山羊痘病毒疫苗株 ORF103基因的克隆、 序列分析及原核表达

根据GenBank已登录的GTPV基因组序列,设计并合成1对特异性引物,以GTPV疫苗株基因组DNA为模板,PCR扩增获得ORF103基因片段并进行序列分析,再将该基因片段亚克隆于原核表达载体pET-28a中,构建重组质粒pET-ORF103,经鉴定正确后转化BL21感受态细胞进行诱导表达,并进行SDSPAGE和Western blot检测。成功克隆GTPV疫苗株ORF103基因片段。重组菌经IPTG诱导后成功表达分子质量约为35ku的重组蛋白,该蛋白能与山羊痘阳性血清特异性结合,具有良好的反应原性。研究结果为GTPV的分子生物学特性研究提供资料,并为进一步研制GTPV抗体检测试剂盒奠定基础。     

猪瘟病毒及其致病机制研究进展

猪瘟（CSF）是猪的一种高度接触性传染病，该传染病可分为急性、亚急性、慢性、非典型性和不明显型。急性CSF由强毒株引发，一般导致高发病率和死亡率，而弱毒病毒感染则表现不明显。由于疫苗的广泛应用，有效地控制了猪瘟的大流行，减少了急性死亡。但从20世纪80年代以后，临床症状不典型且病程变长的非典型性猪瘟（或慢性猪瘟）成为该病的主要发生形式，持续感染普遍存在，疫苗的预防效果明显下降，使猪瘟防制遇到了新的困难。以目前人类对猪瘟的认识水平，尚难以从分子水平解释这一新变化的成因，这是因为对猪瘟病毒致病机理及其分子基础的认识深度不够。就此，文章综述了猪瘟及猪瘟病毒研究进展，主要涉及CSFV生物学特性、致病机制及其防控，希望能为猪瘟防控提供新的思路和对策。     

鸡胚成纤维细胞与鸡气管黏膜上皮细胞共培养体系的建立

【目的】建立鸡气管黏膜上皮细胞(Chicken trachea epithelium cells,CTECs)和鸡胚成纤维细胞(Chicken embryo fibroblasts,CEFs)共培养体系,为CTECs体外培养研究与应用奠定基础。【方法】利用细胞套皿培养方法,使CEFs与CTECs体外共培养在一个营养体系中,用含有不同促细胞生长因子(氢化可的松(HC)、转铁蛋白(TF)、人表皮生长因子(HEGF)或牛垂体提取物(BPE))和血清(胎牛血清、鸡血清)的培养液培养,观察各组CTECs的生长情况,绘制生长曲线,记录CTECs体外生长增殖的特点。【结果】与单独培养的CTECs相比,共培养体系中的CTECs体外贴壁、生长增殖能力均显著提高,72h能够铺满整个培养皿,并呈典型的上皮细胞"铺路石"状排列。共培养体系中的CTECs,在缺少3种重要哺乳动物气管黏膜上皮细胞培养所需的促细胞生长因子培养液中,仍能保持较好的生长能力,大大降低了CTECs的培养成本。【结论】成功建立了CTECs与CEFs的共培养体系,为CTECs的体外培养和应用提供了技术支持。     

母牛生殖激素水平异常与屡配不孕的关系

随着生殖内分泌学研究的深入发展,越来越多的实验表明,家畜的正常怀孕依赖于母体生殖激素水平的正常以及它们之间的协调作用,一旦这种正常水平和协调作用遭到破坏,就会导致不孕或流产。牛的屡配不孕远多于其他家畜,因此对这方面的研究较多且较深入。现有的研究结果提示,母牛发情周期中 LH 峰出现较迟,LH 峰值和峰值外的水平较低,就会造成黄体发育不良,进而导致孕酮分泌不足,最终因外周血中孕酮水平低下和与雌二醇的比例失调而引起屡配不孕。     

应用中医方剂治疗家畜疾病的体会(四)

(一)处方白术25克、生芪35克、干姜25克、厚朴15克、桂枝25克、茯苓25克、炙草20克、陈皮25克,共为细末,开水调服。 (二)主治马骡悬饮,中兽医俗称罗膈水,西兽医称为胸水。病初,咳而胸痛,发热,然多不易确诊。时日既久,转为慢性,胸水增多,现出一派虚寒之象,则不难诊断。症见:口色、结膜淡白;舌体薄瘦绵软;被毛不顺,毛根干枯,即成撮脱落;站立时,两前肢负重不匀,常以一肢前探,若在     

