H5亚型禽流感病毒HA1基因在Sf9昆虫细胞中的表达及其抗原性检测

利用pBlueBacHis2杆状病毒载体在昆虫细胞Sf9中表达H5亚型禽流感病毒（AIV）的HA1基因。Western-blotting证明HA1在昆虫细胞中得到了表达，其产物具有抗原性；且不与H7、H9AIV的抗血清发生交叉反应，具有良好的特异性。Dot-ELISA结果显示，表达蛋白可以在非变性条件下与相应抗体作用，同样具有良好的抗原性。试验结果证明，表达的H5亚型AIV的HA1蛋白，为检测禽类体内是否感染H5亚型AIV和监测免疫禽类血清H5抗体水平提供了优良的检测抗原。     

志贺样毒素Ⅱ型变异体B亚基单克隆抗体的制备

为建立针对仔猪水肿痛SLT-Ⅱe毒素的检测方法,应用PCR技术克隆SLT-Ⅱe B基因,并将其克隆到原核表达载体pET-30a进行表达.以纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,并利用淋巴细胞杂交瘤技术获得6株稳定分泌抗SLT-Ⅱe B的单克隆抗体(McAb)细胞株,其抗体亚类包括IgM、IgA、IgG2b和IgG2a,而且轻链均为K链.阻断ELISA结果显示,6株McAb均能特异性识别天然SLT-Ⅱe毒素.相加ELISA结果显示,3G7和4F3两株是针对不同抗原表位的McAb.     

猪轮状病毒国内分离株JL94 VP7基因克隆与真核表达质粒的构建

用MA104细胞培养增殖了轮状病毒地方分离株JL94。利用一对根据Genebank中已发表的轮状病毒VP7基因cDNA序列而设计并合成的引物，通过逆转录－聚合酶链反应（RT－PCR）从JL94毒株扩增出VP7基因全长cDNA。将其插入pMD18-T载体中，构建了重组质粒pMD18-T-JL94/VP7,并对其进行了HindⅢ，HindⅢ和BamH I的单、双酶切初步鉴定及其核苷酸序列测定，证明pMD18-T-JL94/VP7的插入基因为轮状病毒的VP7基因。重新设计一个带有Kozak序列的上游引物，通过PCR扩增出带有Kozak序列的vp7基因并将其插入pMD18-T载体中构建了重组质粒pMD18-T-VP7,酶切鉴定其大小和方向后，与真核表达载体pcDNA3.1( )分别用HindⅢ和BamH I双酶切，胶回收纯化后连接。经酶切和核苷酸序列检测鉴定，成功地构建了真核表达质粒pcDNA-VP7。     

禽流感病毒(H9N2)地方株NA基因的克隆及序列分析

禽流感(Avian Influenza，AD是由A型流感病毒引起各种家禽及野生禽类感染或发生疫病综合征的传染性疾病。该病自1878年首次报道以来已有100多年的历史，目前已流行于世界上许多国家和地区，给养禽业造成了巨大的经济损失。禽流感病毒(AIV)囊膜镶嵌的两种纤突一血凝素(HA)和神经氨酸酶(NA)，与病毒的毒力、传播关系密切。     

产不耐热肠毒素大肠杆菌减毒突变菌株的毒性和免疫应答评价

为探究表达不耐热肠毒素突变体(mLT)的产肠毒素大肠杆菌(ETEC)突变菌株黏膜免疫原性以及作为口服疫苗的应用前景,本研究采用细菌平板计数法、电镜观察和药物敏感试验检测了已构建的mLT突变菌株在LB液体培养基和人工胃肠环境下的生长曲线、菌毛生长和对抗生素的耐药性能,结果显示E.coli mLT-S63K、E.coli ...     

H5亚型AIV HA和HA1的Sf-9昆虫细胞表达及其作为检测抗原的初步比较分析

利用杆状病毒表达系统,在昆虫细胞Sf-9中分别表达了H5亚型禽流感病毒的HA、HA1。相同表达条件下,Western Blot分析比较表明,HA、HA1均与H5亚型AIV抗血清反应,且不与H7、H9亚型AIV抗血清发生交叉反应,具有良好的特异性;以Western Blot检测鸡、鸭AIV抗血清,初步表明,重组杆状病毒表达的HA、HA1均可作为H5亚型AIV血清检测的抗原,HA优于HA1。