牛病毒性腹泻病毒2型E2蛋白单克隆抗体的制备及鉴定

为制备牛病毒性腹泻病毒2型(BVDV2)E2蛋白的单克隆抗体,采用表达的E2蛋白免疫BALB/c小鼠,4次免疫后分离小鼠脾细胞并将其与SP2/0细胞融合,通过间接ELISA方法筛选,获得5株能稳定分泌抗BVDV2 E2蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株。Western blot和IFA结果显示,其中1株为BVDV2特异性单克隆抗体,其细胞上清ELISA抗体效价达59049。亚型鉴定结果显示,单克隆抗体属于Ig G1,轻链为κ型。经腹水制备和纯化后,其纯度达85%以上,间接ELISA抗体效价达128000以上,经连续传代20代仍能稳定分泌单克隆抗体。通过杂交瘤融合后筛选出1株针对BVDV2 E2蛋白的单克隆细胞株,为开展免疫学研究和2型牛病毒性腹泻/黏膜病诊断检测方法的建立奠定了基础。     

BVDV、BRV和BCoV TaqMan三重RT-qPCR检测方法的建立

为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)、牛轮状病毒(BRV)和牛冠状病毒(BCoV)的快速检测方法,根据GenBank中登录的BVDV 5'-UTR、BRV NSP5和BCoV N基因序列设计特异性引物和探针,通过优化反应体系和条件,建立了同时检测上述3种病毒的TaqMan三重RT-qPCR方法.该方法仅对BVDV 5'-...     

牛轮状病毒和志贺菌阳性犊牛腹泻粪便样本中肠道菌群的分析

犊牛感染不同病原所引发的腹泻可导致肠道菌群结构特征的改变。为研究其肠道菌群的多样性，从内蒙古西部地区选取3个规模化养牛场采集新鲜粪便样本38份，其中腹泻粪样30份，健康粪样8份。采用PCR方法进行腹泻相关病原检测后分为3组，分别为健康组(HC)、牛轮状病毒(bovine rotavirus, BRV)感染腹泻组(DC＿a)和埃希菌属-志贺菌感染腹泻组(DC＿b)。提取总DNA,采用通用引物对细菌16S rDNA基因的高可变V3-V4区进行PCR扩增，采用Illumina NovaSeq平台进行测序，对测序结果进行生物信息学分析。结果发现，α多样性指数表明腹泻犊牛与健康犊牛肠道微生物多样性存在差异且DC＿b组α多样性显著低于其余两组(P<0.05);在门水平上，3组的优势菌门均为厚壁菌门、拟杆菌门、放线菌门和变形菌门，但其相对丰度差异显著，DC＿b组厚壁菌门显著降低(P<0.05),放线菌门显著增加(P<0.05);在属水平上，3组的优势菌属不同且相对丰度也有差异。通过PICRUSt2功能预测分析表明，与HC组相比，DC＿a组在甘露糖降解、半乳糖降解、糖和维生素的生物合...