农村环境质量监测与综合评价方法研究

对我国农村环境监测、环境质量评价现状作了简要的分析,探讨了农村环境质量指数的计算及综合评价方法,提出了农村环境质量监测布点及监测指标选择的优化原则。同时,选择生态型农村——湖南省郴州市宜章县上寮村作为典型案例进行研究,对其进行环境质量基础调查与监测,根据对上寮村的环境质量监测结果、指数的计算、综合评价方法及目前农村村庄分类情况,得出上寮村环境质量好、适合居住,与将其划为生态型农村相符。农村环境质量监测布点及监测指标选择的优化原则与指数的计算及综合评价方法的提出,对加强农村环境管理、保护和改善农村环境质量具有十分重要的意义。     

IGF-I对体外培养山羊卵泡颗粒细胞增殖与分化的影响

为弄清ＩＧＦ－Ｉ在山羊卵泡不同发育阶段对颗粒细胞增殖与分化的影响,分类采集山羊小腔和大腔卵泡颗粒细胞进行体培养,对培养后颗粒细胞的ＤＮＡ含量和孕酮分泌量进行测定。结果表明,ＩＧＦ－Ｉ对来源于大,小卵颗粒细胞的增殖与分化都有促进作用。     

群体调控对济南17号小麦品质的影响

以面包强筋小麦济南 1 7号为试验材料 ,选择我省不同气候、生态、地力水平都有较大差异的陵县和菏泽市牡丹区研究播种期和基本苗对济南 1 7号小麦品质性状的影响。结果表明 :通过不同的播种期和基本苗调控群体 ,对籽粒容重和蛋白质质量参数 (面团稳定时间和沉降值等 )的影响较大 ,而对蛋白质的数量参数 (蛋白质含量、湿面筋含量等 )作用较小。济南 1 7号小麦优质栽培的适宜播种期为 9月 2 8日～ 1 0月 1 4日 ,最佳基本苗为每公顷 1 50×1 0 4 ～ 2 2 5× 1 0 4 。     

检测纽布病毒的Real-time RT-PCR方法的建立与应用

纽布病毒(nebovirus, NeV)是国内新发的犊牛腹泻病原,本试验目的是建立检测NeV的real-time RT-PCR方法。根据国内NeV流行株的聚合酶基因(RdRp)序列设计引物,通过反应条件和体系优化,成功建立基于TB Green检测NeV的real-time RT-PCR方法。结果显示:该方法在2.9×10~1～2.9×10~9copies·μL^-1之间呈现良好的线性关系,线性相关系数R^2=0.999 4,扩增效率为98%;该方法只特异性检出NeV,不检出常见无关病原;最低检测下限为29 copies·μL^-1;批内和批间的变异系数分别为0.89%～1.89%和0.83%～1.15%;该方法对临床样本的检出率高于文献报道的三种检测方法(P<0.05)。对2018年8—11月采自新疆和辽宁的135份奶犊牛腹泻样本中NeV的检出率为67.41%,场阳性率为100%(15/15)。所建方法的特异性和稳定性好、灵敏度高,为NeV的检测和流行病学调查提供了有力的手段。     

安宁河流域鸭瘟鸭霍乱的混合暴发感染

地处安宁河中游的西昌市某种鸭场因混合暴发感染鸭瘟、鸭霍乱，于１８天内该场发病死亡建昌种鸭１４１９只，病死率达８７．６％。对分离的１５株多杀性巴氏菌经血清学鉴定均属ＣａｒｔｅｒＡ群，其中１３／１５株为Ａ：５型，占８６．７％，２／１５株为Ａ：２型占１３．３％；用抗鸭瘟血清与双抗处理过的病料进行中和后接种试验鸭，结果６／６只保护。     

