鸡催乳素和抑制素-α亚基重组蛋白的构建及表达

将鸡催乳素 (PRL)和抑制素 - α亚基 (INB- α)基因编码序列重组为融合基因 ,制备了同时包含这 2种激素基因的融合蛋白。通过 PCR和分子克隆的方法首先将全部粤黄鸡 PRL成熟肽 c DNA克隆到载体 p RSET A的 Bgl 和 Eco R 克隆位点之间 ,获得重组质粒 p PRL- RSET。鸡 INB- α片段经扩增后分别被克隆到质粒 p RSET A和 p PRL- RSET的 Nhe 和 Xho 克隆位点之间 ,获得重组质粒 p INB- RSET和 p INB- PRL。以上重组质粒构建的正确性分别由各特定引物组合扩增的 PCR产物长度、特定限制性内切酶消化各重组质粒所得产物长度以及对各质粒的测序结果得到验证。重组质粒 p PRL- RSET和 p INB- PRL 转化 E.coli BL2 1(DE3)株 ,IPTG诱导后所表达的产物经 SDS- PAGE显示 ,其分别与所预期的重组蛋白分子大小相符。质粒 p PRL - RSET和 p INB- PRL的表达产物和用 Ni- NTA凝胶纯化的 2重组蛋白产物都可与抗鸡 PRL 抗体产生特异的免疫印迹 ,并且表达菌裂解液和相应纯化蛋白的免疫印迹处于同一位置。结果说明 ,试验已成功完成了鸡 PRL、INB-α及 2者融合蛋白的构建、表达和纯化     

用于鸡生长和肉质性状定位资源群体的构建

采用远交F-2设计,以杏花鸡(A系)为亲本,分别与隐性白洛克鸡(B系)、泰和丝羽乌骨鸡(C系)进行全同胞和半同胞的正反交,产生了包含A♂×B♀、B♂×A♀、A♂×C♀、C♂×A♀4个杂交组合的各两组F2群体,并进行详细的性状表型记录,建立了可用于定位生长和肉质的数量性状座位(quantitative trait loci,QTL)的4个资源群体。对F2群体的各种性状表型值进行分析,结果显示,F2群体各生长性状和肉质性状都分离得很好。资源群体有足够的群体规模,并有利于校正母体效应和环境影响,保证有效单核苷酸多态性(single nucleotide poly-morphism,SNP)检测数量和QTL定位的准确性,使资源群体的构建达到了预期的效果。     

猪Myopalladin基因多态性与胴体性状的关联分析

采用RT-PCR扩增与直接测序,对猪肌肉组织的一条表达序列标签（EST）（GenBank登录号为BM445313）进行SNP筛查.检测到2个新的SNPs,通过BLAST在NCBI非冗余数据库中进行同源性比对,发现该EST位于Myopalladin基因的3＇UTR区.在猪参考家系SCAU-LL F2群体中对其中的一个SNP进行Csp61RFLP基因分型,并与胴体瘦肉率和皮脂率进行关联分析,结果表明基因型CT与CC的瘦肉率均值分别为46%和45%、皮脂率均值分别为42%和44%,在瘦肉率和皮脂率上的差异均达到了显著水平（P＜0.05）.由此可见,猪Myopalladin不同基因型对胴体性状有着重要影响,是猪育种应用中的一个潜在遗传标记.     

亲缘生物法生物信息技术在水产基因研究中的应用

用Entrez、SRS等检索工具可从GenBank、EMBL等核酸序列数据库、鱼类专业数据库获取相关水产动物的基因等信息,通过电子邮件或网页填表等方式用BLAST、FASTA等序列分析软件来分析获得的信息,以鳜鱼rRNA基因为例,根据鳜鱼的分类树,按种、属、科、亚目、目、总目追级向上寻找亲缘关系较近的其它鱼类的rRNA基因,直到找到有价值的rRNA基因序列。将有价值的rRNA基因序列拼接成重叠群,根据重叠群设计引物、克隆鳜鱼的rRNA基因,获得鳜鱼的3个rRNA基因及其间隔序列。为经济动物的基因研究建立了一种亲缘生物法的生物信息学技术。     

