中华鳖细菌疫苗免疫佐剂的筛选及其初步应用

将分离自中华鳖Trionyx sinensis主要细菌性疾病—肠道出血性败血症、鳖穿孔病（疖疮病）、红脖子红底板病、鳖腐皮病的4株病原菌,在体积分数为3．5％的福尔马林溶液中灭活24h。在灭活的4株菌中添加不同佐剂,充分混匀后分别制备成总含菌量为6×10^9个／mL的4价菌苗,分别免疫8只ICR小鼠,并设不加佐剂免疫组及空白组作为对照。经3次免疫后,随机选3只小鼠抽血制备血清,用间接ELISA方法测定抗体效价,除空白对照组外,其它4组小鼠的免疫血清效价为1：1．6×10^4-1：2．56×10^5,各免疫组的效价依次为弗氏佐剂〉白油佐剂〉蜂胶佐剂〉不加佐剂。另外5只小鼠用于免疫保护性试验。结果表明：3种佐剂的免疫保护率均为100％,而不加佐剂组免疫保护率为80％,空白对照组死亡率为100％。考虑到弗氏佐剂的成本较高且白油佐剂有副作用,故选择蜂胶作为免疫佐剂,制备了中华鳖4价菌苗。用该菌苗免疫接种50只体重为100～150g／只的健康中华鳖,注射剂量为0．2mL／只,并设置对照组（注射等量的生理盐水）,共接种20只健康中华鳖。分别于免疫后第20、30、40、50天随机采集3只受免疫的中华鳖和对照组的1只中华鳖血液并制备血清,用浙江省淡水水产研究所制备的针对中华鳖IgM的单抗3H3介导的ELISA方法,测定血清中的抗体效价。结果表明：当中华鳖免疫后40d,血清中抗体效价达到最高,为1：6．4×10^4;免疫后50d将受免中华鳖分成4组,分别用4种菌株以5LD50（9×10^6个／mL）进行攻毒试验（0．5mL／只）,结果免疫保护率均达到100％,而对照组死亡率均为100％。     

5种喹诺酮类药物对维氏气单胞菌体外抗生素后效应的研究

为了解喹诺酮类药物对维氏气单胞菌(A.veronii)的体外抗生素后效应(PAE),本研究采用试管二倍稀释法测定加替沙星、盐酸环丙沙星、盐酸左氧氟沙星、诺氟沙星、依诺沙星5种喹诺酮类药物对A.veronii TH0426株的最小抑菌浓度(MIC),采用菌落计数法测定5种抗生素的PAE值。结果显示:5种喹诺酮类药物在1、2、4、8倍MIC时,对A.veronii TH0426的PAE值分别为0.50±0.23、0.80±0.25、1.30±0.21和1.40±0.13(加替沙星);0.30±0.20、0.70±0.12、1.30±0.19和2.20±0.22(盐酸环丙沙星);0.40±0.10、1.00±0.23、2.20±0.15和2.50±0.17(盐酸左氧氟沙星);0.20±0.11、0.20±0.14、0.40±0.18和0.80±0.15(诺氟沙星);0.50±0.20、1.00±0.22、1.40±0.11和1.90±0.12(依诺沙星)。结果表明5种喹诺酮类药物对A.veronii均产生PAE,并且与药物浓度具有明显剂量依赖性。本研究为水产动物合理给药提供实验依据。     

龙眼胚性愈伤组织Remorin家族成员的克隆及其在体胚发生过程中的表达分析

以龙眼松散形胚性愈伤组织为材料,采用RT-PCR结合RACE法克隆Remorin家族5个成员的cDNA全长,DlRemorin1全长2 127 bp,编码572个氨基酸;DlRemorin2全长1 829 bp,编码444个氨基酸;DlRemorin3全长1 937 bp,编码541个氨基酸;DlRemorin4全长1 743 bp,编码466个氨基酸;DlRemorin5全长1 043 bp,编码181个氨基酸。DlRemorin1 ~ 5 DNA序列长度分别为：4 054、3 097、3 505、4 690和1 935 bp,所有内含子剪切位点均符合真核生物“GT-AG”规则。所有成员均是不稳定亲水性蛋白,都不具有信号肽,只有DlRemorin1具有跨膜结构,都具有Remorin家族保守结构域,与其它植物的Remorin具有较高的同源性。系统进化树分析结果表明,DlRemorin5为经典的Remorin蛋白,DlRemorin1与DlRemorin2属于长链Remorin。qRT-PCR结果显示,随着龙眼体胚的发育,DlRemorin1的表达量呈类“N”状趋势,在心形胚时期和子叶形胚时期较高;DlRemorin2在心形胚和子叶形胚时期迅速下降;DlRemorin3在发育中后期迅速升高,并在子叶形胚时期最高;DlRemorin4在球形胚和鱼雷形胚时期最低,而DlRemorin5在不完全胚性紧实结构时期最低。说明DlRemorin1 ~ 5在龙眼体胚发生过程的转录水平具有一定的组织特异性和时序性。psRNA Target预测显示DlRemorin还可能受到miRNA家族的调控。     

浅谈园林道路的规划

园林道路是园林的骨架和脉络,是联系各景点的纽带,是构成园林景色的重要因素,其设计的好坏直接关系着园林总体规划的成败。园林景物对于游人来说是一幅幅的画面,游人的视觉在流动中积累着自己的观感,最后才算有一个比较完整的印象或概念。这个流动主要靠园路的指引。在园林设计师     

