几种中药在鸡胚上对鸡常见病毒的作用效果试验

为筛选抗病毒中药,提取桑叶、菌陈蒿、马齿苋、野菊花等4种中药的有效成分,并以其为实验药物,观察在10～12日龄鸡胚上对禽流感病毒(AIV)、新城疫病毒(NDV)和鸡传染性支气管炎病毒(IBV)的作用效果.结果表明,在安全浓度范围内,几种中药对以上病毒均具有一定的阻断和抑制作用.其中,菌陈蒿全成分提取液对AIV和NDV的阻断和抑制作用较为突出.     

一例猪繁殖与呼吸综合征的RT-PCR诊断与防制

2008年3月,新乡市某猪场发生了以一种经产母猪和初产母猪流产、死产、产木乃伊胎、死胎及弱仔为特征的疾病。采集流产胎儿和死胎的肺、肝、脾脏等病料,制悬液,取上清,进行细胞培养,观察细胞病变。另根据猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲株VR-2332 ORF7基因序列设计一对特异引物,提取流产胎儿的肺、肝等组织中PRRSV的RNA,经RT-PCR扩增,检测猪繁殖与呼吸综合征病毒为阳性,结合病史和临床症状,诊断为猪繁殖与呼吸综合征。通过对该猪场采取紧急接种疫苗、彻底消毒等综合防制措施,控制了该病的流行与蔓延。     

一例猪繁殖与呼吸综合征的RT-PCR诊断与防治

2008年3月,新乡市某猪场发生了以一种经产母猪和初产母猪流产、死产、产木乃伊胎、死胎及弱仔为特征的疾病.为确定病原,采集流产胎儿和死胎的肺、肝、脾脏等病料,制悬液,取上清,进行细胞培养,观察细胞病变,另根据猪繁殖与呼吸综合征病毒美洲株VR-2332 ORF7基因序列设计一对特异引物,提取流产胎儿的肺、肝等组织中PRRSV的RNA,经RT-PCR扩增,检测猪繁殖与呼吸综合征病毒为阳性,结合病史和临床症状,诊断为猪繁殖与呼吸综合征.通过对该猪场采取紧急接种疫苗、彻底消毒等综合防治措施,控制了该病的流行与蔓延.     

生产性能的影响

 试验将60头28日龄断奶的健康、体重相近（7.63μ0.52kg）的长大二元杂交商品仔猪按体重、性别,随机分为5组,即对照组和4个试验组,对照组即原用进口鱼粉配方组,第1、2、3、4试验组为分别用山东济宁圣齐生物生物工程生产的活性酵母蛋白粉替代25%、50%、75%和100%的进口鱼粉组,共试验4w。研究添加不同水平酵母蛋白粉对断奶仔猪生产性能的影响。结果表明：断奶仔猪日粮中添加酵母蛋白替代进口鱼粉后均没有显著改变原添加进口鱼粉仔猪断奶后0~4w的平均日采食量和平均日增重,饲喂效果较好。综合各项试验指标,酵母蛋白粉以50%~75%的比例替代进口鱼粉,添加到断奶仔猪日粮中对仔猪生产性能有明显的促进作用,且饲料成本下降。     

白细胞介素18研究概况

IL-18是一种重要的免疫调节因子,主要由单核巨噬细胞系统的细胞分泌,在结构上属于IL-1家族,在功能上与IL-12相似,且二者有协同效应。IL-18具有多种生物学功能,它不仅可以增强Th1型免疫反应,而且在Th2型免疫反应中也发挥一定的作用,在抗病原微生物感染,抗肿瘤等方面有着潜在的应用前景。在集约化畜禽养殖业中,包括IL-18在内的细胞因子作为天然的免疫调节剂和疫苗佐剂,目前已被公认为是一种可以替代传统疗法的新型免疫调节剂。     

