猪轮状病毒JL94株VP6基因克隆及同源性比较

通过反转录-聚合酶链反应(RT～PCR)扩增了猪轮状病毒国内地方分离株JL94的VP6基因cDNA片段。将其插入克隆载体质粒pMD18-T 的EcoRV酶切位点处，构建了重组质粒pMD18-T—VP6。对克隆的VP6基因进行序列测定，测序结果显示VP基因全长1356bp，并与猪A群轮状病毒OSU(亚组Ⅰ),Gottfried(亚组Ⅰ)的VP6进行同源性比较，结果显示，核苷酸序列同源性分别为86．85％、82．41％，氨基酸序列同源性分别为97．48％、93．20％，结果表明JL94分离株与OSU株在基因型上更为接近。     

以免疫纳米微球为凝集原的犬细小病毒2型抗体凝集检测方法的建立

为建立以红色聚苯乙烯纳米微球为载体的犬细小病毒(CPV)抗体检测的间接凝集方法,本研究表达纯化了CPV-2VP2截短的重组蛋白rsVP2,并以rsVP2为致敏原与纳米微球偶联制备了免疫彩色纳米微球;通过对反应条件的优化,建立了一种快速检测CPV-2抗体的间接凝集方法。特异性试验结果显示,致敏微球仅与CPV-2阳性血清发生凝集反应,不与犬瘟热病毒、狂犬病病毒和犬腺病毒的阳性血清发生凝聚反应,特异性强;该凝集方法检测血清中和抗体的最低效价为1∶256;同一批次制备的3份致敏微球、3个不同批次制备的致敏微球以及4℃保存90d的致敏微球与CPV-2阳性血清的凝集反应特异性一致,凝集程度无明显差异,重复性稳定性均较好。该间接凝集检测方法对40份血清样品的检测结果与ImmunoComb■ Canine VacciCheck试剂盒(Dot-ELISA)检测结果的阳性符合率为97%。本研究建立的间接凝集方法为幼犬CPV-2母源抗体或免疫犬CPV-2抗体检测提供了一种快速、简便、准确、经济的方法。     

实验动物学的教学改革探索

实验动物学是一门涵盖多学科领域的新兴课程,其发展也是衡量一所院校教学、科研水平高低的重要标志之一,在动物医学本科专业开设本门课程有助于学生拓展科研思路和工作途径。文章着重论述了实验动物学课程的重要性,并就实验动物学在动物医学本科专业教学过程中存在的主要问题及应对措施等进行探讨。     

犬瘟热病毒N基因环介导等温扩增检测方法的建立

为建立犬瘟热病毒(CDV)环介导等温扩增(LAMP)检测方法,本研究根据GenBank中CDVN基因保守序列设计合成了2对LAMP引物,内引物FIP、BIP和外引物F3、B3。以CDVN基因重组质粒(pMD-CDV-N)为模板,经反应条件优化、特异性试验、敏感性试验及临床样品检测。检测结果显示,该方法于61℃水浴60min即可完成反应,最低检出量为70个拷贝,比RT-PCR灵敏10倍。该检测方法仅对CDV产生阳性扩增,而对狂犬病毒,犬细小病毒,犬腺病毒Ⅱ型扩增结果均为阴性。用建立的LAMP方法检测临床样品,检测结果与RT-PCR检测结果一致。本方法简便,特异,有利于CDV的临床检测。     

牛呼吸道疾病综合征的主要病原

近年来,国内外奶牛呼吸系统疾病频发,国外学者将由多种病毒或细菌引起的牛肺炎、运输热、支气管炎等统称为牛呼吸道疾病综合征(Bovinerespiratory disease complex,BRDC).该病在世界范围内普遍存在,据统计,养牛业中65％的疾病与牛呼吸道疾病相关,感染率达100％,死亡率可达35％或更高.尤其是当病毒性和细菌性病原体相互作用时常会使牛呼吸系统疾病病情加重,导致严重的肺炎.引起BRDC的病毒包括牛传染性鼻气管炎病毒,牛呼吸道合胞体病毒,牛副流感病毒3型等;细菌包括溶血性曼氏杆菌、睡眠嗜血杆菌、多杀性巴氏杆菌、化脓性隐秘杆菌等.     

