猪Fc受体γ亚单位基因克隆与原核表达

应用RT-PCR技术从90日龄健康仔猪肺巨噬细胞中克隆出猪Fcγ亚单位的cDNA序列,并将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-FcRγ,成功表达了分子量约为29 kDa的γ亚单位重组蛋白。将重组蛋白FcRγ-His免疫小鼠,制备获得鼠抗FcRγ-His重组蛋白多克隆抗体,将得到的重组蛋白多克隆抗体采用间接ELISA和Western-blotting试验方法检测,ELISA测定多克隆抗体的效价为1∶8 000。Western-blotting结果表明,制备的鼠抗FcRγ-His重组蛋白多克隆抗体可以与重组γ亚单位蛋白进行特异性结合,从而证明重组蛋白具有较好的免疫原性。成功克隆出猪Fc受体γ亚单位基因并表达,为进一步研究其结构与功能奠定了基础。     

免疫复合物对猪繁殖与呼吸综合征病毒诱导的PAM细胞因子转录的影响

本试验通过研究免疫复合物影响猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在巨噬细胞内增殖的因素,来进一步探讨免疫复合物经FcγR介导的PRRSV感染机制.本研究将含200 TCID50 PRRSV病毒液与等体积的终浓度为1.30 mg· mL-1的猪IgG-兔抗猪IgG复合物分别先后和同时接种于PAM细胞,分别于12、24、36、48 h收集细胞液,同时设PRRSV感染对照组、免疫复合物对照组和健康细胞对照组,利用建立的相对荧光定量PCR和绝对荧光定量PCR方法分别检测巨噬细胞中IFN-α、IL-10和TNF-α的mRNA转录水平及PRRSV的RNA水平,并进行定量分析,同时采用ELISA方法检测健康细胞中IFN-α的蛋白水平.结果显示,在感染后12～36 h期间,免疫复合物能够抑制PRRSV诱导的IFN-α的mRNA水平,TNF-α mRNA水平在感染后12 h被促进,而在24～36 h期间被抑制.在感染后48 h,免疫复合物能促进IFN-α和TNF-α的mRNA水平,而在12～48 h期间均能抑制IL-10的mRNA水平,此外,免疫复合物在感染12、24和36 h时间段内均能明显促进病毒的增殖,但在48 h后不显著.健康细胞中IFN-α的蛋白水平在培养12～48 h之内呈“降-升-降”的趋势.结果表明,IFN-α蛋白的表达与其mRNA的转录不同步.在PRRSV感染初期,免疫复合物能抑制PRRSV诱导的抗病毒因子的mRNA水平,病毒的复制被促进,而在感染后期,抗病毒因子达到一定的浓度后发挥抗病毒作用,在一定程度上抑制病毒的复制.而TNF-α的转录规律不明显,表明免疫复合物可能同时与激活型和抑制型FcγR结合来共同调节PRRSV诱导的细胞因子的转录.     

海兰鸡IL-18全基因的克隆与序列分析

IL-18是一种能诱导产生IFN-γ的新型细胞因子,在调节Th1型细胞免疫应答中起重要作用。根据GenBank发表的鸡IL-18cDNA基因序列,自行设计一对引物,经植物血凝素(PHA)活化60日龄海兰鸡的脾淋巴细胞后,提取其总RNA,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,扩增产物进行了T-A克隆、测序,获得了中国海兰鸡IL-18基因全序列,其大小为597 bp,与GenBank中查得的鸡IL-18基因进行比较发现,中国海兰鸡IL-18基因与Schneider报道的鸡IL-18基因序列完全一致,为进一步研究鸡IL-18基因表达、生物学活性和应用奠定了基础。     

猪瘟免疫程序的研究

采用MCAT法对产前50天注射猪瘟弱毒疫苗的母猪后代进行母源抗体测定,发现仔猪21日龄时母源抗体含量已接近免疫临界线(1:17.13)。通过8组免疫程序试验证实,仔猪生后25～30天初免,60～65天再免是较为理想的免疫程序。     

鸭瘟病毒河南株gG基因的克隆、测序

鸭瘟是鸭的一种急性传染和高致死的病毒性疾病.根据GenBank收录中鸭瘟病毒gG基因序列设计并合成1对引物,以鸭瘟病毒河南分离株DNA为模板,PCR扩增出1条约1 600 bp的含gG基因特异性片段,并将其克隆至PMD19-T载体上.经酶切鉴定,得到含gG基因重组质粒,并对重组阳性质粒进行序列测定.结果表明,gG基因长...     

鸡传染性鼻炎的诊断与治疗

鸡传染性鼻炎是由鸡副嗜血杆菌引起的鸡的急性上呼吸道传染病。 1993年3月,郑州市郊某鸡场的蛋鸡群爆发了一种以流鼻涕、打喷嚏、颜面和肉髯肿胀,产蛋减少,体重减轻为特征的传染病,经流行病学调查,病原的分离与鉴定,确诊为由鸡副嗜血杆菌引起的鸡传染性鼻炎。现将诊治结果报告如下: 一、流行情况 该鸡场饲养巴布考克蛋鸡1500只,于1993年3月,110日龄时,发现个别鸡打喷嚏,没有引起重视。3天后,很多鸡表现食欲下降,连续打喷嚏,流泪,流鼻炎、颜     

两株鸡减蛋综合症病毒在鸭胚中增殖规律的观察

两株鸡减蛋综合症病毒在鸭胚中增殖规律的观察毛春生，卢中华，崔保安，李季枝，陈丽颖，王英汉（河南农业大学牧医系）减蛋综合征（ＥＤＳ）是由禽腺病毒引起的鸡的传染病，该病以病鸡产蛋减少和蛋壳形成不良为特征。目前世界上许多国家和地区都有流行［１，２］。该病已...     

金银花药理作用研究进展

金银花为常用传统中药，具有清热解毒、抗多种病原微生物、免疫增强、消除耐药质粒等多种功效。其主要有效成分为以绿原酸为主的有机酸类、以木犀草苷为主的黄酮类、三萜皂苷类和挥发油类等化合物。作者对金银花的化学成分及其各成分药理作用的研究进展进行了综述，对进一步的临床应用和药物开发具有指导意义。     

应用PCR检测鸡传染性喉气管炎病毒

根据传染性喉气管炎病毒(ILTV)TK基因序列，设计、合成1对引物，应用PCR技术对ILTV以色列疫苗株、河南分离株（ILTV-CG和ILTV-XY）进行PCR扩增，均能扩增出预期大小的目的片段，测序分析和酶切分析证实了PCR产物的特异性，而对其它禽病原体的扩增均为阴性。PCR检测ILTV DNA的最小检测量为21 pg。应用PCR检测人工接种后不同〖JP2〗天数采集的鸡的结膜拭子，接种后第2~5 d均能检测到ILTV。该方法可用于鸡传染性喉气管炎病的诊断和临诊样品检测。