硫酸新霉素注射对雏鸡大肠杆菌病的疗效研究

以试管两倍稀释法测定硫酸新霉素对鸡大肠杆菌的最小抑菌浓度,然后对人工诱发大肠杆菌病雏鸡进行肌肉注射给药3天的治疗试验。结果表明,硫酸新霉素对鸡大肠杆菌的最小抑菌浓度为1．75mg／L;硫酸新霉素高剂量组、中剂量组、低剂量组对鸡大肠杆菌病的治愈率分别是13．3％、50％、86．7％,而感染对照组的死亡率为83．3％。硫酸新霉素低剂量肌肉注射对鸡大肠杆菌病有较好的治疗作用。     

不同毒株鸡传染性支气管炎病毒与鸡新城疫病毒接种鸡胚联合培养相互作用研究

本实验目的在于探讨不同毒株鸡传染性支气管炎病毒和鸡新城疫病毒混合接种同一鸡胚尿囊腔培养时二者之间的相互作用。分别将按２００倍、５００倍、１０００倍不同浓度稀释的鸡传染性支气管炎病毒Ｆ３株、肾型Ｊ株、Ｈ１２０２８／８６株,Ｈ５２和Ｈ１２０株和１００倍稀释的Ｌａｓｏｔａ鸡新城疫病毒联合接种到１０日龄鸡胚尿囊腔,同时设单独培养作对照,９６小时后收取尿囊液,用对流免疫电泳法检测鸡传染性支气管炎病毒效价,用血球凝集试验检测尿囊液鸡新城疫病毒效价。结果表明,鸡新城疫病毒对鸡传染性支气管炎病毒增殖无明显促进作用,但无抑制现象;鸡传染性支气管炎病毒浓度过大时,对鸡新城疫病毒有一定抑制作用,在适当浓度时二者之间无干扰作用。以ＮＤＶ１００倍ＩＢＶ１０００倍稀释混合作用后联合接种培养对二者效价均无明显干扰,ＮＤＶ血凝效价可达１１ｌｏｇ２,ＩＢＶ对流免疫电泳沉淀效价可达９ｌｏｇ２,效果最佳。联合培养省时、省力、节约鸡胚损耗。     

鸡IL-18重组真核表达载体的构建及其对ND灭活苗的佐剂作用

从pGEM-ChIL-18克隆质粒扩增获得鸡IL-18(ChIL-18)全基因片段,并将其重组到真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1/ChIL-18(简称pChIL-18).经PCR、酶切和基因测序证实,所获重组质粒含有目的片段,且连接、构建正确.pChIL-18转染Cos7细胞,转染细胞中含ChIL-18基因的mRNA,表达产物对鸡淋巴细胞具有明显诱导转化作用.pChIL-18对ND灭活苗免疫增强作用的研究表明pChIL-18能够提高ND灭活苗诱发的细胞免疫应答,为后续基因疫苗的研究奠定基础.     

猪干扰素α和γ在杆状病毒中共表达及对PRRSV抑制作用

[目的]制备复合型猪干扰素α和γ进行应用抗病毒研究.[方法]本研究应用Bac-to-Bac杆状病毒/昆虫细胞表达系统,将编码猪干扰素α和γ成熟蛋白基因插入供体质粒pFastBacDual,分别置于PH和P10启动子控制下,引入蜂素信号肽(honeybee melittin signal peptide,HBM)基因取代猪干扰素α和γ原有信号肽基因以实现分泌型表达,并在C端分别融合6个组氨酸标签以利于纯化.将构建质粒转化DH10感受态细胞进行同源重组,获得重组穿梭质粒Bacmid,转染对数生长期的Sf9昆虫细胞获得重组杆状病毒.重组杆状病毒感染昆虫细胞,鉴定重组蛋白的活性.[结果]通过问接免疫荧光、Western-blot证明猪干扰素α和γ重组蛋白在重组杆状病毒感染的昆虫细胞中均获得表达,表达产物主要分布在培养上清中.通过在猪肾细胞(PK-15)上抑制水泡性口炎病毒(VSV)致病变作用检测重组蛋白的抗病毒活性,结果表明:昆虫细胞上清的抗病毒效价达到3.24×10<'7>U·mL<'-1>.在Marc-145细胞,昆虫细胞上清经2<'-11>稀释能够抑制100个TCID<,50>的PRRSV的致细胞病变作用.[结论]应用杆状病毒表达系统实现猪干扰素α和γ在昆虫细胞上分泌共表达,重组蛋白在细胞上对PRRSV具有抑制作用.     

