胶东地区奶牛乳房炎病原菌的分离鉴定及药敏试验

乳房炎(mastitis)是乳腺受到物理、化学、微生物刺激所发生的一种炎性变化,主要是由多种非特定的病原微生物引起的,有细菌、霉形体、真菌、病毒等,感染的微生物因地区不同而异,目前报道引起奶牛乳房炎的病原菌多达80余种,多见于细菌感染,其中以链     

猫细小病毒的遗传演化及分离毒株的致病性分析

本研究旨在了解猫细小病毒（feline parvovirus,FPV）流行株的遗传演化情况及分离毒株的致病性。2018—2020年,在山东地区采集54份疑似猫瘟粪便拭子,并通过PCR和VP2基因克隆进行VP2基因全长测序,构建遗传进化树,并推导出氨基酸序列并与疫苗株进行比对,分析遗传变异情况。用F81细胞分离培养1株FPV毒株,命名为FPV-QDC20,经电镜观察、间接免疫荧光、血凝试验、TCID₅₀测定、全基因测序及动物回归试验研究该毒株生物学特性。结果表明,采集样品中16份样品VP2基因全长测序成功,其中,15份为FPV,1份为猫源犬细小病毒（CPV）。构建系统进化树显示,本研究的FPV毒株均处于同一大分支,与中国其他地区已发表的FPV毒株亲缘关系较近,与欧洲分离株以及疫苗株亲缘关系较远。氨基酸序列分析表明,某些关键位点的改变可能导致宿主范围和感染性的改变,有可能导致免疫失败情况发生。毒株QDBL2毒株中出现了80、93、103三个FPV保守位点的变异,或许与犬猫细小病毒的共感染和重组有关。动物回归试验表明,毒株FPV-QDC20有较强致病性,试验猫出现典型的临床症状和病理变化,并最终死亡。本研究有助了解我国FPV毒株遗传演化方向,为将来的疫病监控和疫苗研究提供参考。     

水貂铜绿假单胞菌鞭毛分型及分离株flic基因的克隆与序列分析

为分析铜绿假单胞菌(PA)分离株鞭毛蛋白基因(flic)之间的差异,本研究通过PCR方法扩增由山东地区发病水貂的肺脏组织中分离的29株分离株flic基因的部分片段,根据其片段长度确定PA的鞭毛类型。选取两种类型代表株(PASD01、PASD03),采用PCR方法扩增flic全基因进行序列分析。结果表明,PASD01分离株与国外A型PA flic基因序列同源性为99.6%～99.7%,PASD03分离株与B型PA flic基因的序列同源性为98.9%～99.5%,而两个分离株之间的序列同源性为76%。本研究首次从水貂病变组织中克隆得到两种鞭毛蛋白类型的flic基因,该基因在各型鞭毛菌株中高度保守,为进一步研制鞭毛亚单位疫苗提供实验依据。     

猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法的建立

本研究旨在建立猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP鉴别检测方法。根据Shimen株设计1对特异性引物,建立猪瘟病毒RT-PCR-RFLP检测方法;对20份疑似猪瘟临床样品进行检测,并对检出的山东8株流行野毒株和2株疫苗株PCR产物进行克隆与序列分析,验证上述方法。结果RT-PCR扩增片段为825bp,产物经RFLP分析,野毒株的PCR产物能被ApaⅠ酶切为322bp和503bp 2个片段,兔化弱毒疫苗株则不能被酶切,检测出RNA的最低浓度为0.028 6μg.mL-1;8株流行野毒株都含GGGCCC序列(ApaⅠ酶切位点),2株疫苗株相应序列为GAGCCC,不能被ApaⅠ酶切;8株流行野毒株属于基因2群,2株疫苗株与HCLV遗传关系近,为基因1群。建立了可鉴别猪瘟病毒野毒株和兔化弱毒疫苗株RT-PCR-RFLP检测方法,为猪瘟的防控提供有效手段。     

七种中药对金黄色葡萄球菌的体外抑制试验

选用诃子、黄芩、金银花、鱼腥草、苦参、山豆根、连翘7味中药分别做成中药分别煎剂,使其浓度为1 g/mL,利用平板菌落计数法筛选300 cfu/mL～3 000 cfu/mL的菌液,并将其涂到用Baird-Parker培养基与不同浓度中药混合的药液培养基上,观察不同中药不同浓度对金黄色葡萄球菌的抑制情况.把上述7种中药做成药敏纸片,放到涂有菌液的培养基上,观察抑菌圈的大小.利用方差分析进行差异显著性检验.结果表明,诃子相对于其他中药来说,能很好的抑制金黄色葡萄球菌的生长.     

