海兰鸡IL-18全基因的克隆与序列分析

IL-18是一种能诱导产生IFN-γ的新型细胞因子,在调节Th1型细胞免疫应答中起重要作用。根据GenBank发表的鸡IL-18cDNA基因序列,自行设计一对引物,经植物血凝素(PHA)活化60日龄海兰鸡的脾淋巴细胞后,提取其总RNA,经反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)扩增,扩增产物进行了T-A克隆、测序,获得了中国海兰鸡IL-18基因全序列,其大小为597 bp,与GenBank中查得的鸡IL-18基因进行比较发现,中国海兰鸡IL-18基因与Schneider报道的鸡IL-18基因序列完全一致,为进一步研究鸡IL-18基因表达、生物学活性和应用奠定了基础。     

一例鸡鼻气管炎的诊断与治疗

鸡鼻气管炎是由鼻气管鸟杆菌(ornithobacteri-um rhinotracheale,ORT)引起的呼吸道疾病,也是近年来新发现的一种感染家禽和野鸟的呼吸道疾病,主要表现为鸡采食量减少,生长缓慢,单侧或双侧纤维素性化脓性肺炎、胸膜炎、气囊炎,鸡群死亡率升高,孵化率下降,肉禽增重减少。有些病例     

一例鸡传染性喉气管炎的诊治

2006年9月,登封市某鸡场发生了一种以呼吸困难、咳出血性渗出物为特征的疾病,用针对鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)gX基因的特异引物,经PCR检测鸡传染性喉气管炎病毒阳性,结合病史和临床症状及病毒分离,诊断为鸡传染性喉气管炎。对该鸡场采取了综合防制措施,取得了较好的效果。     

如何搞好新形势下的肉牛疾病防制

近年来，随着我国农业经济结构的重大调整，我国的肉牛养殖业异军突起，发展迅速，牛群结构、饲养模式发生了根本性的变化。养牛业已经拓展到供种、养殖、加工、服务等多个生产环节，成为一个独立的产业，在农村经济中占有举足轻重的地位。　　与飞速发展的养牛业相比，作为重要保障体系的疾病防制工作却由于技术陈旧、手段落后，在生产中一直处于较为被动的局面。特别是近年来随着规模的扩大，肉牛发病率和死亡率一度呈上升趋势。据统计，我国每年因各种疾病死亡肉牛不低于100万头，发病不低于500万头，直接经济损失超过25亿元。因此，如何…     

鸽Ⅰ型副粘病毒病的诊断与防治

2005年10月份，郑州市某肉鸽场发生以肠炎、严重腹泻和神经症状为特征的传染病，经流行病学调查、病理剖检和实验室诊断，确诊为鸽Ⅰ型副粘病毒感染，报告如下。     

麻鸭IL-18成熟蛋白基因的克隆、表达及其表达产物的生物学活性检测

应用RT-PCR技术,直接从麻鸭(Tadorna ferruginea)脾淋巴细胞总RNA中扩增出麻鸭IL-18成熟蛋白(mDuIL-18)基因,克隆到pGEM-T Easy载体。测序结果表明获得了mDuIL-18基因,其大小为513bp,并将该基因亚克隆到原核表达载体pQE30。SDS-PAGE可检测到分子质量为19.76kD的重组蛋白,Western blot证实该重组蛋白可与兔抗鸡IL-18血清发生特异性反应。表达产物以包涵体形式存在,经变性和复性处理后明显促进鸭T细胞转化。用mDuIL-18(150或200ng/鸭)和禽流感病毒(AIV)疫苗免疫鸭2周后,血凝抑制(HI)抗体平均滴度达到7.5～7.7log2,而只用AIV疫苗免疫和用mDuIL-18(100ng/鸭)和AIV疫苗免疫的HI抗体平均滴度仅达到6.3～6.6log2,表明mDuIL-18提高AIV灭活油乳苗诱导的免疫应答。     