中药复方制剂对热应激肉牛生产性能及生理生化指标的影响

旨在研究日粮中添加不同中药复方制剂对热应激肉牛生产性能和生理生化指标的影响。试验选取18头22月龄、初重为(433.41±15.10)kg的健康未去势公牛,随机分为3组,每组6头牛。其中对照组饲喂基础饲粮,两个试验组分别在基础日粮基础上给每头牛日喂100g的中药复方Ⅰ(健脾组)和中药复方Ⅱ(清热组)。试验牛均饲养于南方夏季高温高湿条件下,预饲期为10d,正式期为60d。正试期每日记录其采食量,并于第1、20、40、60天测定牛的体温和呼吸频率,第60天采集血样分析生化指标。结果:1)与对照组相比,健脾组肉牛的体温在第40和第60天显著降低(P0.05),清热组的体温在第20和第60天显著降低(P0.05);此外,健脾组和清热组肉牛的呼吸频率在第20和第40天均显著降低(P0.05)。2)与对照组相比,健脾组的血清总蛋白、白蛋白、甘油三酯含量显著升高(P0.05),而总胆固醇含量显著降低(P0.05);清热组的血清甘油三酯含量显著低于健脾组(P0.05),总胆固醇含量显著高于健脾组(P0.05),而与对照组之间均差异不显著。3)与对照组相比,健脾组的血清胰岛素和脂联素含量显著升高(P0.05),而清热组的血清胰岛素和生长激素含量显著降低(P0.05),清热组的血清甲状腺激素(T3和T4)显著升高(P0.05);与健脾组相比,清热组的血清胰岛素、生长激素和脂联素含量显著降低(P0.05),而甲状腺激素(T3和T4)显著升高(P0.05)。4)与对照组相比,健脾组肉牛的平均日采食量和平均日增重显著降低(P0.05),而料重比显著升高(P0.05)。上述结果表明,两种复方制剂均可缓解肉牛的热应激反应,其中复方Ⅰ(健脾化湿方)可促进热应激肉牛脂类合成代谢,但对肉牛生产性能有负面影响。     

泰国循环农业与有机肥资源利用的发展与启示

随着"一带一路"战略的深入实施以及中国—东盟自由贸易区(CAFTA)的全面启动,中泰农业交流日益紧密。笔者从泰国农业及其循环农业发展现状入手,介绍了泰国在有机肥推广方面的经验与做法。     

建造生态花境增加城市魅力

花境意即沿着花园的边界线或路缘种植花卉称为花境.即由花组成的境界,是根据自然风景中野生花卉自然散布的生长规律,通过艺术提炼而设计的自然式花带.花境的建设具有投资少,彩化、美化效果长久的特点.     

奥尼罗非鱼免疫球蛋白单克隆抗体的制备及其初步应用

采用饱和硫酸铵盐析和Sephadex G-200柱层析方法制备奥尼罗非鱼Oreochromis niloticus×O.aureus(体质量为500～1 000 g)免疫球蛋白(IgM),以其为抗原免疫8周龄的BALB/c小鼠,免疫3～4次后,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,用ELISA方法对杂交瘤进行筛选。结果表明:阳性克隆经3次亚克隆后,共获得6株针对罗非鱼IgM的单克隆抗体(mAb),分别命名为1C10、1C2、1G11、2C2、2F9和4B3,所有单抗均为IgG类,各株杂交瘤的细胞上清ELISA效价为1∶800～1∶3 200;制备4B3和1G11的腹水单抗,ELISA效价分别为1∶102 400和1∶6 400。免疫印迹试验结果表明,mAb 4B3能在变性条件下识别罗非鱼IgM的重链,约在相对分子质量85 000左右。用ELISA检测4B3对罗非鱼IgM的敏感性,IgM灵敏度为10μg/L。利用所制备的单抗4B3建立了评价无乳链球菌Streptococcus agalactiae灭活疫苗免疫罗非鱼血清抗体水平的三抗体夹心ELISA(TAS-ELISA)方法,结果表明:腹腔注射和浸泡免疫无乳链球菌灭活疫苗14 d后,两种免疫方式的罗非鱼血清抗无乳链球菌的抗体比对照组稍有增加;免疫21 d后,两种免疫方式的罗非鱼血清抗体均有明显增加;免疫35 d后增加更为显著,达到最高峰,注射组效价达1∶2 560,浸泡组达1∶640;免疫56 d后抗体开始下降,直到第98天还维持在明显高于对照组的抗体水平。本研究表明,所制备的罗非鱼IgM mAb可用于评价罗非鱼疫苗免疫效果及抗体产生规律等,具有广阔的应用前景。     

患体表出血症的泥鳅病原菌的鉴定与生物特性分析

从体表具有明显出血症状的患病泥鳅内脏组织中分离到2株优势菌,对这2种菌进行了鉴定和特性分析。利用形态学观察、生理生化特性分析和16SrDNA序列测定法对细菌类别进行初步判定,并采用人工感染试验和药敏试验对细菌的致病性与耐药性进行分析。分析表明这2种菌分别为霍乱弧菌(Vibrio cholerae)和希瓦氏菌(Shewanella putrefaciens),人工感染试验表明它们对泥鳅具有较强的致病性;用含有抗生素的20种药敏纸片进行药敏试验,发现这2种分离菌同时对氯霉素、环丙沙星、复方新诺明、头孢西丁、四环素、诺氟沙星和头孢他啶等7种抗生素高敏,对其他抗生素具有一定抗性。首次报道了泥鳅一种新的病原即希瓦氏菌,试验表明希瓦氏菌作为一种潜在的病原菌,可能与泥鳅霍乱弧菌协同作用,对泥鳅的养殖造成危害,同时也为泥鳅常见体表出血症病原的确定和防治提供参考依据。