DNA条形码技术鉴定中国地方鸡品种的重新评估

【目的】探讨COI基因作为标准DNA条形码技术鉴定外形差异较小的地方鸡品种的可行性。【方法】以华南地区9种优质地方鸡（怀乡鸡、清远麻鸡、惠阳胡须鸡、中山沙栏鸡、阳山鸡、杏花鸡、五华三黄鸡、文昌鸡和广西三黄鸡）和国外引进品种隐性白羽鸡为试验材料,测定标准的DNA条形码技术的线粒体细胞色素C 氧化酶亚基I （cytochrome C oxidase subunit I,COI）,同时下载已发表的31条家鸡和原鸡及绿头鸭的COI基因序列,分析品种遗传多样性与遗传距离,构建单倍型中介网络图和系统发生邻接树,界定区分品种特异的单倍型。【结果】除去PCR引物序列,获得了695 bp COI基因片段。根据标准的DNA条形码序列,截取648 bp 线粒体COI基因序列进行分析。10个鸡品种203个个体共检测到110个变异位点,占分析位点的16.98%,其中90个单一位点突变,20个简约信息位点。平均核苷酸多样性为0.00394（0.00349-0.00560）,平均单倍型多样性为0.832（0.763-0.905）,其中五华三黄鸡最高,中山沙栏鸡次之,文昌鸡最低。定义了84种单倍型,单倍型1为9个地方鸡种所共享,出现频率为64次;单倍型9和5为家鸡和隐性白羽鸡共享,出现频率分别为29次和19次;每个鸡品种均有品种特异的单倍型。广西三黄鸡、五华三黄鸡与中山沙栏鸡的单倍型数最多,为13个,隐性白羽鸡与清远麻鸡的最少,为8个。不同品种的单倍型分布差异较大,如杏花鸡的单倍型主要分布在1,清远麻鸡主要分布在1和9,惠阳胡须鸡主要分布在1、5和9,隐性白羽鸡主要分布在9和79。10个鸡种品种间遗传距离范围为0.003-0.006,净遗传距离为0-0.003;鸡品种间的遗传距离一般大于鸡品种内的遗传距离;绿头鸭与鸡品种间的遗传距离大于0.2。中介网络图将84个单倍型分为3条进化枝,呈现出一定的品种特异性,如以单倍型9为起点的进化枝没有广西三黄鸡和文昌鸡分布,但另外两枝未表现出此特征;1为祖先单倍型,由此逐渐衍生出其他单倍型。邻接树显示中国家鸡与红原鸡聚为一簇,与黑尾原鸡、灰原鸡和绿原鸡分开;中国地方鸡聚为同一簇,且存在明显的交叉现象,无显著的品种特异性。【结论】COI基因可作为研究鸡品种遗传多样性的候选分子标记。仅依靠标准的DNA条形码技术无法有效区分差异外形较小的地方鸡种,需要联合多种分子标记如COI基因、细胞色素b、 AFLP指纹技术、微卫星位点LEI0258、基因组SNP和品种特异的外貌特征。     

鸡IGFIR基因遗传多样性分析

采用PCR-RFLP方法,对红色原鸡、杏花鸡、隐性白洛克鸡和丝羽乌骨鸡的IGFIR基因的18个位点的遗传多样性进行研究.结果表明,18个位点的基因频率在这4个群体中的分布差异很大,绝大部分的SNP最小等位基因频率均大于5％;独立x2分析显示,除了位点G17445596A、T17416994G、A17313488G和C17337042G,其他14个位点的基因型分布在不同鸡品种间存在显著或极显著差异(P＜0.05和P＜0.01);红色原鸡、杏花鸡、隐性白洛克鸡和丝羽乌骨鸡4个群体之间的平均多样性差异均不显著.单倍型分析发现,在所研究的区域,红色原鸡、杏花鸡、隐性白洛克鸡、丝羽乌骨鸡等在鸡IGFIR基因内分别划分为5、4、4、3个单倍型块;每个块内2～3个单倍型就可以代表整个块90％以上的遗传信息.此外,还发现鸡IGFIR基因中9个SNP位点可能与复杂经济性状有关,这为以后在经济性状上对该基因的进一步研究提供了参考依据.     

不同日龄发育鸡胚淀粉酶Amy－1多态性分析

本试验分析测定了不同日龄发育鸡胚淀粉酶Ａｍｙ－１多态性及胚内蛋黄淀粉酶Ａｍｙ－１多态性，结果显示鸡胚淀粉酶ａｍｙ－１电泳区带在中期（天龄）开始即定下来；天龄鸡胚淀粉酶ａｎｙ－１分布处于Ｈａｒａｒ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡，及天龄后鸡胚淀粉酶Ａｍｙ－１分布则偏离Ｈａｒｄｙ－Ｗｅｉｎｂｅｒｇ平衡。结果初步说明蛋黄淀粉酶Ａｍｙ－１与鸡胚淀粉酶Ａｍｙ－１并不属同一淀粉酶。     

优质鸡的肉质研究和肉质评价

对国内外主要是我国近年来对优质鸡肉质研究的成果作了综述，提出对优质鸡肉质的评价应在一般性的肉质分析项目基础上．特别对风味物质含量、肌纤维直径、肌间脂肪和肌内脂肪以及嫩度等少数项目给予重视，最后对这几个项目优质鸡应达到的标准作了初步讨论。     

粤黄鸡数量性状与酶杂合性之间的关系

本试验通过测定855只粤黄鸡血液淀粉酶(Amy-1)、酯酶(Es-1)、血红蛋白(Hb-1)和转铁蛋白(Tf)的遗传变异型以及4个数量性状的表现,研究了数量性状和酶杂合性之间的关系。结果表明,粤黄鸡90日龄体重与个体酶杂合性之间几乎不存在什么相关(r=-7.44 ×10~(-1),而90日龄蹠长、蹠围和胸角与个体酶杂合性之间却存在一定的相关(相关系数分别为2.4×10~(-2),4.43×10~(-3),-2.5×10~(-2)),但相关不显著。在所测定的4个蛋白质(酶)位点中,单一位点内杂合子与纯合子的数量性状表现差异不显著。尽管这些位点可能存在加性作用,但杂合位点数不同的个体间数量性状表现的差异并不显著。     

海南“五指山”猪的几种生化遗传标记及染色体核型

海南“五指山”猪(“老鼠猪”)是国内外宝贵的猪种资源。但对其遗传特性缺乏了解。本研究从生化遗传标记及染色体核型两个方面进行了初步分析。现将结果汇报如下: