传染性海绵状脑病及其分子生物学诊断

传染性海绵状脑病是一种区别于普通流行病的人兽共患病 ,其病原体是一种具有传染性的、未知功能的糖蛋白 ,命名为蛋白质感染颗粒 ,即朊病毒。它是一个超出经典病毒学和生物学的全新概念。朊病毒是有机体的正常细胞蛋白质错误折叠的产物 ,其扩增机制和致病机制不同于一般病毒。传染性海绵状脑病潜伏期长 ,传染性强且无法治愈 ,机体免疫系统对朊病毒不识别。目前 ,传染性海绵状脑病的诊断已达到分子水平 ,国际上主要利用抗 Pr P抗体、脑脊液中蛋白质的改变以及实时 PCR和质谱分析法等手段来进行临床诊断和病原体的检测。     

大孔吸附树脂纯化草莓多酚及体外抗氧化活性研究

通过静态、动态吸附和解吸实验,研究了3种大孔吸附树脂对草莓多酚的纯化效果,并分析了纯化的草莓多酚在体外的抗氧化活性。结果表明:在3种大孔吸附树脂中, HPD400树脂对草莓多酚的吸附和解吸率最高。得出的HPD400大孔树脂纯化草莓多酚的最优工艺参数如下:质量浓度为3 mg/mL、pH值为2.0的草莓多酚提取液以1 mL/min的流速进行上样,并用80 mL体积分数为50%的乙醇以1 mL/min的流速进行洗脱。经HPD400大孔树脂分离纯化后的草莓多酚纯度约是纯化前的2.71倍,其总抗氧化能力也提高了2.88倍。纯化草莓多酚清除DPPH·自由基、羟基(·OH)自由基和超氧阴离子(O_2~(·-))自由基的能力显著高于同浓度粗多酚的。     

茄子SmMsrA基因VIGS表达载体的构建及表达分析

利用RT-PCR从茄子单性结实品系D-10中获得甲硫氨酸亚砜还原酶A基因(Sm Msr A)的编码区。通过Gateway同源重组技术,构建了3个分别含Sm Msr A基因不同片段的烟草脆裂病毒(Tobacco rattle virus,TRV)介导的基因沉默(VIGS)表达载体p TRV2-Sm Msr Ai。表达载体转入农杆菌GV3101后,用注射压迫法侵染茄子叶片。采用表型观察、TRV病毒分子检测和q RT-PCR技术,评价构建的VIGS体系对Sm Msr A基因的沉默效果。结果表明,报告基因PDS沉默后叶片呈现明显的光漂白现象,Sm Msr A基因沉默后叶片呈花叶状,果实变小,叶片和果实中的Sm Msr A基因的表达量明显降低,表明Sm Msr A基因是正向调控茄子果实发育的相关基因。     

茄子(Solanum melongena)MADs-box家族基因SmA GL9的克隆与表达分析

本研究以茄子单性结实品系D-10和非单性结实品系03-2所构建的抑制差减文库(SSH)中差异表达的EST片段fan11为依据,利用RACE技术克隆得到一条与AGL9基因一致性达97.93%的cDNA序列,命名为SmA GL9。生物信息学分析表明,该基因有一个全长726 bp的开放阅读框,编码241个氨基酸,预测蛋白分子量为27.546 2 kD,理论等电点为9.00。保守结构域分析发现该蛋白含有MADS-MEF2-like和K-box两个保守结构域,属MADS-box转录因子。同源进化分析结果显示SmAGL9基因的蛋白质序列与辣椒AGL9基因同源关系相近。RT-qPCR分析表明,低温条件下SmAGL9基因在单性结实和非单性结实的子房和果实发育过程中均有表达,果实发育初期单性结实品系中的表达量显著高于非单性结实品系,推测SmAGL9基因在茄子单性结实子房和果实发育初期具有重要的调控作用。结果可为进一步研究茄子单性结实果实形成的分子机理提供参考。     

应用胰酶粗提液对淘汰蛋鸡肉的嫩化试验

用有机溶剂部分沉淀法获取胰酶粗提液，在室温下用此提取液对淘汰鸡进行浸泡嫩化试验，嫩化后的肌肉中非蛋白氮含量普遍提高，肌肉蛋白质电泳带谱与对照组显然不同，肌肉的嫩度有了明显提高。本试验完全能达到纯酶制剂的嫩化效果。     

