猪场暴发保育仔猪的急性死亡,为了弄清原因,采集心血、肺脏和肝脏病料,通过常规分离、PCR鉴定、生化试验,分离到2株沙门菌,分别命名为HenanSep1、HenanSq2N。小鼠致病性试验结果显示,每只小鼠接种0.2mL菌液,其浓度为5×10~8 CFU/mL,均导致小鼠发病,但是无死亡。选取21种药物,采用K-B法对2个分离株进行药物敏感性测定。药敏试验结果表明,2株沙门菌对头孢噻呋、氨苄西林、磺胺甲恶唑/甲氧苄啶、磺胺异恶唑、氯霉素、恩诺沙星耐药,对美罗培南、亚胺培南、氨曲南、多黏菌素B、土霉素敏感,对其他药物敏感性不同。研究结果为猪沙门菌病临床诊断与防治提供了重要依据。     

三黄种鸡场孵化死胚中沙门菌的分离鉴定与耐药性分析

为了解死亡鸡胚中沙门菌的感染状况,从河南省4家三黄种鸡场自带孵化场采集死胚样品,进行沙门菌分离、血清型鉴定,并用纸片法和PCR方法对菌株耐药表型及相关耐药基因进行检测。结果:从356份死胚样品共分离到173株沙门菌,包括5种血清型:鸡白痢沙门菌(162株)、布利丹沙门菌(5株)、塞罗沙门菌(4株)、肠炎沙门菌(1株)、菲尔摩雷沙门菌(1株)。不同来源死胚中沙门菌的分离率和耐药情况差异显著;173株沙门菌对磺胺异噁唑(82.1%)、氨苄西林(74.0%)、四环素(49.1%)、土霉素(48.6%)耐药情况较严重,且43.4%(75/173)的菌株表现为多重耐药;对其他抗生素耐药情况较轻,耐药率在11%以下;对头孢他啶、美罗培南、亚胺培南、多黏菌素E、氯霉素、恩诺沙星、环丙沙星敏感。PCR共扩增到13种耐药基因,且耐药基因的检出情况与耐药表型的符合率在72%以上,其中ESBLs类、氨基糖苷类、头孢菌素类的符合率为100%。结论:三黄鸡鸡胚感染的沙门菌血清型复杂、多重耐药严重,且耐药基因普遍存在于耐药菌株中。     

猪溶血性链球菌的分离鉴定及防治试验

猪链球菌病(streptococcicosis suume)是由多种链球菌感染引起不同临床症状的疾病,常见的有败血症型、脑膜炎型、化脓性淋巴结炎型和关节炎型。     

鸡白痢沙门菌基因组差异片段的筛选与分析

采用抑制性消减杂交技术（SSH）对鸡白痢沙门菌C79-13株与鸡伤寒沙门菌Sg9株进行了基因组差异片段分析.结果,从C79-13株中共检出13个特异性差异片段.经同源分析,这些序列可分为3类：噬菌体相关序列、质粒相关序列和已知功能序列.这些差异片段包含一些重要的沙门菌毒力相关基因,如编码大肠杆菌素、IpaJ蛋白、尾突蛋白、切除酶的基因.结果表明,鸡白痢沙门菌C79-13株与鸡伤寒沙门茵Sg9株基因组问存在较多差异基因,这些差异片段为确定鸡白痢沙门菌特异性遗传标志,建立分子鉴别新体系提供了基础.     

鸡CD3γδ基因cDNA的克隆及其真核表达质粒的构建

用Trizol提取4—6周龄白莱航鸡、伊莎鸡、固始鸡和隐性白羽鸡胸腺组织的总RNA，再用Oligo～dT纤维素富集mRNA后，用RT-PCR扩增出鸡CD3γδ基因CDNA。PCIk产物切胶回收后连入T载体，序列分析发现伊莎鸡、固始鸡和隐性白羽鸡的CD318cDNA比白菜航鸡多一个氨基酸，且在胞外区的一个区域有4个氨基酸的差异。将白莱航鸡的CD318从T载体上切下连入pcDNA3．1（＋），再将重组质粒pcDNA3．1-CD3转染COS-7细胞，用已知的抗鸡CD3的单克隆抗体测得转染细胞中CD3γδ分子的表达，这说明构建的真核表达质粒正确，为下一步用DNA免疫的手段研制抗鸡CD3的单克隆抗体以及研究鸡CD3分子的结构和功能打下了基础。     

鸡胚源沙门菌的耐药表型与耐药基因的分析

为了解河南省某父母代麻鸡场死胚中沙门菌的耐药状况以及耐药机制,本试验对分离自291个孵化后期的死胚中的25株沙门菌进行血清分型,并采用K-B法进行了21种抗菌药物的耐药性检测,采用PCR法检测5类共37种耐药基因的携带情况。结果:25株分离株分属6个血清型,且对亚胺培南、美罗培南、氯霉素、呋喃妥因、多黏菌素B敏感,对氨苄西林、头孢曲松、磺胺异恶唑、头孢噻呋、氨曲南的耐药率在32%~48%之间,且有56%(14/25)的菌株存在多重耐药现象,最高可耐14种药物;共检出13种耐药基因;且5类耐药基因与耐药表型的符合率超过60%,其中四环素类的符合率为100%。提示该种鸡场中鸡胚源性沙门菌的血清型复杂、耐药率高、多重耐药情况严重,且耐药基因广泛存在于耐药菌株中。     

浅谈基层农技部门的档案数字化建设

本文针对基层农技部门的实际情况，提出现阶段采用现实的方法和技术进行农业科技档案数字化建设，具有投入成本低、利用不受地域的限制、检索十分方便的特点。     

县级无公害农产品基地"电子地图"的制作

本文利用Photoshop和Dreamweaver两个常用软件，把无公害农产品基地图建成一个形式、作用类似于电子地图．但成本远远低于电子地图的模拟电子地图。