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为进一步了解乙型脑炎病毒(JEV)减毒疫苗株基因组变异和分子遗传特性,本研究根据已发表的JEV基因组序列,设计合成了8对引物,应用RT-PCR对SA14-14-2-B3株基因组进行了克隆和序列测定,获得了该株病毒的全基因组序列(10977nt)并推导出其编码的氨基酸序列(3432aa)。序列分析表明:SA14-14-2-B3株与疫苗株SA14-14-2和SA(A)及野毒株SA14的核苷酸和氨基酸相似性较高,分别为99.8%、99.9%、99.4%和99.7%、99.8%、99.1%,与猪源分离株HEN0701和KV1899的核苷酸与氨基酸相似性较低,分别为88.5%、88.5%和97.6%、96.6%,比较显示在SA14-14-2-B3株基因组第10700nt处有一碱基"G"的插入。以全基因组为基础,对SA14-14-2-B3株进行遗传进化关系分析,结果表明:SA14-14-2-B3株与SA14源病毒株SA14、SA14-14-2、SA(A)、SA(V)及分离株Beijing-1、p3、WHe和HW的遗传关系较近,与XJP613株和HEN0701株的遗传关系较远。以E基因为基础,对SA14-14-2-B3株进行遗传进化关系分析,结果表明SA14-14-2-B3株属于JEV基因Ⅲ型。 相似文献
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对Ⅰ型鸭肝炎病毒3D基因克隆及其原核表达的研究 总被引:2,自引:0,他引:2
根据Genbank中的Ⅰ型鸭肝炎病毒全基因序列,应用Primer5.0分析软件设计合成了扩增Ⅰ型鸭肝炎病毒3D基因的一对引物,用该特异性表达引物体外克隆1型鸭病毒性肝炎病毒3D基因。构建重组表达质粒pET32a-3D,将此重组质粒转化到受体菌RossetaⅡ(DE3)中进行诱导表达。SDS—PAGE和蛋白质印迹分析表明,诱导4h后表达量达到最高,表达产物大小约为70Ku,表达蛋白能与Ⅰ型鸭病毒性肝炎阳性血清产生特异性免疫反应。 相似文献
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为探究日粮中添加百里香对滩羊肌肉中肌苷酸和肌苷含量的影响,本试验分别在全混合日粮中添加5%百里香组、10%百里香组和对照组(不加百里香)对宁夏滩羊进行饲养,屠宰后利用高效液相色谱分析法,对滩羊背最长肌肉中肌苷酸和肌苷进行了分析。结果表明:日粮中添加百里香可从不同程度上提高肌肉中肌苷酸的含量,影响效果与添加百里香的剂量有关;5%百里香组极显著(P0.01)提高了肌苷酸的含量,且可在一定时间范围内延缓肌苷酸降解生成肌苷,提高了IMP/(IMP+I)新鲜度值,提高羊肉鲜味物质的含量,进而提高羊肉的风味;10%百里香组对肌苷酸和肌苷的影响不大,甚至略有下降的趋势。 相似文献
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通过对GenBank中注册的CSFV序列进行比对分析,针对CSFV NPro/C基因中的保守区域,设计合成了一套RT-LAMP引物,应用含有Npro/C基因的阳性质粒株对RT-LAMP引物进行验证.在成功扩增出特异片段的基础上,用CSFV RNA优化RT-LAMP反应体系和条件,建立了CSFV的可视化RT-LAMP快速... 相似文献
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猪瘟病毒感染对猪外周血T淋巴细胞亚群及TNF-α和IFN-γ的影响 总被引:2,自引:0,他引:2
为探讨猪瘟病毒(CSFV)弱毒株T株和野毒株G株感染对猪外周血T淋巴细胞亚群、TNF-α和IFN-γ的影响,本研究应用流式细胞术和ELISA等方法检测CSFV感染猪与未感染猪的白细胞凋亡、CD4+与CD8+T淋巴细胞亚群数量的动态变化以及TNF-α和IFN-γ的动态变化。结果表明,猪感染CSFV T株和G株第4 d和第7 d后CD4+T淋巴细胞比例分别为28.6%、26%和26%、20%,未感染前分别为33.4%和36.8%。猪感染CSFV T株和G株第4 d、第7 d后CD8+T淋巴细胞比例分别为41%、32%和38%、25%,感染前分别为43.8%和48.8%。外周血白细胞凋亡的检测结果显示,猪感染CSFV T株和G株第7 d后,白细胞凋亡比例分别为8.35%和9.89%,未感染的猪为1.63%。ELISA检测结果表明,猪感染CSFV T株和G株第7 d后,TNF-α的产生量分别为553.4 pg/mL和594.2 pg/mL;IFN-γ的产生量分别为8.2 pg/mL和9.8 pg/mL,未感染猪分别为498 pg/mL、12.5 pg/mL。以上结果提示,CSFV感染会引起机体免疫相关细胞及免疫分子发... 相似文献
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根据美洲型猪繁殖与呼吸综合症病毒(PRRSV)基因组序列设计2对引物,对疑似PRRSV感染猪的病料进行RT-PCR检测,核酸检测阳性病料进行PRRSV分离,获得了1株美洲型PRRSV,命名为GD08-2.对PRRSV GD08-2株、GD-XH株、GD08-1株的ORF5基因和部分Nsp2基因进行序列测定与分析.结果表明,GD08-2株的ORF5基因与PRRSV疫苗株pMLV、经典株VR-2332和GD-XH株的相似性较高,而与GD08-1株的相似性较低.GD08-2株的Nsp2基因推导的氨基酸序列出现12个氨基酸的不连续缺失,分别位于66~74位和192~194位,由此推测,GD08-2株可能为PRRSV的突变株.GD08-1株的ORF5基因与国内分离的高致病性PRRSV相似性较高,其Nsp2基因推导的氨基酸序列存在30个氨基酸的缺失,与国内高致病性PRRSV分离株JXA1的缺失位置完全一致,由此推测,GD08-1株属于高致病性PRRSV;GD-XH株的ORF5基因与疫苗株pMLV的相似性较高,其Nsp2基因存在个别核苷酸的点缺失.遗传进化分析表明,GD08-1株与国内分离的高致病性PRRSV的遗传进化关系较近,属同一分支;GD-XH株和GD08-2株与PRRSV经典株VR-2332、疫苗株pMLV的遗传关系较近,属另一分支. 相似文献
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根据Genbank中的Ⅰ型鸭肝炎病毒全基因序列设计了扩增Ⅰ型鸭肝炎病毒VP1基因的包含有EcoRV和xhoⅠ酶切位点的引物,用该特异性引物从Ⅰ型鸭肝炎病毒cDNA模板中扩增得到目的基因VP1,以相同的限制性内切酶酶切目的基因和表达载体pET32a后构建重组表达载体,经酶切及PCR鉴定筛选出阳性克隆,测序证明目的基因正确插入了表达载体,转化宿主菌RossetaⅡ,用不同浓度的IPTG诱导VP1基因的表达,收集菌液进行SDS-PAGE电泳,Western-blotting分析蛋白免疫原性。结果表明,VP1在大肠杆菌RossetaⅡ中表达量较高,表达产物的分子量约为48ku、并能被Ⅰ型鸭肝炎病毒阳性血清所识别。Ⅰ型鸭肝炎病毒VPI蛋白在大肠杆菌RossetaⅡ中表达产物具有免疫原性。 相似文献