一株混合O血清型猪水肿病大肠杆菌的分离与鉴定

从具有典型临床症状和病理剖检变化的病死猪肠系膜淋巴结中分离到的1株革兰阴性细菌,通过菌体形态观察,染色、生化试验、SLT-Ⅱ e基因检测、O血清型鉴定、动物试验,其结果证明分离菌为O26、O139、O142混合血清型,产SLT-Ⅱ e大肠埃希氏杆菌.SLT-Ⅱ e基因序列与GenBank上发表的参考序列(序列号为AY368993)的同源性达100%.用粗提的毒素经腹腔注射小鼠后引起小鼠后肢麻痹、死亡和胃肠水肿.     

BALB/c鼠口服免疫猪水肿病大肠杆菌基因突变菌株的免疫效果

为了研究猪水肿病(ED)大肠杆菌SLT-Ⅱe基因突变菌株作为口服疫苗的免疫效果,本实验用已构建的猪ED大肠杆菌SLT-Ⅱe基因突变菌株口服免疫BALB/c小鼠,检测其血清中的IgG抗体及粪便和肠黏液中的slgA抗体水平,并进行淋巴细胞增殖检测及攻毒保护实验.结果表明该基因突变菌株具有良好的免疫性,能诱导小鼠体内产生IgG和sIgA抗体,并且能引起T淋巴细胞增殖反应.攻毒保护实验结果显示,口服免疫突变菌株能对小鼠提供良好的保护,保护率为75%(15/20).本研究结果证明,该大肠杆菌基因突变菌株在小鼠体内能激发体液免疫和细胞免疫反应,可作为猪ED口服疫苗的候选菌株.     

猪轮状病毒地方株JL94株VP4基因的克隆与序列分析

根据GenBank已发表的猪轮状病毒VP4基因保守序列,利用Oligo4.1软件设计一对引物扩增猪轮状病毒地方株JL94株VP4全基因序列;并将扩增产物与pMD-18T载体连接,经鉴定后将重组质粒进行测序并与国外分离株CRW-8株、BEN-307株进行核苷酸和氨基酸序列同源性比较分析.结果表明:JL94株和CRW-8株、BEN-307株VP4全基因片段核苷酸同源性和氨基酸同源性分别为96.98%和98.05%,说明JL94株与CRW-8株、BEN-307株属于同一VP4血清型.本研究为进一步研制诊断性抗原和病毒重组活载体疫苗奠定了基础.     

牛源性Escherichia coli O157??H7分离鉴定、耐药性及耐药基因分析

了解某牛场犊牛群发腹泻后继发胸膜炎、腹膜炎并造成犊牛大量死亡的主要病原菌及其耐药性情况。采集病死犊牛肺、腹膜和肠系膜等脏器,进行病原菌分离、鉴定,并对分离的主要致病菌株进行药敏试验及耐药基因检测。结果表明,引起此次犊牛腹泻及胸膜炎、腹膜炎的主要致病菌为E.coli O157：H7;药敏试验结果表明分离菌对青霉素、四环素和氨苄西林等12种抗生素耐药,对头孢哌酮、头孢他啶、丁胺卡那等8种抗生素敏感,表现为多重耐药。该分离菌同时携带tetB、strB、aadB、aphA、floR和TEM等耐药基因,耐药基因型和耐药表型不完全相同。研究可为E.coli O157：H7的防治和耐药性控制提供依据。     

流感病毒(H9N2)地方株NA基因的克隆及序列分析

禽流感 (Avian Influenza,AI)是由 A型流感病毒引起各种家禽及野生禽类感染或发生疫病综合征的传染性疾病 [1] 。该病自 1878年首次报道以来已有10 0多年的历史 ,目前已流行于世界上许多国家和地区 ,给养禽业造成了巨大的经济损失 [2～ 3 ]。禽流感病毒 (AIV)囊膜镶嵌的两种纤突—血凝素 (HA)和神经氨酸酶 (NA) ,与病毒的毒力、传播关系密切 [4] 。 NA是 AIV表面仅次于 HA的一种重要抗原 ,具有唾液酸酶的活性 ,可以在病毒感染靶细胞时 ,识别细胞表面流感病毒受体末端的唾液酸残基 ,使病毒能够进入细胞 ;NA的另一个功能是为要出芽的…