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山羊胎儿肌肉干细胞的分离培养与成肌诱导分化 总被引:1,自引:1,他引:0
【目的】通过体外建立安淮山羊胎儿肌肉干细胞分离培养及成肌诱导分化的方法,为进一步研究调控山羊肌肉干细胞增殖与分化的分子机制提供实验材料。【方法】本试验选取山羊胎儿背最长肌肌肉组织,用眼科剪剪成肉糜后,用0.1%的Ⅰ型胶原酶消化40 min,然后利用0.25%的胰酶消化15 min。分离得到的细胞用生长培养基(20%FBS+80%DMEM/F12+青链霉素)培养于37℃、5% CO2培养箱内。培养2h后采用差速贴壁技术对细胞进行纯化,又2h后,重复纯化一次。待细胞生长至70%左右密度时可进行传代培养。每次传代培养均采用差速贴壁30min的方法进一步纯化肌肉干细胞,共纯化至第6代。利用免疫荧光技术检测第6代细胞中肌肉干细胞标记基因Pax7、MyoD1的蛋白表达情况,从而对分离得到的细胞进行鉴定。当肌肉干细胞生长至70%左右密度时,将生长培养基更换为分化培养基(2%FBS+98%DMEM/F12+青链霉素),诱导细胞向成肌方向分化并观察细胞的形态学变化。细胞诱导分化1d后,采用免疫荧光技术检测肌肉干细胞的分化标记基因Myog的蛋白表达情况。另外,分别提取诱导0、1、3、5、7d后的细胞的总RNA,通过反转录试剂盒反转成cDNA后,利用qPCR测定MyoD1和Myog的相对表达量。【结果】 分离得到的细胞呈贴壁生长,其形态趋于稳定后主要呈长梭形或纺锤形。免疫荧光技术检测的第6代细胞中Pax7和MyoD1蛋白均为阳性表达。采用分化培养基诱导细胞分化后,在显微镜下可观察到随着诱导天数的增加,细胞开始分化、相互融合成肌管且具有一定的方向性。免疫荧光检测结果表明Myog蛋白呈明显的阳性表达。另外,qPCR结果显示,标志基因MyoD1和Myog均有表达,且MyoD1的相对表达量在分化的第1天相比于0天显著升高并维持到第3天,第5、7天开始显著下降但仍显著高于增殖期。Myog在分化不同天数的细胞中的相对表达量具有类似的趋向。【结论】分离得到了纯度较高的安淮山羊胎儿肌肉干细胞,且诱导后展现出较好的成肌潜力。研究结果可为进一步开展肌肉干细胞成肌分化的分子机制研究提供材料来源。 相似文献
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为改善和提高绵羊肉的品质,研究不同铜源和水平对肥育绵羊胴体性状、肉品质和脂肪酸组成的影响,本试验选用50只体重相近((23.8±1.6)kg)、3月龄左右的杜泊×蒙古羊杂交一代羯羊,随机分为5组,分别饲喂5种日粮:1)基础日粮(不加铜);2)基础日粮+10 mg/kg(DM)赖氨酸铜;3)基础日粮+20 mg/kg(DM)赖氨酸铜;4)基础日粮+10 mg/kg(DM)碱式氯化铜;5)基础日粮+20 mg/kg(DM)碱式氯化铜.结果表明,日粮中添加铜显著降低了肥育绵羊背膘厚和肾脂率(P<0.01),但对热胴体重、屠宰率和眼肌面积影响差异不显著(P>0.05);日粮中添加铜对肥育绵羊肉品质没有影响(P>0.05),对血浆、肌肉和脂肪组织中脂肪酸组成也无影响(P>0.05).赖氨酸铜和碱式氯化铜2种铜源以及10和20 mg/kg(DM)2种铜水平对肥育绵羊胴体性状、肉品质和脂肪酸组成的影响是相同的,因此,本研究建议绵羊日粮的适宜铜源为碱式氯化铜,适宜铜水平为16.74 mg/kg(DM). 相似文献
