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331.
应用RT-PCR技术从90日龄健康仔猪肺巨噬细胞中克隆出猪Fcγ亚单位的cDNA序列,并将其亚克隆到原核表达载体pET-32a中,构建重组表达质粒pET-FcRγ,成功表达了分子量约为29 kDa的γ亚单位重组蛋白。将重组蛋白FcRγ-His免疫小鼠,制备获得鼠抗FcRγ-His重组蛋白多克隆抗体,将得到的重组蛋白多克隆抗体采用间接ELISA和Western-blotting试验方法检测,ELISA测定多克隆抗体的效价为1∶8 000。Western-blotting结果表明,制备的鼠抗FcRγ-His重组蛋白多克隆抗体可以与重组γ亚单位蛋白进行特异性结合,从而证明重组蛋白具有较好的免疫原性。成功克隆出猪Fc受体γ亚单位基因并表达,为进一步研究其结构与功能奠定了基础。 相似文献
332.
本试验通过研究免疫复合物影响猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)在巨噬细胞内增殖的因素,来进一步探讨免疫复合物经FcγR介导的PRRSV感染机制.本研究将含200 TCID50 PRRSV病毒液与等体积的终浓度为1.30 mg· mL-1的猪IgG-兔抗猪IgG复合物分别先后和同时接种于PAM细胞,分别于12、24、36、48 h收集细胞液,同时设PRRSV感染对照组、免疫复合物对照组和健康细胞对照组,利用建立的相对荧光定量PCR和绝对荧光定量PCR方法分别检测巨噬细胞中IFN-α、IL-10和TNF-α的mRNA转录水平及PRRSV的RNA水平,并进行定量分析,同时采用ELISA方法检测健康细胞中IFN-α的蛋白水平.结果显示,在感染后12~36 h期间,免疫复合物能够抑制PRRSV诱导的IFN-α的mRNA水平,TNF-α mRNA水平在感染后12 h被促进,而在24~36 h期间被抑制.在感染后48 h,免疫复合物能促进IFN-α和TNF-α的mRNA水平,而在12~48 h期间均能抑制IL-10的mRNA水平,此外,免疫复合物在感染12、24和36 h时间段内均能明显促进病毒的增殖,但在48 h后不显著.健康细胞中IFN-α的蛋白水平在培养12~48 h之内呈“降-升-降”的趋势.结果表明,IFN-α蛋白的表达与其mRNA的转录不同步.在PRRSV感染初期,免疫复合物能抑制PRRSV诱导的抗病毒因子的mRNA水平,病毒的复制被促进,而在感染后期,抗病毒因子达到一定的浓度后发挥抗病毒作用,在一定程度上抑制病毒的复制.而TNF-α的转录规律不明显,表明免疫复合物可能同时与激活型和抑制型FcγR结合来共同调节PRRSV诱导的细胞因子的转录. 相似文献
333.
海兰鸡IL-18全基因的克隆与序列分析 总被引:1,自引:0,他引:1
IL-18是一种能诱导产生IFN-γ的新型细胞因子,在调节Th1型细胞免疫应答中起重要作用。根据GenBank发表的鸡IL-18cDNA基因序列,自行设计一对引物,经植物血凝素(PHA)活化60日龄海兰鸡的脾淋巴细胞后,提取其总RNA,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,扩增产物进行了T-A克隆、测序,获得了中国海兰鸡IL-18基因全序列,其大小为597 bp,与GenBank中查得的鸡IL-18基因进行比较发现,中国海兰鸡IL-18基因与Schneider报道的鸡IL-18基因序列完全一致,为进一步研究鸡IL-18基因表达、生物学活性和应用奠定了基础。 相似文献
334.
335.
336.
337.
鸡传染性鼻炎是由鸡副嗜血杆菌引起的鸡的急性上呼吸道传染病。 1993年3月,郑州市郊某鸡场的蛋鸡群爆发了一种以流鼻涕、打喷嚏、颜面和肉髯肿胀,产蛋减少,体重减轻为特征的传染病,经流行病学调查,病原的分离与鉴定,确诊为由鸡副嗜血杆菌引起的鸡传染性鼻炎。现将诊治结果报告如下: 一、流行情况 该鸡场饲养巴布考克蛋鸡1500只,于1993年3月,110日龄时,发现个别鸡打喷嚏,没有引起重视。3天后,很多鸡表现食欲下降,连续打喷嚏,流泪,流鼻炎、颜 相似文献
338.
两株鸡减蛋综合症病毒在鸭胚中增殖规律的观察毛春生,卢中华,崔保安,李季枝,陈丽颖,王英汉(河南农业大学牧医系)减蛋综合征(EDS)是由禽腺病毒引起的鸡的传染病,该病以病鸡产蛋减少和蛋壳形成不良为特征。目前世界上许多国家和地区都有流行[1,2]。该病已... 相似文献
339.
340.
根据传染性喉气管炎病毒(ILTV)TK基因序列,设计、合成1对引物,应用PCR技术对ILTV以色列疫苗株、河南分离株(ILTV-CG和ILTV-XY)进行PCR扩增,均能扩增出预期大小的目的片段,测序分析和酶切分析证实了PCR产物的特异性,而对其它禽病原体的扩增均为阴性。PCR检测ILTV DNA的最小检测量为21 pg。应用PCR检测人工接种后不同〖JP2〗天数采集的鸡的结膜拭子,接种后第2~5 d均能检测到ILTV。该方法可用于鸡传染性喉气管炎病的诊断和临诊样品检测。 相似文献