猪外周血液中β-内啡肽与针刺免疫

应用放射免疫分析测定法,观察正常猪和穴位注射及口服接种猪传染性胃肠炎(TGE)疫苗后30分钟、24小时猪的外周血液中β-内啡肽(β-Ep)的含量,分析血中β-内啡肽变化与机体产生抗 TGE 免疫力的关系,以探讨针刺免疫的机理。     

转化生长因子及其与哺乳动物的生殖

哺乳动物的生殖是一个非常复杂的生理过程，受着很多因素的调节。转化生长因子对哺乳动物的生殖过程，包括卵泡的发育、早期胚胎的发育、胚胎组织细胞的分化，以及胎盘的形成与功能的维持，都具有重要的调节作用。本文就这方面的研究进展加以归纳综述。     

延安市鸡新城疫免疫抗体水平测定与分析

为了解延安市各县(区)鸡新城疫的免疫情况和疫苗免疫效果,于2017年春季和秋季分别对延安市甘泉、志丹、吴起、宝塔等13个县(区)的鸡新城疫疫苗免疫鸡进行了新城疫免疫抗体水平检测,并对测定结果进行分析,做出相应的评价,同时在各县(区)进行了调查。结果表明,采集的1 573份新城疫疫苗免疫鸡血清新城疫抗体总体合格率为83.73%,说明延安市13县(区)新城疫免疫抗体合格率较高;但活禽交易市场所采集鸡血清和雏鸡血清鸡新城疫免疫抗体合格率分别为68.93%和75.26%,抗体合格率相对较低,且抗体水平也较低,存在潜在的风险,应该引起足够的重视。经过二免和三免后鸡新城疫免疫抗体水平较高,说明生产中进行二免和三免的免疫操作程序是有必要的和值得推广的。     

牛病毒性腹泻病毒链特异性SYBR Green荧光定量PCR方法的建立及应用

为了对牛病毒性腹泻病毒(bovine viral diarrhea virus, BVDV)复制过程中正、负链RNA进行定量检测,通过生物学软件DNAStar和Primer express 3.0设计BVDV正、负链RNA特异性反转录引物并在其5′端添加非病毒核苷酸标签序列以区分BVDV正、负链RNA。同时设计荧光定量PCR引物与非病毒核苷酸标签序列组成引物对,建立了BVDV链特异性荧光定量RT-PCR(ssRT-qPCR)方法,对其敏感性、重复性、特异性进行评估并利用所建立BVDV ssRT-qPCR对不同接毒剂量下BVDV在细胞内复制过程中正、负链RNA进行定量检测。结果表明,以构建的pMD18T-BV+和pMD18T-BV-质粒为标准品建立的BVDV正链特异性荧光定量RT-PCR方法[ss(+)RT-qPCR]和负链特异性荧光定量RT-PCR方法[ss(-)RT-qPCR]在10~2～10~7拷贝范围内具有良好的线性关系,线性相关系数分别为0.998 1和0.995 3;敏感性试验结果显示,ssRT-qPCR敏感性较好,ss(+)RT-qPCR最低检测下限为10拷贝,ss(-)RT-qPCR最低检测下限为100拷贝。重复性试验结果显示,所建立的ssRT-qPCR批内和批间的变异系数为均小于1%,方法重复性良好。特异性试验显示,所建立的ssRT-qPCR方法与牛副流感病毒3型、牛传染性鼻气管炎病毒、牛呼吸道合胞体病毒等不存在交叉反应,特异性较好。利用建立的ssRT-qPCR对不同感染剂量下细胞内BVDV正、负链RNA进行定量分析,结果显示以10、0.1 MOI剂量接种BVDV于MDBK细胞后,BVDV正、负链RNA变化呈现先升后降再逐渐上升的趋势。以1 MOI剂量感染MDBK细胞,BVDV正、负链RNA的动态变化趋势略有差异,整体呈上升趋势。10、1 MOI接毒剂量接种细胞后,BVDV正、负链RNA在感染后36 h基本维持稳定水平,以0.1 MOI接种细胞后BVDV正、负链RNA在感染后24 h即达到稳定水平。BVDV链特异性检测进一步验证了所建立方法的适用性。该研究建立了BVDV链特异性荧光定量RT-PCR方法并利用该方法对BVDV在细胞内复制过程中正、负链RNA的动态变化过程进行描述,为研究宿主蛋白抗病毒机制、BVDV基因组RNA复制及调控机制等研究提供了研究手段。     

高通量转录组测序技术在猪肉品质研究中的应用进展

猪肉中基因的表达决定了蛋白质的种类、结构和功能,从而决定了肉品质,而肌内脂肪(IMF)和肌纤维(MF)是影响肉品质的关键物质。本文主要综述了高通量转录组测序技术在研究猪肉品质相关的IMF和MF转录组的应用,重点阐述了其研究进展。