马立克氏病肿瘤细胞表面抗原的提取与鉴定

用MDVGA株感染1日龄SPF雏鸡,饲养至发病后获得MD肿瘤细胞,采用木瓜蛋白酶消化法从MD肿瘤细胞上提取马立克氏病肿瘤相关的表面抗原,经间接荧光抗体染色和间接ELISA鉴定,证明获得的粗提物中含有马立克氏病肿瘤相关的表面抗原,为进行马立克氏病肿瘤相关的表面抗原的进一步研究奠定了基础。     

从苦豆子种子中提取生物碱的方法研究

对苦豆子种子中生物碱进行了提取、分离及苦参碱的定性和定量分析的研究。将苦豆子粉碎后,在室温下分别用0.4%盐酸、95%乙醇、1%氨水氯仿、无水乙醇溶剂冷浸7天共4次,经脱脂、酸化、碱化、萃取,得到生物碱;通过薄层层析(TLC)法进行单碱的分离,气相色谱(GC)法进行苦参碱的定性和定量分析。结果表明:以上4种提取方法出碱率分别为3.67%、2.73%、2.47%和1.60%;薄层层析(TLC)检查,以上4种方法提取的苦豆子生物碱中至少含有四种单一生物碱;气相色谱检测证明了以上4种方法提取的苦豆子生物碱中均含有苦参碱,其百分含量分别为8.460%、7.553%、5.675%、0.893%。其中0.4%盐酸冷浸提取法提取率明显高于其他溶剂提取率,为苦豆子生物碱优选提取方法。     

四种紫花苜蓿的核型分析

为研究我国引进和本国育成的适于我国北方不同地区种植的四个紫花苜蓿(Medicago sativa)品种遗传基质的结构特征,对它们进行了细胞染色体的核型分析。试验利用植物压片法对四个品种:阿尔冈金(加拿大)、WL-323ML(美国)、WL-232HQ(美国)、中苜1号(中国农科院畜牧所用中外品种混合选育而成)进行了核型分析,结果表明:四个品种的染色体数目均相同(2n=32),统属于大染色体,但在核型组成上存在有一定的差异。四个品种中多数染色体为中部着丝点,核型多为对称型。但阿尔冈金、WL-232HQ及中苜1号同为2A型,它们相邻间染色体长度变化不大,进化程度相当,而WL-323ML为2C核型。第1,2对及第15,16对相邻间染色体长度变化大,余者变化小。它比前三个品种表现出更为进化的特点。阿尔冈金没有随体,WL-232HQ有1对随体,WL-323ML、中苜1号各有2对随体。     

HRP-SPA ELISA检测猪日本乙型脑炎病毒抗体的研究

将盐析法提纯的、用Hela细胞系增殖的猪日本乙型脑炎病毒JapaneseBencephalitis(JEV)抗原包被酶标板,以HRP-SPA作为第二抗体,建立了检测JEV抗体的ELISA试验方法。结果表明,抗原的最适包被浓度为1∶800,待检血清最适稀释度为1∶50,HRP-SPA最佳工作浓度为1∶1000,各步反应时间确定为5min。交叉试验、阻断试验、重复性试验、敏感性试验证明本实验特异性强,重复性好,敏感性高。包被的病毒抗原经甲醛固定15min即可进行正式试验。确定其测定标准为:S/N≥14.81为阳性,S/N<12.53为阴性,12.53≤S/N<14.81为可疑。     

微管相关蛋白2微管结合区基因的克隆与表达

为了研究微管相关蛋白2(M AP 2)在促进微管形成、维持微管稳定及促进轴突和树突细胞器转运等方面的作用,试验克隆了M AP 2微管结合区基因,构建了原核表达载体pET 32a-M AP 2并对其进行诱导表达,利用亲和层析法对表达产物进行纯化,研究了表达产物与微管蛋白之间的作用。结果表明,融合表达的人M AP 2微管结合区蛋白约43 ku,可与天然的微管蛋白发生分子间的结合作用,为M AP 2生理功能的研究奠定了基础。     

