两步PCR法检测鸡新城疫疫苗中鸡毒支原体污染的研究

本试验以Genbank中登录的鸡毒支原体的16s rRNA基因序列为标准,根据前人设计的两套引物(外引物和内引物)对鸡毒支原体DNA进行两次PCR扩增,建立两次PCR扩增体系和条件。最后,用此体系和条件对从市场上随机购买的17支鸡新城疫La Sota系活疫苗样品和13支鸡新城疫Ⅰ系活疫苗样品进行检测。结果显示,运用建立的两次PCR扩增体系和条件可以从疫苗样品中检测到支原体的污染,外引物的检出率为23.3%(7/30),内引物的检出率为10%(3/30)。     

兽用疫苗支原体污染的PCR检测技术的建立及应用

根据支原体的16 S rRNA基因设计特异性引物,以兽用疫苗中常见的支原体DNA为模板进行PCR试验,优化反应体系,建立了兽用疫苗支原体污染的PCR 检测方法,并对市场上的兽用疫苗随机抽查检测,其检出率为24.4%(22/90)。结果表明该方法特异性强,灵敏度高,有望成为兽用疫苗支原体污染的检测方法之一。     

牛奶中掺假物的实验室鉴别法

随着生活水平的不断提高,人们对生活质量的要求也日益提高。由于牛奶具有香甜可口、营养丰富、易于消化吸收和老少皆宜等特点,故被誉为食品中的“皇后”。因此,对鲜牛奶的消费量也越来越大。在市场经济的大潮中,有些个体私营者为了获得较高的经济利益,在牛奶中掺杂其他物质,严重损害了广大消费者的利益。所以,对于掺假牛奶的鉴别是十分必要的。为了确保广大消费者喝上“放心奶“,本文将介绍几种掺假物的实验室鉴别法。1牛奶中掺水的检验1.1测比重法正常牛奶的比重为1.03～1.08gmL。在检测时沿量筒壁倒入200mL20℃的牛奶摇匀,放入比重计静置…     

套式PCR在支原体检测中的应用

支原体(Mycoplasma)是一类缺乏细胞壁的原核微生物,它对猪、牛、禽以及实验动物等具有广泛的致病性,主要以侵害呼吸系统和生殖系统为主,还能引起关节炎、乳腺炎以及眼部感染.由于它为难培养的微生物,因而限制了一般实验室对其深入的研究.目前,其检测方法主要有分离培养法、电镜法、血清学方法以及核酸探针法等[1],但都存在着种种不足.进入20世纪90年代之后,国内外众多学者在PCR技术广泛应用的基础上,发展并形成了套式PCR方法(nested PCR,nPCR)来研究支原体.目前,应用套式PCR技术已在组织细胞培养中的支原体污染、动物支原体病诊断和人类疾病与支原体感染中得到了广泛的应用.     

铁和维生素A互作效应对肉仔鸡体内相关血液理化指标的影响

选用 1日龄艾维因肉仔鸡 5 0 4只 ,随机分为 9组 ,每组 4个重复 ,每个重复 14只鸡 (公母比为 1∶ 1) ,采用 3× 3(Fe× VA)完全随机试验设计 ,研究了日粮中不同添加水平的 Fe(0、30、6 0 mg/ kg)和 VA(75 0、15 0 0、2 70 0 IU/ kg)对不同生长阶段 (0～ 4周和 5～ 7周 )肉仔鸡体内相关血液理化指标 :血红蛋白 (Hb)含量、红细胞计数 (RCC)、红细胞压积 (PCV)、血沉 (ESR)的影响。结果表明 :1日粮铁添加水平对 0～ 4周肉仔鸡血液的 Hb含量 ,RCC,PCV和 ESR值影响均显著 (P<0 .0 5 ) ,5～ 7周时仅对 RCC值影响显著 (P<0 .0 5 )。 2日粮 VA添加水平对前后期 Hb含量影响均不显著 (P>0 .0 5 ) ,对前后期 RCC值影响均显著 (P<0 .0 1) ,对后期 PCV值影响显著 (P<0 .0 5 ) ,对前期 ESR值影响显著(P<0 .0 5 ) ,VA显著影响肉仔鸡体内铁状况血液指标。3交互作用对前后期 Hb含量、前期 RCC、后期 PCV、前期 ESR值影响均显著 (P<0 .0 5 )。 Fe(0 m g/ kg)× VA(70 5 IU/ kg)组前后期产生的 Hb含量和前期 RCC均低于正常范围 ,机体处于贫血状态。 4 Fe和 VA互作有助于改善血液 Hb含量和 RCC值     