16S rRNA与Vitek-32对临床感染猪肠球菌鉴定结果比较

【研究目的】旨在研究两种常用的细菌分型方法对感染猪的肠球菌鉴定结果进行比较。【方法】对从河南洛阳、济源、许昌、南阳等地送检病猪体内分离到42株革兰阳性球菌分离纯化后,分别用16S rRNA基因序列和Vitek-32全自动细菌鉴定系统对其进行鉴定。【结果】Vitek-32对42株分离菌中的34株鉴定到种的水平,分别是粪肠球菌(E. faecalis) 10株、屎肠球菌(E. faecium) 2株、铅黄肠球菌(E. casseliflavus) 22株;另有8株未成功鉴定。16S rRNA基因序列分析对42株分离菌成功进行了鉴定,分别为粪肠球菌12株,屎肠球菌30株。通过对两种方法鉴定结果比较发现,Vitek-32鉴定的10株粪肠球菌中除1株被16S rRNA鉴定为屎肠球菌外,其余9株均相同;Vitek-32鉴定的2株屎肠球菌与16S rRNA鉴定结果相同;Vitek-32鉴定的22株铅黄肠球菌除了1株被16S rRNA鉴定为粪肠球菌外,其余全部被鉴定为屎肠球菌;8株未被Vitek-32鉴定的肠球菌中,16S rRNA将其鉴定为2株粪肠球菌和6株屎肠球菌。【结论】在感染猪的肠球菌分型鉴定中,Vitek-32对粪肠球菌鉴定结果与16S rRNA比较具有较高的一致性（75％）;而对于屎肠球菌的鉴定结果与16S rRNA比较出现了较大的差异（93.3％）。     

猪肠球菌溶血素cylA基因原核表达载体的构建

以猪致病性粪肠球菌染色体DNA为模板,PCR扩增溶血素cylA基因,相应酶切后,克隆到原核表达载体pET32a中,构建pET32a-cylA重组质粒,并将pET32a-cylA质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)。经HindⅢ、XhoI双酶切及测序鉴定,并与已发表的肠球菌溶血素cylA基因序列比较,同源性达99.8%。表明成功构建猪肠球菌溶血素cylA基因的重组表达质粒,为制备单抗、开发疫苗及其致病机制研究奠定了基础。     

鸡传染性喉气管炎病毒gD基因在重组痘病毒中表达及其免疫效力

将鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV) 河南长葛株gD基因重组到鸡痘病毒基因组中,获得了能高效表达糖蛋白D的重组鸡痘病毒(rFPV-gD) .将rFPV-gD经皮下刺种途径接种30日龄的固始鸡,用ILTV商品弱毒疫苗经滴鼻、点眼途径免疫试验鸡,同时设非免疫对照鸡群.分别于免疫后7、14、21、28、35和42 d采血分离血清,用微量血清中和试验测定ILTV抗体效价,并于免疫后42 d用ILTV强毒攻击所有试验鸡只.血清中和抗体检测结果表明:疫苗对照组与重组病毒组差异不显著(P>0.05) ,而重绀病毒组和疫苗对照组与空白对照组相比筹异均显著(P<0.05) .免疫42 d攻毒后鸡的发病情况表明,重组病毒组和疫苗对照组对ILTV强毒攻击的保护率均为96.67%,而空白对照组为6.67%,说明该重组病毒作为弱毒疫苗能够抵抗ILTV强毒的攻击,对免疫鸡群有较好的保护作用.     

藏獒犬α-干扰素全基因的克隆与序列分析

根据GenBank发表的犬α-干扰素(IFN-α)基因核酸序列(AB102731),设计并合成1对引物,利用PCR技术从藏獒犬肝脏基因组DNA中扩增犬α-干扰素全基因,并进行克隆和测序.结果表明,获得了犬IFN-α全基因序列,其大小为564 bp,包含1个完整阅读框,编码187个氨基酸残基.序列比较分析发现,克隆的藏獒犬IFN-α基因序列与GenBank中5条犬IFN-α基因序列核苷酸同源性在96.8%～99.3%之间,氨基酸同源性在94.7%～98.9%之间,并无插入和缺失变异,但是存在氨基酸点变异.藏獒犬与人和其他8种动物的IFN-α基因序列分析和系统进化分析表明,IFN-α基因存在种属的差异性,亲缘关系越近,同源性越高.犬IFN-α基因的成功克隆为进一步研究藏獒犬IFN-α基因表达、生物学活性和应用奠定基础.     

鸡α干扰素基因的克隆、原核表达及抗病毒活性测定

通过PCR技术从罗曼鸡肝脏基因组中扩增鸡α干扰素(ChIFN-α)全基因,并克隆和测序.序列分析表明,ChIFN-α基因全长为582 bp,亚克隆其成熟蛋白编码基因489 bp,利用基因重组技术构建了重组质粒,使ChIFN-α置于原核表达载体pQE30的T5启动子下并同6×His(多聚组氨酸标签)-Tag 融合.经酶切和PCR鉴定,DNA测序证实重组质粒pQEChIFN-α构建正确;将pQEChIFN-α转化大肠杆菌M15感受态细胞,用IPTG诱导表达.SDS-PAGE和Western blot证实表达出分子质量为19.80 kDa的融合蛋白.表达的蛋白以包涵体形式存在,经变性、复性处理后,在Vero细胞上抗水泡性口炎病毒的活性为1.16×103 U/mg.本研究成功表达了ChIFN-α,表达的重组蛋白具有一定的生物活性.