犬猫3种冠状病毒基因克隆的构建与芯片检测技术

蔗糖密度梯度离心纯化浓缩犬冠状病毒(CCV)、猫冠状病毒(FCV)和猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)的细胞培养物,分别设计7、17、11对引物,对病毒RNA进行反转录和PCR扩增,回收PCR产物连接pGEM-T载体并转化大肠杆菌TGI,构建35个基因片段的克隆。煮沸裂解法制备质粒DNA,回收PCR扩增产物,点制冠状病毒基因芯片。抽提病毒总RNA,利用Cy3-dCTP随机渗入反转录PCR标记,与芯片进行杂交检测,淘汰交叉的克隆片段,每种病毒只选择其4对引物克隆的基因片段。将特异克隆扩增片段重新点制基因芯片,与病毒样品PCR扩增产物杂交,未发现交叉现象。基因芯片检测比传统PCR敏感1000倍,可有效应用于3种病毒的检测与区分。     

基因芯片检测5种动物冠状病毒的初步研究

采用蔗糖密度梯度离心,纯化浓缩犬冠状病毒(CCV)、猫冠状病毒(FCV)、猫传染性腹膜炎病毒(FIPV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪呼吸道冠状病毒(PRCV)的细胞培养物,分别设计7,17,11,10和4对引物,构建了49个基因片段的克隆。煮沸裂解法制备质粒DNA,回收PCR扩增产物,点制冠状病毒基因芯片。抽提病毒总RNA,利用Cy3-dCTP随机渗入反转录PCR标记,与芯片进行杂交检测,淘汰交叉的克隆片段。结果表明:克隆CCV1,CCV2,CCV5和CCV7可特异诊断CCV,克隆FCV6,FCV7,FCV8和FCV9可特异诊断FCV,克隆FIPV2,FIPV7,FIPV8和FIPV9可特异诊断FIPV,克隆PRCV1,PRCV2和PRCV3可特异诊断PRCV,克隆TGEV3,TGEV4,TGEV5和TGEV6可特异诊断TGEV。将这些特异克隆扩增片段重新点制基因芯片,与病毒PCR产物杂交,未发现交叉现象。基因芯片检测比传统PCR敏感1000倍,可有效应用于这5种动物冠状病毒的检测与区分。     

PCV2a与PCV2b鉴别诊断PCR方法的优化及应用

猪圆环病毒2型（Porcinecircovirustype2,PCV2）是严重危害养猪业的重要病原之一,根据基因组大小可分为2个基因型：PCV2a和PCV2b。为更好地掌握PCV2a和PCV2b在我国猪场的流行情况,本研究对先前的鉴别PCR诊断方法（涉及到引物、PCR体系及程序）进行优化,并应用优化的鉴3qPCR方法对1184份PCV2阳性样品进行检测,结果显示PCV2a占30．5％（36／118）,PCV2b占37．3％（44／118）,共感染占32．2％（38／118）,与常规PCR检测结果符合率为100％,此外,对30份,瞄床送检组织和血清样品也有很高的检出率。部分鉴别PCR扩增的目的产物进行测序及序列进化树分析,表明扩增序列为PCV2a与PCV2b的特征序列。经本研究优化后的鉴别PCR方法易操作、特异性强、敏感性好,可广泛用于临床样品中PCV2a和PCV2b的快速检测。     

稻鸭鱼共生模式及技术

稻田养鸭、养鱼把传统的靠化肥、农药种植水稻的单一模式，调整为“稻 鸭 鱼”的复合种养模式。该模式实现产品无公害、绿色化，是一种稳粮增效的稻田高效种植新模式。介绍了该模式的生产特色与技术要点。     

知识农业与现代农业之比较

一、知识农业与现代农业涵义之比较知识农业是指农业的要素投入、生产组织过程、经营管理等主要依赖于知识、科技与信息的运用，知识物化的价值在农业产出中占主要地位的农业。冗主要标志是农业的知识化与信息化。现代农业是指主要依赖于物质与资本的投入，用现代工业装备起来的农业。其主要标志是农业的机械化与化学化。二、知识农业与现代农业特征之比较（一）农业装备知识农业是用知识装备起来的农业，知识与信息将成为推动农业发展的不竭的原动力；现代农业是用现代工业装备起来的农业，现代工业产品与化学产品推动了农业的发展。（二）…     

庄园投资究竟值不值

一次性投入几万元,拥有50年0.33公顷土地使用权,坐享50年丰厚回报,相信绝大多数人会为之心动。时下流行“心动不如行动”,于是中国大地刮起了一阵又一阵投资现代农业大庄园的热潮,众多的投资者纷纷“下乡”,演绎现代庄园的故事。 热浪的背后更多的人是徘徊。庄园投资是新生事物,与各方利害息息相关,既涉及国家土地管理有关法律政策、又有发展商资信程度问题。投资者利益如何得到保障,庄园投资真如发展商所言那样“一本万利”吗? 凡是有利也会有弊,庄园投资同其它投资一样,风险与     

经验与启迪 制度变革与广东山区经济发展

经验与启迪制度变革与广东山区经济发展广东张建武彭东慧广东省共计有５０个山区县，土地面积和人口约占全省的６５％和４２％。近年来，随着珠江三角洲地区农村城市化、工业化的发展，广东山区经济也得到了很大发展，作为腹地、尚不发达的山区在广东国民经济的未来发展中...     

双孢蘑菇稻田栽培技术(3)

四、加强肥水管理双孢蘑菇喷水原则:以土层湿润为主,即捏得扁撮得圆,不粘手为宜;冬季宜干不宜湿,春季宜湿不宜干。双孢蘑菇喷水八忌:一忌高温喷水;二忌采菇前喷水;三忌弱菌丝喷水过多;四忌喷高浓度肥料和农药水;五忌大雨时喷水过多;六忌用水瓢泼水;七忌土壤发白不喷水;八忌喷水     

食用菌种植户刘新春

户主 刘新春.全家3口人. 住址 澧县张公庙镇荣家河居委会.邮码:415500. 最初订阅<湖南农业>时间 1990年. 2006年种植规模和效益 拥有兴春菌业食用菌示范基地(见图1):①种植鸡腿菇6000袋,产菇7500公斤,加工成盐渍品5250公斤,每吨售价6000元,产值3.15万元,扣除生产成本6300元,纯收入2.52万元.     

自动变速车辆坡道行驶自适应换挡策略

在分析汽车纵向动力学模型的基础上,运用改进型最小二乘法对整车质量与广义坡度进行实时辨识,以克服采用单一遗忘因子的最小二乘辨识法对变化不同步的参数辨识效果不佳的缺点。制定了自适应坡道换挡策略并进行了实车道路试验。试验结果证明,新型换挡策略能有效地解决了传统换挡策略在坡道行驶时的问题,能够更好地满足自动变速器坡道行驶的要求。