H9N2亚型禽流感病毒对豚鼠致病力的研究

为了研究用豚鼠建立禽流感动物模型的可能性,试验采用禽流感病毒Ck/HB/4/08(H9N2)鼻腔接种豚鼠,检测H9N2禽流感病毒对豚鼠的致病力。结果表明:感染后的豚鼠出现聚堆、精神不振、流鼻涕等感冒症状,体温及体重均发生显著变化,同时能够产生相应抗体;感染豚鼠的肺脏出现严重的淤血及水肿,肺泡形态发生改变并伴有大量炎性细胞浸润;鼻甲骨和肺脏中可检测并分离到病毒,其他组织器官未检测到病毒。感染豚鼠的临床症状及病理、体重、体温、抗体、肺干湿重的变化和组织中病毒的检测和分离结果说明H9N2亚型禽流感病毒可以感染豚鼠发病,症状明显,但不引起豚鼠死亡,可以建立禽流感感染豚鼠的发病模型。     

一株输入性猫传染性腹膜炎病毒的分离鉴定和遗传特征分析

从北京地区临床疑似传染性腹膜炎患猫的粪便和腹水样品中分离猫传染性腹膜炎病毒(Feline infectious peritonitis virus, FIPV),共采集10份样品进行RT-PCR检测,并接种MDCK细胞进行病毒分离和鉴定。结果表明：10份样品的RT-PCR检测结果均为FIPV阳性,将样品接种MDCK细胞并经连续传代培养,成功分离到一株FIPV,经鉴定属于FCoV-Ⅱ血清型,将其命名为FIPV/BJ01株;该毒株可以在MDCK细胞上增殖并产生典型的细胞病变,病毒滴度为105.5TCID50/0.1mL;S和N基因的核苷酸与其他毒株的同源性分别为63.3%~99.4%和45.5%~992%,均与美国毒株同源性较高,而与中国毒株的同源性较低。     

山东省某猪场仔猪多重混合感染的诊断

2018年3月,山东省青岛市某规模化猪场暴发疫情,每天死亡100余头仔猪。70~80日龄仔猪临床表现为发热、喘气、关节肿大,30~40日龄发病仔猪主要表现为水样腹泻。为确诊引起此次疫情的病原,分析病例发病情况,结合临床症状、病理剖检和实验室诊断,最终判定为猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪圆环病毒2型及猪流行性腹泻病毒的混合感染,且疑似存在猪链球菌和支气管败血波氏杆菌的混合感染。鉴于猪群存在多种病毒和细菌的混合感染,需要采取科学有效的综合防控措施,定期监测猪群疫病的抗体水平,及时调整免疫程序,防止疫病暴发。     

分层次设计，提高动物医学专业实验教学水平

本文在总结分析目前动物医学专业实验教学中存在问题的基础上，依据基础型实验、综合设计型实验和研究创新型实验3个层次，提出了强化基础型实验教学和考核，制作实验微课、做好预习，实验中严格规范实验操作，养成良好实验素养，实验后严格实验课考核；推进综合型实验设置，培养学生综合运用专业知识的能力；采用实验室轮转学习制和导师制鼓励学生积极参与研究型实验等实验教学改革措施，旨在提升学生的实践水平，提高动物医学专业实验教学质量，努力培养优秀的应用型动物医学专业人才。     

一例犬脾脏纤维肉瘤的诊疗研究

为了对临床一例疑似犬脾脏肿瘤病例进行确诊，本文通过临床检查、血液常规检查、血液生化检查、C-反应蛋白（CRP）、影像学以及组织病理学等方面的检查。结果表明，碱性磷酸酶（ALP）异常升高，CRP升高，影像学发现脾脏肿大且脾头处有异常增生物，术后结合脾脏的病理组织学检查，综合诊断为犬的脾脏纤维肉瘤，患犬脾脏肿瘤摘除手术后1 d死亡。通过对本病例的分析，旨在为宠物临床脾脏纤维肉瘤的诊断与治疗提供参考。