外敷药防治隐性乳房炎的临床研究

试验采用杨凌莱夫尔公司生产的“乳炎宁” 搽剂，对隐性乳房炎奶牛进行治疗试验。将年龄、胎次、分娩时间、日产奶量接近的14头患隐性乳房炎的奶牛随机分为试验组和对照组，另选7头年龄、胎次、分娩时间与以上两组接近的健康牛作为健康对照组。试验组外敷用药，每日两次，对照组和健康组不用药，其它饲养管理条件相同。一周后，进行 BMT检测隐性乳房炎情况，并采混合乳测定体细胞数和乳成分。试验结果显示：实验组奶牛乳中体细胞数显著下降67.3%，与对照组相比，差异极显著（P<0.01），药物对隐性乳房炎的有效率为 79.8%，表明“乳炎宁”对奶牛隐性乳房炎有显著疗效。     

泉病毒载体在基因治疗和疫苗研究中的应用

自从20世纪50年代开始认识腺病毒（Adenovirus）以来，对腺病毒的生物学和免疫学特征已经有比较多的认识。腺病毒科包括禽腺病毒属（AViadenovius）和哺乳动物腺病毒（Mastadenovirus）两个属。除人腺病毒以外，一些哺乳动物的腺病毒和禽腺病毒也成为基因治疗和载体疫苗研究的热点，如猪腺病毒3型（PAV-3）、牛腺病毒3型（BAV-3）、绵羊腺病毒（0vineadenovirus，0AV）、禽腺病毒（Aviadenovirus）、犬腺病毒（Canineadenovirus，CAV）和黑猩猩腺病毒（Chimpanzeeadeno—virus.     

口蹄疫病毒多基因腺病毒穿梭质粒的构建

采用分步扩增连接的方法将口蹄疫病毒结构蛋白基因P1—2A、3C蛋白酶基因和3D聚合酶基因按正确的读码框依次连接克隆入pGEM-T载体。然后，将切取的目的基因亚克隆入腺病毒穿梭质粒pShuttle—CMV。构建成功的2个重组穿梭质粒经测序鉴定，含有完整的目的基因表达盒。穿梭质粒可与腺病毒骨架载体进行细菌内同源重组，以产生重组腺病毒载体。     

猪瘟RT-PCR ELISA诊断方法的建立及其初步应用

建立了检测CSFV的快速、敏感、特异的RT-PCR ELISA方法。在RT-PCR过程中以地高辛标记的dUTP(DIG-dUTP)标记PCR产物．用生物素标记的捕获探针在链亲和素包被微量板孔中杂交捕获PCR产物。该方法的敏感性较常规RT-PCR方法高100倍，可检测出350μL1：100(相当于3．5mg)的兔脾组织悬液中的C株CSFV，特异性强，避免了PCR过程中因污染导致的假阳性结果。通过对RT—PCR和微量杂交系统的条件优化，该方法用于检测C株兔脾组织毒、细胞适应毒和野毒感染的猪组织毒样品，效果良好。     

双峰驼诱导排卵因子结构的研究

应用岛津紫外分光光度计系统地扫描并记录了公驼精清，各活性组分以及诱导排卵因子的紫外吸收光谱。扫描结果证明：公驼诱导排卵因子（OIF）在精清内相对稳定的原因，是OIF在精清内由多层分子量不同、性质各异的蛋白质所包裹，从而证明了我们以前的推测。     

犬冠状病毒的分离及鉴定

为有效防治犬冠状病毒病,促进养犬业的健康发展。从疑似犬冠状病毒(CCV)症状病犬粪便中分离出1株病毒,从形态学、理化学、生物学等方面对该病毒进行了鉴定。细胞培养证实该病毒有致细胞病变效应。物理化学鉴定表明该分离病毒核酸类型为RNA,有囊膜,对氯仿和乙醚敏感,对1%胰蛋白酶不敏感,耐酸性较强,具有一定的耐热性,最高耐受限是50℃,无血凝性和红细胞吸附特性,符合犬冠状病毒的特点。中和试验进一步证明该分离病毒是一种犬冠状病毒;牧羊犬接种1 d后就出现了临床症状,所有攻毒犬扑杀后都有肠以及肠系膜淋巴结病变。该分离病毒是一种RNA病毒,可以引起试验犬出现典型犬冠状病毒病症状,是犬冠状病毒。     

同源重组法制备口蹄疫病毒多基因重组腺病毒

通过细菌内同源重组的方法成功构建了含有0型口蹄疫病毒P1—2A和3C蛋白酶基因和3D基因的重组腺病毒表达载体。首先将P12A、3C和3D基因亚克隆连接到穿梭质粒pShuttle—CMV上,再将重组穿梭质柱用Pinel线性化后电转化携带有腺病毒骨架载体pAdeasy-1的大肠杆菌BJ5183感受态菌,经细菌内同源重组产生pAdcmv—P12×5c和pAdcmv—p12×3cd重组腺病毒质粒,经序列测定证实目的基因已正确的插入到腺病毒骨架载体中。重组腺病毒质粒经Pacl线性化后转染HEK295细胞,转染1w内细胞出现典型病变。取转染细胞裂解液上清连续传代至第4代时,细胞于24～48h内即病变完全,收取接毒后24h细胞进行PCR和RT—PCR检测,表明目的基因已整合到腺病毒基因组内,且在mRNA水平上有表达。取第4、6、8和10代病毒,用蛋白酶K处理后可扩增出目的基因,证明此重组病毒可稳定存在。本研究为FMDV腺病毒活载体疫苗的研究奠定了基础。