丙型肝炎病毒囊膜蛋白基因E1E2在真核细胞中的表达及动物免疫试验

利用DNA重组技术将丙型肝炎病毒（HCV）H77株E1E2囊膜蛋白基因插入逆转录病毒载体pBABE-puro中，构建成重组逆转录病毒载体pBABE-puro-E1E2，用重组逆转录病毒载体与pVSVg质粒磷酸钙共沉淀法转染293T细胞,包装逆转录病毒假病毒。用包装的假病毒感染SP2/0细胞，经嘌呤霉素筛选阳性细胞后进行流式细胞仪技术（FACS）分析，结果表明,HCV E1E2基因在SP2/0细胞膜上成功表达。将表达E1E2蛋白的SP2/0细胞腹腔免疫BALB/c小鼠，经FACS分析免疫鼠血清，成功诱导小鼠产生了抗HCV E1E2蛋白的抗体，Western blot检测结果表明该抗体能与原核系统表达的E2蛋白结合。     

鸡肾型IBV分离株M基因的克隆与特性分析

依据NCBI所登录的鸡传染性支气管炎病毒的M基因序列设计了一对引物,应用TRIzol试剂盒对8个肾型鸡传染性支气管炎病毒陕西地方分离株进行总RNA的提取,以所得到的RNA为模板,用RT-PCR对M基因进行扩增;其目的条带回收提纯后,与PMD18-T克隆载体进行连接,转化到DH5α宿主菌,并经药物抗性筛选、PCR及酶切鉴定,将所筛选鉴定出的阳性质粒进行测序,最后对测序结果进行分析。结果表明：陕西地方8个毒株（BJ2、FF2、YL2、B01、G5、YX、WH、WG）M基因长约为650 bp,其中YX、WH株本身无BamH 1酶切位点。WH与其它分离株的核苷酸同源性为91.8%～92.6%,而其它的分离株间的同源性为98.8%～99.8%。8个毒株与参考株的核苷酸同源性为74.9%～99.8%。其N端90 aa肽段与对照株相比,不同之处表现为高亲水性氨基酸取代低亲水性氨基酸,这会使其具有更好的抗原性。     

苔藓植物SRAP反应体系的优化

以黄灰藓总DNA为材料,对影响SRAP-PCR反应的模板DNA、Mg2+、dNTP、引物和TaqDNA聚合酶浓度等因素进行了优化,分析了各因素对SRAP-PCR扩增结果的影响。结果表明,在25μLSRAP-PCR反应体系中,最佳反应条件为:模板DNA40ng;Mg2+浓度2.0mmol/L;dNTP浓度0.2mmol/L;正反引物15pmol;TaqDNA聚合酶2.0U。在此条件下,引物组合Me5/em7对13种苔藓植物扩增的条带清晰、多态性好,表明此反应条件适合于苔藓植物的SRAP-PCR反应体系。     

醋酸甲羟孕酮单克隆抗体制备及ELISA检测方法的建立

建立饲料和食品中醋酸甲羟孕酮(MPA)残留快速、灵敏的检测方法.分别以碳二亚胺法、混合酸酐法合成MPA的人工抗原MPA-BSA、MPA-OVA为免疫原和包被原,采用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗MPA单克隆抗体(McAb),在Protein G Sepharose 4 Fast Flow纯化MeAb基础上通过对ELISA反应条件的优化建立了MPA检测的间接竞争ELISA方法,并对MPA标品添加试样进行了初步应用.结果获得1株能稳定分泌抗MPA McAb的杂交瘤细胞株M68F9H9,分泌McAb腹水效价为1∶1×107,属于IgGl亚类,MPA半数抑制浓度(IC50)为5.0 ng/mL,具有良好特异性;以纯化McAb为基础建立的间接竞争ELISA,MPA最低检测限为0.16 ng/mL,线性检测范围为0.1～80 ng/mL;除与甲羟孕酮、甲地孕酮、盐酸克伦特罗、莱克多巴胺和已烯雌酚交叉反应率分别为100%、25%、<0.01%、<0.01%和<0.01%;MPA添加试样应用检测结果与进口试剂盒检测结果相符.     

云台山苔藓植物的生活型及其景观价值

云台山生长着203种苔藓植物,根据群集方式及其生长型特征定义,将云台山分布的苔藓植物的生活型划分为4种类型,分别是丛集型、交织型、垫状型和漂浮型,结合云台山的地质景观、水体景观,探讨了不同生活型苔藓植物产生的生态景观价值.