内蒙古地区鸡沙门氏菌病流行病学调查

对内蒙古呼和浩特、包头、集宁、丰镇、东胜、临河、赤峰、通辽８个地区的２７个养鸡场随机采取血清样品共１２８２４份,采用平板凝集试验,进行鸡白痢、鸡伤寒抗体检测。结果表明,父母代蛋种鸡平均阳性率为２０．６６％,最高达４６．２５％,最低为１．３３％;商品蛋鸡平均阳性率为４７％,最高达７０％,最低为３２．５％;父母代肉种鸡平均阳性率为１２．６６％,最高达３８％,最低为１．０８％;商品肉鸡平均阳性率为７２．     

三株牛支原体的致病性比较

为检测从内蒙古发病牛场分离到的3株牛支原体(HS2019、HSZ2019、HSS2019)的致病性,对其进行本动物回归试验,通过观察攻毒后的临床症状、病理变化,以及应用实时荧光定量PCR确定组织器官中支原体载量,分析3株支原体的毒力.结果显示,3株牛支原体回归牛体后均使试验牛出现体温升高、咳嗽、呼吸困难等临床症状,解剖...     

牛病毒性腹泻/粘膜病病毒的分离鉴定 Ⅰ.病毒分离培养、理化特性测定、中和试验

用牛睾丸细胞,从呼和浩特市某奶牛场病牛脾脏中分离出1株病毒,并对其细胞培养特性、形态特征、核酸类型和对某些理化因素的敏感性进行了观察和检测,均与BVD—MDV一致,进一步用标准BVD—MDV Oregon C_(24)V阳性血清对分离病毒进行中和试验,结果为阳性。表明该病毒为BVD—MDV。     

牛传染性鼻气管炎病毒内蒙古分离株gB、gC、gD基因的分子克隆与序列分析

对牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)内蒙古分离株gB、gC、gD基因进行克隆和序列测定,结果表明IBRV内蒙古分离株gB、gC、gD基因序列分别为2 850、1 723、1 559bp,编码933、508、417个氨基酸组成的完整开放阅读框。序列比较和系统进化树分析结果显示:内蒙古分离株与其他毒株gB、gC、gD基因核苷酸序列的相似性为94.9%～99.9%,其推导的氨基酸相似性在90.3%～99.7%,不同IBRV毒株gB、gC、gD基因在核苷酸和氨基酸水平上高度保守。在系统进化树中内蒙古分离株与瑞典毒株亲缘关系较近,属于同一个分支。     

鸡传染性喉气管炎病毒的分离与鉴定

采用鸡胚传代方法从内蒙古地区两个发病鸡场分离到两株传染性喉气管炎病毒(分别命名为ILTV-NM98a、ILTV-NM98b株),进行了系统的常规生物学特性和部分分子生物学特性鉴定。结果表明,两个分离株对乙醚、氯仿、热均敏感。电镜下可见病毒粒子近似球形,有囊膜,大小在150~300nm之间。两分离株均能被标准阳性血清中和。接种60日龄抗体阴性鸡的发病率分别为100％和80％,死亡率分别为26.7％和6.7％。以两个分离株及参考株的DNA为模板,gB-1、gB-2为引物,以PCR方法扩增出gB基因片段,片段大小完全一致。扩增产物经Pst Ⅰ、Bg1Ⅱ、HindⅢ内切酶酶切后的酶切图谱与参考株完全一致。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5重组蛋白对外周血单个核细胞功能的影响

为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5重组蛋白(rGP5)对猪外周血单个核细胞(PBMC)功能的影响,本研究选取PRRSV-PC疫苗株中的ORF5基因片段,对其进行原核表达并纯化,结果显示rGP5以可溶性和包涵体两种形式表达,分子质量约为30 ku;将该纯化蛋白免疫大耳白兔,按常规方法制备抗血清并进行酶联免...     

两株1型鸭甲肝病毒山东分离株的鉴定与致病性分析

鸭病毒性肝炎(DVH)是危害雏鸭的一种急性高度致死性传染病,引发DVH的主要病原体为鸭甲肝病毒(DHAV),其中1型鸭肝炎病毒在中国各省流行最广.本研究于2018年从山东某养鸭场的病料中分离得到两株DHAV,经分子生物学鉴定、序列比对和进化树分析,鉴定引起雏鸭患病的病原体为DHAV-1.经过纯化后,对SPF雏鸭进行致病...     

应用巢式POR方法检测牛支原体肺炎

根据Genbank发表的牛支原体全基因序列,设计2对特异性引物,建立了诊断牛支原体肺炎的巢式PCR方法,第一轮引物P1、P2扩增片段长度为1912bp,第二轮引物P3、P4扩增片段长度为422bp：该方法特异性试验未扩增出丝状支原体丝状亚种小克隆和无乳支原体特异性条带;敏感性试验证明扩增DNA最低含量达到10—7Hg／mL,是单一PCR的10^3倍;用该方法对阳性病料进行检测,均扩增出特异性片段。该体系的成功构建,可以为牛支原体肺炎的活体检测,和流行病学调查提供技术支持。     

A型塞内卡病毒VP1结构蛋白在昆虫杆状病毒中的表达与鉴定

目前在昆虫杆状病毒表达系统（baculovirus expression vector system,BEVS）中表达A型塞内卡病毒（Senecavirus A,SVA）结构蛋白VP1尚未见报道。本研究将VP1基因通过限制性酶切位点插入杆状病毒载体pFastBac I,然后将鉴定正确的重组载体转化至DH10Bac感受态细胞,经蓝白斑筛选,对鉴定正确的菌落提取质粒。将质粒转染Sf9昆虫细胞,待有明显细胞病变后收获重组杆状病毒rBac-I-VP1,并进行病毒滴度测定。随后通过蛋白免疫印记（Western Blot）和间接免疫荧光（IFA）鉴定VP1蛋白表达情况。结果显示,重组杆状病毒rBac-I-VP1滴度为6.8×105 pfu/mL;Western Blot可检测到相对分子质量约27 kDa的表达产物,且其能够被SVA兔阳性多克隆血清识别;IFA试验显示,VP1蛋白能够在Sf9细胞内表达。结果表明,本研究利用BEVS表达的SVA VP1蛋白具有良好的免疫反应性,为其后期功能研究及SVA诊断试剂研制提供了技术基础。