病例教学法在兽医临床诊断学教学中的探索与实践

兽医临床诊断学是动物医学专业重要的专业基础课,具有很强的实践性。通过病例教学法的实施,有效的激发了学生学习兴趣,培养了学生临床思维的能力,提高了教学效果。本文结合兽医临床诊断学的特点,总结近年来的教学成果,介绍了病例教学法在课程教学中的意义、实施方法及注意事项等,以期进一步提高兽医临床诊断学的教学效果。     

猪瘟病毒C株重组标记疫苗的构建

利用构建的猪瘟病毒C株感染性克隆作为骨架,利用猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因作为标记基因,将GP5基因引入猪瘟病毒感染性cDNA中,体外转录得到RNA,转染SK6细胞后,检测了传代细胞中重组猪瘟病毒包含GP5区段的一段重组序列。结果表明,GP5基因稳定地插入在重组病毒基因组中,改造后的重组病毒可望作为C株活病毒标记疫苗。     

牛朊蛋白(bPrPc)基因的克隆和序列分析

分别从9头牛(3头牦牛、3头荷斯坦牛和3头秦川黄牛)全血中提取基因组总DNA，用所设计引物以聚合酶链式反应扩增出细胞型朊蛋白(PrP^c)基因，并克隆到pMD18-T载体。序列分析表明所克隆的牛PrP。的片段大小为795bp，包含了牛朊蛋白基因的完整编码区序列，为含单一外显子的完整开放阅读框，与国内外报道的已知序列基本相同。本次所报道的牛PrP(bPrP^c)基因含6个短而富含G-C的元件，可编码八肽Pro-His-Gly-Gly-Gly-Trp-Gly-Gln／Arg或九肽Pro-Gin／His-Gly-Gly-Gly-Gly-Trp／Arg-Gly-Gin。这些bPrPC基因序列相比较，其核苷酸和氨基酸同源性分别在99．0％～100．0％和99．2％～100．0％之间。在整个18个碱基替换中，多数替换是保守的，为同义突变，仅有5个替换引起氨基酸突变，分别为HN200302的W60R、HN200303的S154N、MN200301的A129V、NN200302的Q234R和NN200303的Q94R突变。发现牦牛朊粒基因在126(A-G)、234(G-A)和678(T-C)位的特征性核苷酸替换，但均为同义码替换。     

猪瘟病毒p80基因丝氨酸蛋白酶功能区的原核表达及小鼠免疫试验

根据已发表的猪瘟病毒Alfort株的全基因组序列,设计2对引物以Shimen细胞毒株为材料,一步法提取总RNA,利用RT-PCR和套式PCR,成功扩增出p80全长基因,包括丝氨酸蛋白酶以及NTPase/RNA解旋酶功能区,大小约为2.0kb。将p80基因中的丝氨酸蛋白酶基因克隆到原核表达载体pET-32a中,获得重组质粒pET-p80。将重组质粒转化大肠杆菌Rosetta（DE3）中,IPTG诱导表达得到分子量约为43ku的目的蛋白,与理论大小相符。将菌体蛋白经Ni柱纯化,获得纯化重组p80蛋白,Western blot检测表明,表达的目的蛋白能与CSFV阳性血清发生反应。用纯化的p80蛋白免疫Bal b/c小鼠,成功制备了抗p80蛋白的抗血清。     

双峰驼诱导排卵机理的研究Ⅲ--双峰驼诱导排卵因子分布与代谢途径的研究

从公驼精清内经DEAE－DE52柱上分离的诱志排卵活性蛋白（Ovulation-inducing bioactive protein,OIP)应用^125I标记后输入母驼阴道，通过血液循环到达垂体。经测定，OIP遍布母驼体内各脏器，其中以垂体、肝脏、心脏、舌肌等浓度较高，而在眼角膜、耳尖部以及被毛中含量很少。消除半衰期长达72.6h，其代谢主要经肝胆排泄，也有部分活性蛋白通过泌尿、生殖道排泄。     

口蹄疫病毒受体骆驼β1亚基基因的克隆和分子特征

首次从FMDV试验感染康复骆驼的舌皮和肺组织中克隆到了整联蛋白81亚基的基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸序列以及蛋白结构进行了分析。骆驼整联蛋白81亚基基因的编码区含有2397个核苷酸,编码798个氨基酸残基,含有12个潜在的糖基化位点（NXTX／NXSX）、2个表皮生长因子相似结构域和3个半胱氨酸丰富区。其信号肽由20个氨基酸组成,胞外域由708个氨基酸组成,跨膜区由29个氨基酸组成,胞浆域由41个氨基酸组成。骆驼p1基因与牛、猩猩、猫、犬、人、小鼠、鸡和猪的p1基因的核苷酸序列一致性分别为94．8％、94．8％、96．1％、94．7％、94．9％、89．9％、80．2％、95．7％,推导的氨基酸序列一致性分别为98．7％、94．8％、98、4％、97．5％、95．1％、94．1％、85．5％、98．9％。通过生物学软件分析发现81亚基1—20位、729—757位氨基酸区段疏水性较强,分别是该亚基的信号肽和跨膜区。实验为进一步深入研究FMDV嗜性、与宿主细胞的相互作用、病毒的侵入机制等问题奠定了基础。     

RT-PCR和nested-PCR技术在猪瘟病毒检测中的应用

根据已发表的CSFV核苷酸序列，设计并合成CSFV特异性引物及nested-PCR引物对。从待检猪脾脏，淋巴组织或实验感染的细胞培养物中提取总RNA，用AMV反转录酶进行反转录后，进行PCR扩增，一扩产物再nested-PCR引物对进行二次扩增，用琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。进一步将该片段纯化回收后，克隆到T载体并进行测序。测序结果同已知的CSFV、BVDV和BDV核苷酸序列进行同源性比较分析，即可快速，准确地区别于BVDV和BDV，又可以确定CSFV的血清型。该方法可有效用于猪瘟的病理学和流行病学研究。     

中草药对隐性乳房炎奶牛细胞免疫力的影响

选用当归、川芎、芍药、黄芪、蒲公英、丹参、益母草等中草药 ,配制成饲料添加剂 ,研究了其对奶牛淋巴细胞刺激指数 (SI)和中性粒细胞吞噬力的影响 ,并用北京隐性乳房炎检验液 (BMT)对供试牛进行疗效跟踪检验。结果表明 ,该中草药添加剂可显著提高SI(P<0 .0 5 )和中性粒细胞吞噬力 (P<0 .0 5 ) ,并能明显提高隐性乳房炎的转阴率。     

中药对奶牛隐性乳房炎的防治作用及对产奶量的影响

奶畜隐性乳房炎不仅影响产奶量，而且严重影响乳品质，给奶业生产造成了巨大的损失。长期以来，人们主要采用抗生素预防奶牛乳房炎，由于抗生素的大量使用，导致耐药菌不断出现，一方面造成其抗菌效果严重下降，另一方面造成乳中抗生素大量残留，给人类健康带来危害，使乳品发酵等深加工难以保障。采用中草药饲料添加剂预防隐性乳房炎近年来受到人们的关注。     

免疫增强重组流感病毒体

自英国医生Edward Tenner提出免疫接种的概念之后,疾病的预防已成为提高人类生活质量的最高要求.由于病原不断进化,自然免疫反应不可能实现理想的免疫保护,而且由于病原体可能影响宿主的免疫反应,甚至在一定程度上抑制宿主免疫系统的抗感染能力,因此,需要在对病原分子生物学、致病机理以及病原与免疫系统间相互作用的综合理解基础上,研究更安全、有效的免疫方法.