鸭致病性大肠杆菌外膜蛋白型研究

测定了从我国分离到的130株鸭病原性大肠杆菌外膜蛋白型（Outer membrane protein patterns,OMP型）,其中O93、O92、O78和O76优势血清型53株,O46等30个其他血清型分离株77株,这些分离株共产生了4个OMP型,其中OMP-1型81株,占62.3%（81/130）,覆盖O93、O92、O78和O76等29个血清型,占85.3%（29/34）,为主要的OMP型;根据GenBank中大肠杆菌K-12外膜蛋白A基因（ompA）的核苷酸序列设计引物,从9株优势血清型和1株O46血清型的鸭大肠杆菌中分别扩增得到ompA基因,进行序列测定及分析,发现优势血清型9个菌株的ompA均由1 171个碱基组成,均只有1个大的开放阅读框（ORF）,长1 053 bp,编码由350个氨基酸组成的前外膜蛋白A（pro-OmpA）,前21个氨基酸残基组成信号肽,成熟的OmpA由329个氨基酸残基组成;O46菌株的ORF全长1 041 bp,在400-411 bp位缺失了12个碱基,成熟的OmpA由325个氨基酸残基组成;10个鸭致病性E.coli的ompA基因核苷酸序列高度同源,相似性达95.8%~100%。     

鸭甲肝病毒基因A型和C型双重RT-PCR检测法的建立

为建立同时检测基因A型和C型鸭甲肝病毒(DHAV-A,DHAV-C)的双重RT-PCR方法,本实验根据GenBank中DHAV-A和DHAV-C全基因组序列,针对DHAV-A的3C、3D和DHAV-C的2C区域分别设计了2对引物,通过对反应体系和反应条件的优化及特异性、灵敏度评价,建立了检测DHAV-A和DHAV-C的双重RT-PCR方法.该方法能够分别从DHAV-A、DHAV-C阳性样本中扩增出DHAV-A (259 bp)和DHAV-C (194 bp)的特异片段,而不与其它被检的无关病原发生非特异反应;对DHAV-A和DHAV-C的最低检出限分别为4.98×104拷贝/μL、1.68×104拷贝/μL;对2009年8月至2011年7月送检病料检出DHAV-A和DHAV-C的阳性率分别为20％(14/70)、70％(49/70);随机抽取的DHAV-CPCR阳性样本的病毒分离结果与双重RT-PCR检测结果的符合率为100％(16/16).本研究结果显示,建立的双重RT-PCR方法具有良好的特异性和敏感性,可用于临床DHAV的快速鉴别诊断.     

禽流感病毒(H5N1)NA基因的克隆及其真核表达载体的构建

本研究克隆了一株鸡源AIVH5N1亚型PQ分离株的NA基因,并对其进行了序列分析。结果表明NA基因开放阅读框架内含有1350个核苷酸,编码449个氨基酸。NA基因与发表的H5N1亚型毒株HKYU的核苷酸和氨基酸同源性分别为89%~98.4%和91.5%~98.7%。PQ分离株的NA茎部有20个氨基酸的缺失,从而使50、58、63、68位糖基化位点丢失。NA基因定向亚克隆入杆状病毒Bac-to-Bac系统的转移载体pFast BacDual中,经酶切和PCR鉴定为阳性的重组转移载体再转化入含有杆粒和辅助质粒的DH10BacTM菌中,与杆粒DNA在细菌内进行同源重组。以M13为引物,用PCR方法鉴定重组杆粒DNA,结果证明成功构建了表达NA基因的重组杆状病毒表达载体。     

基因C型鸭甲肝病毒VP1基因的克隆及原核表达

为原核表达基因C型鸭甲肝病毒(DHAV-C)VP1重组蛋白,本研究通过设计套式PCR引物,RT-PCR扩增DHAV-C VP1全基因,约为720 bp,将其亚克隆至pET-32a(+)载体中构建重组表达质粒pET-VP1。将其转化E.coli Rosetta(DE3)中,经IPTG诱导表达了约47 ku的重组蛋白。Western blot分析表明,该重组蛋白可以与兔抗DHAV-C阳性血清发生特异性反应,具有良好的反应原性。