瘟病毒非结构蛋白的结构和功能

猪瘟病毒(CSFV)、牛病毒性腹泻病毒(BVDV)和边界病病毒(BDV)均为黄病毒科(Flaviviridae)瘟病毒属(Pestivirus)的成员。它们在结构、抗原性和遗传上关系密切。据推测CSFV、BVDV和BDV是由一个共同的祖先为适应不同动物演变而来。BVDV和BDV可感染反刍动物和猪，CSFV仅     

口蹄疫病毒结构蛋白VP2-3-1的纯化复性与活性检测

收集含有口蹄疫病毒结构蛋白VP2-3-1基因的大肠埃希氏菌菌液，将其超声破壁，用菌体裂解液裂解，提取包涵体，并用8mol／L尿素溶解，收集上清液，用亲和层析法纯化融合蛋白VP2-3-1，透析法复性，并用间接ELISA检测FMDV阳性血清和阴性血清。结果，P／N值大于2．1，说明纯化复性后的目的蛋白有一定的生物活性。     

加强动物病毒性传染病的基础研究

伴随着全球经济一体化和我国改革开放进程的加快,特别是我国加入世贸组织以后,国内外动物疫病受关注的程度都在日趋增长。动物疫病之所以受到空前的重视,是因为它的爆发频率越来越高,流行范围越来越广,不但动辄造成数亿乃至上百亿美元的经济损失,而且波及人类健康和社会稳定。有些动物疫病还具有重要的社会和军事意义。动物疫病主要包括由各类微生物和寄生虫引起的动物群发病,但近年来流行最为猖獗的是动物病毒性传染病。发生在世纪之交的国外几次动物疫病大流行都是由动物病毒引起的。我国动物疫病每年造成数百亿至上千亿元的经济损失,病毒…     

猪瘟病毒C株重组标记疫苗的构建

利用构建的猪瘟病毒C株感染性克隆作为骨架,利用猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5基因作为标记基因,将GP5基因引入猪瘟病毒感染性cDNA中,体外转录得到RNA,转染SK6细胞后,检测了传代细胞中重组猪瘟病毒包含GP5区段的一段重组序列。结果表明,GP5基因稳定地插入在重组病毒基因组中,改造后的重组病毒可望作为C株活病毒标记疫苗。     

牛口蹄疫病毒受体β6亚基的基因克隆和分子特征

从口蹄疫病毒（Foot-and-mouth disease virus,FMDV）感染康复牛的舌皮组织中克隆到了β6亚基基因并对其核苷酸序列和推导的氨基酸进行了比较分析。牛β6基因的编码区含有2367个核苷酸,编码788个氨基酸残基,其中信号肽由26个氨基酸组成（1～26aa）;胞外域由681个氨基酸组成,含有10个潜在的糖基化位点（NXT/NXS）和51个半胱氨酸（Cys）残基;跨膜区由29个氨基酸组成（708～736aa）;胞浆域由52个氨基酸组成,含有1个NPLY核心基序,该基因在GenBank中的登录号为DQ867017。牛β6基因与羊、猪、人、小鼠、挪威大鼠β6基因的核苷酸序列同源性分别为97.0%、91.6%、88.6%、82.5%和82.7%,推导的氨基酸序列同源性分别为97.1%、93.7%、93.0%、89.2%和89.2%。口蹄疫病毒自然宿主（牛、羊、猪）的β6亲缘关系较近,提示β6亚基可能与口蹄疫病毒的宿主范围有关。     

口蹄疫病毒VP1基因在转基因拟南芥种子中的表达及活性检测

构建了FMDV VP1基因的种子特异性表达载体p7SBin438/VP1,在根癌农杆菌GV3101的介导下,通过浸花法转化拟南芥花序,转基因拟南芥通过卡那霉素抗性筛选后,进行了目的基因PCR扩增和ELISA检测,对ELISA筛选的阳性植株进行Western blot检测,并对转基因拟南芥后代进行了目的基因PCR分析.结果表明,种子特异性表达载体p7SBin438/VP1构建正确,FMDV结构蛋白VP1编码基因已整合进拟南芥基因组并获得表达,表达蛋白具有免疫反应活性,转基因拟南芥后代分析表明VP1基因已经遗传给后代.本试验为将FMDV免疫基因向豆科植物种子中的转化提供了依据.     

用原位杂交对BHK-21细胞中的FMDV定位和检测

为了明确FMDV在细胞内的增殖部位，建立检测细胞内低拷贝FMDV的方法，对试验接种FMDVO／Akesu／58（10^7TCID50）毒株的BHK-21细胞中2～10h不同时间段的病毒RNA进行检测和定位。选用FMDVRNA非结构蛋白区3D保守序列作为寡核苷酸探针，采用尾段标记法以地高辛-11-d UTP标记，用原位杂交敏感加强型试剂盒检测杂交体。结果显示，从感染FMDV后2～10h内的BHK-21细胞中检测出阳性染色的病毒粒子，这些病毒粒子大多集中在核周围，随感染时间延长阳性染色信号增强。这说明用寡核苷酸探针与敏感加强型试剂盒结合对检测细胞内低拷贝的病毒粒子是可行的，同时也从分子水平上证明FMDV主要在细胞质中进行复制和繁殖。     

胶体金标记免疫层析技术的最新应用进展

胶体金标记免疫层析技术作为一种新型的免疫学快速诊断和检测技术,具有微量、特异、简便等特点,非常适合基层使用。笔者综述了免疫层析快速诊断试剂的历史、基本原理、制备方法及目前在医学检验和动物疫病诊断上的应用情况。     

病毒载体研究进展

外源基因进入细胞通常需要“运载工具”。在漫长的自然进化过程中,病毒是以寄生形式存活下来的最小、最简单的生命体,病毒分子生物学的发展为生物工程领域研究拓展了思路,提供了有效的方法和工具。重组病毒栽体又是当今病毒基因工程研究的热点之一,目前以动物病毒为基础设计的基因克隆及表达栽体主要有取代型的重组病毒栽体和重组的病毒一质粒栽体。文章对应用较广泛的病毒栽体做一综述。     

猪水疱病自杀性DNA疫苗的初步研究

利用RT—PCR技术，用保真酶扩增获得猪水疱病病毒外壳蛋白1BCD基因，克隆于DNA复制子载体pSCAl中，获得重组质粒pSCA／1BCD。将重组质粒转染BHK-21细胞，RT-PCR法和间接免疫荧光法检测显示，猪水疱病病毒外壳蛋白基因在转染细胞中表达。豚鼠免疫试验表明，自杀性DNA疫苗pSCA／1BCD可诱导SVDV特异性抗体和T淋巴细胞增殖。