铁和维生素A及互作效应对肉仔鸡生产性能、免疫功能与有关酶及激素的影响

选用 1日龄艾维茵肉仔鸡 50 4只 ,随机分为 9组 ,每组 4个重复 ,每重复 1 4只鸡 ,公母比为 1∶1 ,采用 3× 3(Fe×VA)完全随机试验设计 ,研究了日粮添加不同水平的Fe(0 ,30 ,60mg/kg)和VA(750 ,1 50 0 ,2 70 0IU/kg)对肉仔鸡不同生长阶段 (0 4周龄和 5 7周龄 )的生产性能、免疫功能、血清过氧化氢酶活性及胰岛素浓度的影响。结果表明 :(1 )常规日粮中铁含量丰富 ,不添加铁时肉仔鸡的生产性能、免疫功能较佳 ;(2 )VA添加量对生产性能影响不显著 (P >0 0 5) ,对血清抗体效价的影响也不显著 (P >0 0 5) ,但对淋巴细胞ANAE+ %影响极显著 (P <0 0 0 0 1 ) ,且ANAE+ %随着VA添加量的增加而增加 ;(3)VA对血清CAT活性影响显著 (P <0 0 1 ) ,且VA(2 70 0IU/kg)组CAT活性最高 ;(4)Fe对血清胰岛素浓度影响显著 (P <0 0 5) ,且Fe(60mg/kg)组胰岛素浓度最高。 (5)Fe和VA交互作用对体增重影响显著 (P <0 0 5) ,对免疫功能影响显著 (P <0 0 1 ) ,对血清CAT活性影响显著 (P <0 0 1 ) ,且二者间存在互补作用。     

PCR在动物支原体检测中的应用

PCR是近年来发展起来的一项分子生物学新技术 ,具有灵敏、特异、快速、简便和适用面广等优点 ,因而在分子生物学检测与研究中具有广阔的应用前景。目前 ,PCR被广泛应用于众多领域 ,其在支原体检测中的应用与发展已经取得了可喜的成绩。文章简要介绍 PCR在动物支原体检测中的应用 ,包括应用通用 PCR引物与特异性引物检测支原体 ,以及 PCR在禽类、牛和猪支原体检测中的应用现状。表明在实验室和临床中应用 PCR检测支原体是一种有效的方法。     

猪肺炎支原体强弱毒株AFLP分析方法建立及应用

猪肺炎支原体168株是由江苏省农科院畜牧兽医研究所对国内分离强毒株(Js株)传代致弱而育成的一个无细胞培养弱毒株,其形成的分子机理并不清楚,本试验旨在揭示其遗传变异的规律。研究选择Mhp国际标准株J株、国内鉴定强毒株-济南株、Js株以及168弱毒株的5个不同培养代次进行扩增片段长度多态性(Amplified Fragment Length Polymorphism,AFLP)分析。从35对AFLP引物组合中共筛选出6对具有良好多态检出率的引物组合,扩增产物上变性聚丙烯酰胺电泳,银染显色,UPGMA聚类分析,J株、济南株、Js株和168弱毒株不同培养代次聚为三个不同的类群,而168弱毒株不同培养代次之间又可细分为两个亚类群,即高代次的和低代次的两个亚类群。实验从分子水平初步证明Mhp168弱毒株在遗传上已经形成了一个稳定的毒株。     

鸡胰多肽、猪胰多肽的提取、纯化和鉴定研究

本实验利用磷酸钙吸附法从猪胰脏、鸡胰脏中分别得到了鸡胰多肽(APP)、猪胰多肽(PPP)粗提液,用sphadex G-50柱层析脱盐后制备出了APP、PPP粗品;并用Folin-酚试剂法测得自制APP、PPP粗品的肽含量;用SDS-PAGE电泳法对自制APP、PPP粗品进行了鉴定。结果表明:用Folin-酚试剂法测得自制APP粗品的肽含量为:24.52 mg.g-1;PPP粗品的肽含量为:8.15 mg.g-1。从电泳图像可见,经Sephadex G-50层析后的APP、PPP纯度较高,APP和PPP的分子量在4.2KD范围内,与Kimmel等报道的结果以及市售APP纯品的分子量是一致的。     

兽药GMP的管理要求

兽药GMP是对兽药生产全过程监督管理所采用的法定技术规范,是在兽药生产全过程中用科学合理、规范化的条件和方法来保证生产优良兽药的一整套科学管理的体系。本文主要介绍了我国实施兽药GMP的发展概况、实施意义和所涉及的一些硬件与软件要求等。