牛副流感病毒3型3种基因型多重RT-PCR检测方法的建立

为建立检测牛副流感病毒3型（bovine parainfluenza virus type 3,BPIV3）3种基因型的多重RT-PCR方法,根据GenBank上发表的BPIV3 3种基因型病毒株的HN基因序列设计特异性引物,优化反应体系建立多重RT-PCR方法。结果显示,方法可同时扩增出BPIV3 A型150 bp、B型253 bp和C型342 bp的特异性片段,与牛传染性鼻气管炎病毒（IBRV）、牛呼吸道合胞体病毒（BRSV）、牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、小反刍兽疫病毒（PPRV）、牛支原体、牛布鲁氏菌、羊布鲁氏菌、牛源多杀性巴氏杆菌A型和B型均无交叉反应,A、B、C基因型BPIV3最低阳性质粒检测量分别为0.89×10⁴、0.92×10⁴和1.53×10⁴拷贝/μL。本试验建立的多重RT-PCR检测方法操作方便、特异性强,应用于临床样本的检测,可快速检测BPIV3 3种基因型。     

口蹄疫诊断研究进展

口蹄疫是一种严重影响畜牧业生产,造成巨大经济损失的急性传染病,各国都采取了多种措施控制该病的发生.而防制口蹄疫的重要环节是要作出及时准确的诊断.随着对口蹄疫研究的不断深入,各种技术的不断出现,口蹄疫诊断技术也得到了空前发展.笔者就口蹄疫诊断方法,从传统的诊断方法、ELISA诊断方法、分子生物学诊断方法以及区分免疫动物和自然感染动物的研究进行了综述.     

禽流感

禽流感是由禽流感病毒引起的禽类发生的急性高度接触性传染病,全称为禽流行感冒(Avian Influenza,AI),简称禽流感,又称真性鸡瘟(Fowl plague)、欧洲鸡瘟。本病传播迅速,常呈流行性或大流行性发生。可有急性败血症、呼吸道感染以至隐性经过等多种临诊表现。禽流感是所有禽病中最致命的,而且常常引起家禽几乎100％的损失。是严重危害畜牧业和人类健康的一种传染性疾病,世界动物卫生组织(OIE)和我国规定该病为A类烈性传染病。     

鸡新城疫Ⅰ系疫苗株Vero细胞培养物的免疫试验及Vero细胞的致瘤性检查

对鸡新城疫Ⅰ系毒 Ｖｅｒｏ 细胞培养物进行了安全性及免疫试验。结果表明, Ⅰ系毒 Ｖｅｒｏ 细胞培养物对２月龄鸡是安全的。免疫试验结果表明, Ⅰ系毒 Ｖｅｒｏ 细胞培养物与鸡胚毒一样, 具有良好的免疫原性, 免疫２ 月龄鸡４ 个月后, Ｈ Ｉ抗体还在６ｌｏｇ２ 以上, 免疫成年鸡１３ 个月后, Ｈ Ｉ抗体还高达５５ｌｏｇ２ 。试验还证明, Ｖｅｒｏ 细胞对鸡没有致瘤性, 安全可靠, 可以用于鸡新城疫疫苗的生产。     

舍饲绒山羊布鲁氏菌病和蓝舌病血清流行病学调查

为了查明某绒山羊舍饲基地绒山羊流产、早产,羔羊死亡的病因.按国家布鲁氏菌病和蓝舌病检疫规程,采用血清凝集试验和琼脂扩散试验,对该绒山羊舍饲基地舍饲的绒山羊及其周边养殖户放养的绒山羊进行了布鲁氏菌病和蓝舌病血清流行病学调查.结果显示:舍饲绒山羊布鲁氏菌病和蓝舌病血清抗体阳性率分别为12.6%和21.9%;放养绒山羊布鲁氏菌病和蓝舌病血清抗体均为阴性.结果表明:该绒山羊舍饲基地舍饲的绒山羊中存在布鲁氏菌病和蓝舌病,应采取有效的综合防治措施加以控制.     