利用荧光定量PCR方法研究猪繁殖与呼吸综合征病毒在Marc-145细胞的增殖规律

摘要:猪繁殖与呼吸综合征病毒可以在原代猪肺泡巨噬细胞(PAM)、CL2621细胞系及Marc-145细胞系上生长繁殖，但对于其增殖规律不甚了解。试验利用实时荧光定量PCR技术，研究猪繁殖与呼吸综合征病毒在Marc-145细胞中的增殖规律；结果发现:病毒在接种后12 h开始大量增殖，在18-36 h增殖最为迅速，在36-48 h病毒增殖达到最高峰；研究还发现在18 h 时Marc-145细胞开始释放病毒，48 h达最高峰。该结果为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒的致病机理及利用细胞毒生产疫苗提供试验基础。     

鸡传染性喉气管炎病毒gD基因的表达及间接ELISA检测方法的初步建立

将含有ILTV gD糖蛋白基因的重组质粒pMD-T-gD用EcoR Ⅰ和Hind Ⅲ双酶切后,回收目的片段,将其连接到原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-gD.将pET-gD转化到宿主表达菌BL21中,用IPTG诱导表达,SDS-PAGE结果显示表达目的蛋白大小为55 000,Western blotting表明表达产物具有良好的免疫原性.表达的蛋白产物经纯化后作为ELISA包被抗原,以辣根过氧化物酶标记的羊抗鸡IgG作为二抗,初步建立了间接ELISA诊断方法,并确定了抗原最佳包被浓度为24.5 mg/L;最佳血清稀释度为1:80,初步确定ELISA判定标准为D450≥0.25判为阳性,小于0.25为阴性.     

硫酸新霉素注射对雏鸡大肠杆菌病的疗效研究

以试管两倍稀释法测定硫酸新霉素对鸡大肠杆菌的最小抑菌浓度,然后对人工诱发大肠杆菌病雏鸡进行肌肉注射给药3天的治疗试验。结果表明,硫酸新霉素对鸡大肠杆菌的最小抑菌浓度为1．75mg／L;硫酸新霉素高剂量组、中剂量组、低剂量组对鸡大肠杆菌病的治愈率分别是13．3％、50％、86．7％,而感染对照组的死亡率为83．3％。硫酸新霉素低剂量肌肉注射对鸡大肠杆菌病有较好的治疗作用。     

不同毒株鸡传染性支气管炎病毒与鸡新城疫病毒接种鸡胚联合培养相互作用研究

本实验目的在于探讨不同毒株鸡传染性支气管炎病毒和鸡新城疫病毒混合接种同一鸡胚尿囊腔培养时二者之间的相互作用。分别将按２００倍、５００倍、１０００倍不同浓度稀释的鸡传染性支气管炎病毒Ｆ３株、肾型Ｊ株、Ｈ１２０２８／８６株,Ｈ５２和Ｈ１２０株和１００倍稀释的Ｌａｓｏｔａ鸡新城疫病毒联合接种到１０日龄鸡胚尿囊腔,同时设单独培养作对照,９６小时后收取尿囊液,用对流免疫电泳法检测鸡传染性支气管炎病毒效价,用血球凝集试验检测尿囊液鸡新城疫病毒效价。结果表明,鸡新城疫病毒对鸡传染性支气管炎病毒增殖无明显促进作用,但无抑制现象;鸡传染性支气管炎病毒浓度过大时,对鸡新城疫病毒有一定抑制作用,在适当浓度时二者之间无干扰作用。以ＮＤＶ１００倍ＩＢＶ１０００倍稀释混合作用后联合接种培养对二者效价均无明显干扰,ＮＤＶ血凝效价可达１１ｌｏｇ２,ＩＢＶ对流免疫电泳沉淀效价可达９ｌｏｇ２,效果最佳。联合培养省时、省力、节约鸡胚损耗。