检测兽用疫苗中霉形体污染的PCR-ELISA技术的建立及应用

本试验建立检测兽用疫苗中霉形体污染的PCR-ELISA方法，探索其最佳试验条件及优化组合，并与PCR检测法作对比，评价其应用价值。试验依据Genbank中登录的鸡源霉形体和猪源霉形体16s rRNA基因序列，运用DNAStar软件和Primer 5.0软件设计PCR特异性引物和探针，其中引物用地高辛标记，探针用生物素标记。然后以培养的霉形体中提取的DNA为模板，依据PCR-ELISA技术原理设计试验，建立并优化PCR-ELISA反应条件。最后用建立的PCR-ELISA扩增体系和条件对从市场上随机购买的30批鸡新城疫Ⅰ系活疫苗样品、30批鸡新城疫La Sota系活疫苗样品和30批猪瘟活疫苗样品进行检测。检测结果表明：应用建立的PCR-ELISA反应体系和条件可以从疫苗样品中检测到霉形体，检测率为35.6%，比PCR法的检测率高11.2%。该方法灵敏度高，特异性强，在疫苗的霉形体污染检测中具有推广应用价值。     

银合欢生态适应性研究

１９９０年引入１１个种源的银合欢，在南亚热带云南景东育苗栽培试验，结果表明银合欢有较强的生态适应性，其中勐腊、元谋、元法种源生长较好，东扑硅Ｋ×１、Ｋ×３Ｃ显示了抗逆性强的杂交优势，为我国热带、南亚热带地区推广栽培银合欢提供了科学依据。     

Q热血清学检测方法的研究进展

Q热是由贝氏柯克斯体(Coxiella burnetii)引起的急性自然疫源性传染病。本病呈世界性流行,人类和动物普遍易感,已经成为当前分布最广的人兽共患病之一。文章综述了Q热的病原学、流行病学以及血清学检测方法的研究进展,为Q热的进一步研究与防控提供科学依据。     

强普生Ⅲ号毒性安全试验

采用动物毒性试验方法,对强普生Ⅲ号进行了毒性、安全性评价。结果显示:小鼠的急性毒性反应和死亡率与给药剂量成正比,强普生Ⅲ号的半数致死量(LD50)为44.20±2.96 mL/kg,LD50的95%可信限为47.26~41.35 mL/kg,表现为无急性毒性。亚慢性毒性试验,实验期间小鼠的临床表现、体质量变化、饲料消耗量、血常规检查、血清生化检查等各项指标,试验组与对照组均无显著差异,各组脏器剖检和病理学切片检查也均无病理学变化。吸入毒性试验,试验组鸡整体状况正常,72 h内无中毒反应和死亡,血清生化指标值均在正常范围内,与对照组无显著差异。     

抗猪肺炎支原体IgA间接ELISA检测方法的建立

为了更准确地对猪肺炎支原体感染及免疫状况进行检测,作者拟建立抗猪肺炎支原体IgA间接ELISA检测方法.在比较了猪肺炎支原体全菌抗原和粘附因子P97R1原核表达蛋白后,选择后者作为包被抗原;以羊抗猪IgA为二抗,兔抗猪IgG-HRP作为酶标三抗,并分别对包被抗原的浓度、样品的孵育时间、二抗与三抗的最佳稀释度和作用时间以及显色液的作用时间作了优化.最终建立了稳定而特异的抗猪肺炎支原体IgA的间接ELISA检测方法.批间与批内试验结果证明该方法具有很好的稳定性.初步应用表明,该方法可用于猪肺炎支原体感染或免疫状态的临床监测.