非洲猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

为建立一种检测非洲猪瘟病毒(ASFV)抗体的间接ELISA(iELISA)方法,对构建的ASFV P30基因表达工程菌诱导表达后,将获取的重组ASFV P30蛋白进行纯化和Western-blot检测,然后以纯化的重组蛋白为抗原,建立了ASFV抗体iELISA检测方法,并进行了特异性、灵敏性、重复性试验;同时与基于ASFV P30-2His6蛋白(N、C末端各融合1个His6标签)的iELISA方法进行兽医临床样本比较试验。结果显示:重组ASFV P30蛋白和重组ASFV P30-2His6蛋白在Western-blot检测中,均能与猪ASFV阳性血清产生特异性杂交带;基于重组ASFV P30蛋白iELISA的最佳反应条件为,抗原蛋白包被质量浓度20μg/mL、血清样品稀释度1:1 000、酶标二抗稀释度1:40 000、血清样品检测OD450阳性结果临界值0.22。该方法仅对ASFV阳性血清呈特异性反应,1:3 200稀释的阳性血清仍可检出,批内试验和批间试验变异系数均小于10%,可以消除His标签所造成的假阳性反应。本研究建立的ASFV P30 iELISA检测方法为ASFV抗体检测提供了一种有效手段。     

基于解析-数值结合法的傍河水源地开采方案与地下水资源量分析

合理设计开采方案对傍河水源地地下水资源开发和避免环境地质问题的发生具有重要意义。以承德市四道河典型傍河地下水水源地为研究区,在明确区域水文地质条件的前提下,建立地下水流数值模型,运用仿泰斯公式和映射叠加原理计算出合理的开采井布局,数值法与解析法相结合得到最优开采方案,确定水源地地下水可开采资源量。结果显示,在研究区4个区段内29眼开采井沿河流单排布设,井河距离为25 m,井间距离为150 m的方案为最优开采方案,水源地地下水可开采资源量为4.51万m³/d。滦河对地下水的补给充足而稳定,取水保证程度较高,对区域水环境影响较小。     

布鲁氏菌环介导等温扩增（LAMP）可视化检测方法的建立

应用环介导等温扩增(LAMP)技术建立了布鲁氏菌可视化快速检测方法。针对布鲁氏菌外膜蛋白OMP25基因保守区设计6条特异引物,反应前加入染料羟基萘芬蓝(HNB)作为LAMP扩增的指示剂,63℃恒温反应60min,根据HNB的颜色变化进行结果判定。分别评价所建立LAMP方法的特异性和灵敏性,并对60份牛布鲁氏菌病虎红平板凝集试验(RBT)阳性血清样本,经LAMP和B4/B5-PCR方法进行平行检测。结果显示,本方法最低检出限约为17fg布鲁氏菌基因组DNA。本方法特异性良好,布鲁氏菌反应管均出现特异性LAMP扩增反应,而猪大肠杆菌K99、巴氏杆菌C48-1、猪链球菌ST171、绿脓杆菌等对照组均未出现扩增。针对60份RBT阳性血清的平行检测结果显示,LAMP和B4/B5-PCR这两种方法间的结果符合率为85.0%。B4/B5-PCR检测为阳性的43份样品,经本方法检测全部为阳性;B4/B5-PCR检测为阴性的17份样品,经本方法检测,9份为阳性,8份为阴性。LAMP的敏感性高于B4/B5-PCR方法。实验表明,本文所建立的基于颜色判定的布鲁氏菌LAMP检测方法具有特异、灵敏、设备要求简单等特点,适用于基层兽医部门进行布鲁氏菌的快速检测。     

犬细小病毒性肠炎的诊断技术

由犬细小病毒（CPV月I起的以剧烈呕吐和腹泻及白细胞明显减少为主要临床特征的大细小病毒性肠炎，在临床症状上很难与大盛热、大传染性肝炎、犬冠状病毒、构端螺旋体以及细菌、寄生虫等其他病原体所引起的肠炎相区别①＠，自1977年美国③④首次发现以来，国内外许多专家学者及临床兽医已做了大量研究工作，本文就现有的诊断技术做一简述，供临床实验、海关检疫及科研等人员参考。l·临床诊断根据流行病学特征，临床症状及病理变化诊断是大多数临床兽医常采用的方法。此法直观、快速但经验性强，易误诊。1988年林至刚⑤等人对4条有明显临床…     

中间球海胆稚胆对敌百虫的耐受力测试

试验表明中间球海胆稚胆对敌百虫短时间(24小时)处理的忍受范围较广,500mg/L仍有成活个体,稚胆胆径φ<500μm的个体对敌百虫的耐受力弱。其安全浓度为4.6369 mg/L。30 mg/L以下浓度稚胆的脱板率差异不显著。敌百虫对稚胆的毒性在有饵状态下减弱,耐受力增强。     

禽用油乳剂灭活疫苗使用注意事项

禽类传染病尤其是病毒性传染病主要靠疫苗接种进行预防。目前已知的疫苗概括起来分为活疫苗、灭活疫苗、代谢产物和亚单位疫苗，以及生物技术疫苗，其中生物技术疫苗包括基因工程亚单位疫苗、合成肽疫苗、抗独特型疫苗、基因工程活疫苗以及DNA疫苗等。灭活疫苗是指将病原微生物经物理或化学方法灭活后，失去其感染能力，但仍然保持其免疫原性，接种后能使动物产生特异性抵抗力的生物制剂。由于灭活疫苗接种后不能在动物体内繁殖，因此使用剂量较大，免疫期较短，但加入适当的佐剂后可增强免疫效果，延长免疫期。油乳剂灭活疫苗是以矿物油…     

禽流感H5亚型油乳剂灭活疫苗抗体消长规律的研究

用禽流感H5N2亚型毒株接种10日龄SPF鸡胚，收获尿囊液，经甲醛灭活后与优质矿物油佐荆混合乳化制成油乳剂灭活疫苗。抽取其中三批，接种28日龄非免疫鸡100羽，4天后检测抗体，以后每隔1周或2周采血检测H5亚型HI抗体，并于抗体水平为2log2、4log2、6log2左右时攻毒。结果表明，免疫后4天即能检测出抗体，之后逐渐上升，至第5周抗体水平达到高峰且较稳定，然后缓慢下降，110天后抗体降至临界值以下。攻毒结果表明，能使鸡抵抗强毒攻击的抗体临界值为6log2。     

鸡念珠菌病的诊治

哈尔滨市某养鸡户饲养9月龄罗曼蛋鸡1800只,几天内先后有4只单侧或双侧嘴角长出黄豆大肿块,病鸡不愿吃食、饮水。1只鸡由于双侧嘴角长有肿块,闭不上嘴,无法吃食、饮水,最后衰竭而死。1999年6月21日来我站诊治。1　剖检变化　嘴角皮肤表面突起黄豆大肿块,坚硬而无弹性。剪开皮肤,里面有黄白色干酪样物,易剥离,剥离后露出凹陷溃疡面。嗉囊粘膜增厚,上覆一层白色伪膜和坏死物。食道散在溃疡斑。2　实验室检验　取溃疡面上少许干酪样物涂片,染色,镜检,可见大量革兰氏阳性圆形、卵圆形、壁薄的酵母样细胞,大小约2～6μm,单个散在,有芽生分生孢子…