黄牛传染性肠炎的病原鉴定与防治研究

以郸城、鹿邑、沈丘、商水、唐河等县为基点,对豫东、西、南部及皖西广大地区流行的以腹泻为特征的黄牛传染性肠炎进行了全面深入地调查研究。结果表明,成年黄牛发病率为5.3%,犊牛发病率达61%,致死率为7.1%。经采集542份病料作细菌学检验证实,致病性大肠杆菌(E·Coli)感染率为25%,沙门氏杆菌(S·typhimurium)感染率为24%,肺肠型多杀性巴氏杆菌(P.multocida)感染率占9.5%。在此基础上又采集341份病料,经电子显微镜、免疫电泳等形态及血清学鉴定,结果发现牛病毒性腹泻病毒(Bo-vine virus diarrhea virus)感染率为45%,轮状病毒(Rotavirus)感染率占67%,冠状病毒(Coronavirus)感染率占11%,并可导致混合感染和继发感染。从而首次在我省发现黄牛传染性肠炎是由致病性大肠杆菌、沙门氏杆菌、轮状病毒、冠状病毒等犊牛腹泻病原和牛病毒性腹泻病毒两类病原所致的综合性感染症。依据类属抗原交叉免疫的原理,试用并推广了用猪瘟兔化弱毒疫苗代替BVD 疫苗对孕牛进行预防接种以减少犊牛发病率和中西结合的综合疗法,对于控制本病的发生和蔓延起到了决定性作用。     

固始鸡α干扰素基因克隆与序列分析

参照GenBank上登陆的鸡α干扰素基因序列设计一对引物,应用PCR技术直接从固始鸡肝组织基因组DNA中扩增鸡α干扰素基因.将特异性片段克隆入pGEM-T Easy载体中,转化JM109感受态细胞,经质粒PCR鉴定及酶切鉴定筛选阳性菌株送往大连宝生物公司测序.测序结果表明,固始鸡α干扰素基因为582 bp.用DNAStar软件对克隆的固始鸡α干扰素基因与GenBank发表的其它品种鸡α干扰素基因序列进行同源性分析,核苷酸同源性在97.9%以上,氨基酸同源性在96.9%以上.     

黄芪板蓝根等多糖成分对鸡淋巴细胞体外增殖的影响

为了筛选免疫增强作用较好的单味中药成分(CHP),将6种浓度的黄芪多糖(APS)、牛膝多糖(ABPS)、板蓝根多糖(IRPS)、山药多糖(DOPS)等4种中药多糖分别加入到体外培养的鸡脾脏淋巴细胞中,培养48 h后,用MTT法测定淋巴细胞增殖的变化.结果表明,4种中药多糖在适宜的浓度下均能促进淋巴细胞增殖及协同LPS的作用.除ABPS外其余3种多糖在一定浓度下还能明显协同ConA刺激淋巴细胞增殖,其中以IRPS的作用最强.     

京巴犬α-干扰素全基因的克隆与分子进化分析

根据基因库(CenBank)中收录的犬α-干扰素(IFN-α)基因核苷酸序列(AB102731),设计并合成了1对引物,PCR扩增京巴犬IFN-α全基因,并克隆、测序.结果表明,犬IFN-α基因全基因序列为564 bp,包含1个开放阅读框,编码187个氨基酸的多肽,推导氨基酸序列有3个潜在的N-糖基化位点,有10个与二硫键形成有关的半胱氨酸.序列比较分析发现,京巴犬IFN-α基因序列与GenBank发表的其它品种犬IFN-α基因序列核苷酸同源性为96.3%以上,氨基酸同源性为94.1%以上,其中与AB102731核苷酸同源性最高,为99.5%.仅有3个碱基差异.京巴犬与人和其他8种动物的IFN-α基因序列分析和系统进化分析表明,IFN-α基因存在种属的差异性,亲缘关系越近,同源性越高.京巴犬IFN-α基因的成功克隆为进一步研究犬IFN-α基因表达、生物学活性和应用奠定基础.     

利用Real-time PCR技术检测猪细小病毒在PK-15细胞增殖动态研究

将猪细小病毒HNI株接种于PK-15细胞,用TaqMan荧光定量PCR方法研究了猪细小病毒增殖的基本特征与规律.结果表明,在PK-15细胞中,病毒在接种后2 h开始增殖,在12～60 h增殖最为迅速,在60 h病毒达到增殖最高峰.研究还发现在6 h病毒开始释放,72 h达到最高峰.