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为探讨不同麦麸含量及乳酸菌制剂浓度对茶(Camellia sinensis)渣青贮品质和养分含量的影响,本研究将4个浓度的乳酸菌制剂(0、50、100和200 mg·kg–1)分别添加到5个不同麦麸含量(0、5%、10%、15%和20%)的茶渣原料中,青贮45 d后测定其青贮品质和养分含量。结果表明,与茶渣单独青贮相比,添加不同含量的麦麸均可使青贮茶渣的氨态氮/总氮(NH3-N/TN)、乳酸(LA)、乙酸(AA)、干物质(DM)和粗灰分(Ash)含量显著提高(P0.05),pH、粗蛋白质(CP)、酸性洗涤纤维(ADF)和茶单宁(TTN)含量显著降低(P0.05)。添加不同浓度的乳酸菌制剂均可使青贮茶渣的pH、NH3-N/TN、AA、DM和ADF含量显著降低(P0.05),LA、CP、Ash和TTN含量显著增加(P0.05)。其中,麦麸含量为15%和20%青贮茶渣的pH显著低于其他组别(P0.05),添加100 mg·kg–1乳酸菌制剂可使青贮茶渣的NH3-N/TN和AA含量显著低于其他组别(P0.05),Ash含量显著高于其他各组(P0.05)。综上所述,在茶渣中添加麦麸和乳酸菌制剂可以明显提高茶渣的适口性、青贮品质和养分含量;综合考虑青贮品质,在85%茶渣+15%麦麸的混合原料中添加100 mg·kg–1乳酸菌制剂可获得较优质的青贮茶渣饲料。 相似文献
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试验采用53只小尾寒羊母羊(山东梁山和泰安)、25 只无角陶赛特羊母羊(甘肃永昌肉用种羊场)、35只蒙古羊母羊(甘肃武威)。分别采集颈静脉血样提取DNA,利用GenBank中人孕酮受体基因外显子4和绵羊孕酮受体基因 mRNA序列,设计绵羊孕酮受体基因外显子4限制性片段特异性引物,进行PCR扩增,对其PCR产物克隆、测序验证。用PCR-SSCP检测多态性,通过DNA测序确定单核苷酸多态位点(SNPs)。经过研究分析表明,小尾寒羊由野生型AA型、杂合AB型、突变纯合BB型3种基因型组成,蒙古羊由AA型、AB型两种基因型组成,无角陶赛特羊只有AA型一种基因型,不存在突变;在基因型分布上小尾寒羊与无角陶赛特羊和蒙古羊之间存在极显著差异(P<0.01),而无角陶赛特羊和蒙古羊之间差异不显著(P>0.05);小尾寒羊突变纯合基因型BB和杂合AB中存在4个突变位点,此外在发现的4个突变位点中,只有第4个突变位点246碱基T→C引起氨基酸突变。 相似文献
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建立稳定的山羊精子蛋白质双向电泳的技术平台,对精子上样量、蛋白质提取方法、二维电泳程序等相关技术都进行了优化,得到了相对清晰的冻精和鲜精的二维电泳图谱,并运用ImageMaster TM 2D Platinum软件进行了分析。结果表明:通过改进的热Trizol法提取山羊精子蛋白,当取精子3×10^7、上样量为150μL时能取得较好的电泳图谱,鲜精的蛋白位点重复性较高的有650个±10个,冻精的蛋白位点重复性较高的有600个±10个。冷冻导致精子蛋白丢失约50个,而且冻精多表现为大分子量蛋白的丢失,大部分分布于60~100kb之间,其中60~80kb之间蛋白丢失约18个,80~100kb之间蛋白丢失近20个,12~60kb之间蛋白丢失近12个。实验初步探明了山羊精子融冻前后精子的蛋白变化规律,为进一步了解精子冷冻损伤的确切机理奠定了基础。 相似文献
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以黑龙江八一农垦大学水稻中心保存的180份寒地早粳稻品种(系)为试材,对其品质性状进行分析,并做出评价.研究结果表明,寒地早粳稻的营养品质和蒸煮品质普遍较优,但仅有1.7%的品种综合品质性状达到了国家一级米标准;垩白粒率和垩白度的品种间差异较大,在参试材料中仅有6.1%和1.2%的品种达到了国家一级优质米标准,是今后水稻品质育种改良的重点,在今后寒地水稻品质改良和育种中,应注意改善稻米的外观品质;特别在育种中应首先注意粒形和碾米品质的选择,以提高品质育种效率. 相似文献