鸡病毒性关节炎病毒B-98株S1基因的克隆与序列分析

本试验对鸡病毒性关节炎病毒（AVAV）包头地区分离株（B-98株）进行总RNA的提取。参考GenBank中ARV—S1133株s1基因组序列设计两对引物，应用RT—PCR技术特异性地扩增病毒的S1基因的eDNA片段，将s1基因eDNA克隆到pGEM—TEasy载体后进行测序。ARVS1基因包含3个开放阅读框（ORF1，ORF2和ORF3），分别编码P10、P17和SigmaC蛋白。应用计算机软件把所测得的序列与参考毒株ARV-176，ARV-138，ARV—S1 133，Muscovy duck reovirus strain YJL（MDRV—YJL）的s1基因3个阅读框的核苷酸序列进行比较分析。结果表明：AVAVB-98株与ARV-176株P10、P17和SigmaC蛋白的核苷酸序列的同源性最高，与ARV—S1133株、MDRV—YJL株的同源性次之，与ARV-138株的同源性最低。     

干扰素的研究进展

干扰素是人和动物细胞受到适宜的刺激产生的一种微量的、具有高度生物学活性的糖蛋白。该文就干扰素的分类、分子结构、作用机理、生物学活性、体外重组技术以及临床应用等方面的研究进展进行了综述。     

鸡新城疫Ⅰ系毒在Vero细胞上的传代培养

本文将鸡新城疫Ⅰ系毒在Vero细胞上进行了传代培养。结果表明,鸡新城疫Ⅰ系毒可以适应Vero细胞并能产生明显的细胞病变。虽然其传代培养物的血凝价较低(1∶10～1∶40),但是,其培养物的TCID_(50)值较高,达10~(-9.7)/0.05ml。此外MLD,MDT/MLD和EID_(50)的测定结果也表明,Ⅰ系毒Vero细胞传代毒与鸡胚毒具有相同的毒价。Vero细胞有可能用于鸡新城疫Ⅰ系毒的传代培养。     

牛源多杀性巴氏杆菌PlpE蛋白的原核表达及多克隆抗体制备

为体外表达牛源多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)PlpE基因及制备抗PlpE蛋白多克隆抗体,根据PlpE基因核酸序列设计了1对特异性引物,通过PCR扩增PlpE基因,构建重组质粒pET-32a-PlpE;摇菌提取质粒,进行双酶切鉴定,鉴定正确后将重组质粒pET-32a-PlpE转化至BL21(DE3)感受态细胞,加入IPTG进行诱导,对诱导蛋白进行SDS-PAGE和Western Blot鉴定;使用纯化蛋白PlpE免疫北京大耳白兔,制备多克隆抗体,并进行间接ELISA和Western Blot分析。结果显示,扩增的PlpE基因大小为1 050 bp,在原核细胞中诱导表达的PlpE蛋白约56 kDa。间接ELISA结果显示,所制备多克隆抗体效价可达1:512 000;Western Blot结果显示,所制备多克隆抗体反应性良好。PlpE蛋白的成功表达和多克隆抗体的成功制备,为下一步多杀性巴氏杆菌诊断方法的建立和疫苗研发奠定了基础。     

鉴别牛羊布鲁菌实时荧光定量PCR方法的建立

[目的]建立准确、快速检测布鲁菌、羊种布鲁菌、牛种布鲁菌的方法。[方法]以BCSP31作为布鲁菌菌属特异性基因,以IS711插入元件作为布鲁菌菌种特异性标志,设计引物和Taqman探针;分别构建标准阳性质粒模板,将其10倍倍比稀释作多重实时荧光定量PCR标准曲线,评价多重实时荧光定量PCR反应体系的敏感性、特异性、重复性。[结果]建立了鉴别牛种、羊种布鲁菌的实时荧光定量PCR方法,并用该方法对临床样品进行检测。[结论]所建立的多重实时荧光定量PCR诊断方法能够快速、准确地鉴别牛种和羊种布鲁菌。