犬型钩端螺旋体外膜蛋白OmpL1基因的克隆与序列分析

作者以犬型钩端螺旋体菌株的DNA为模板,采用PCR方法扩增目的基因OmpL1,克隆到pVAX1载体上,并对OmpL1基因测序后进行序列分析。结果获得960 bp片段,DNA序列分析结果表明,该菌株的OmpL1基因与报道的七日热型、秋季型、波摩那型、澳洲型钩体的OmpL1基因核苷酸序列相似性分别为99.38%、93.77%、99.58%、99.38%,氨基酸序列相似性分别为100%、95%、100%、100%。证明OmpL1为致病性钩体所具有的保守性抗原成分,可在钩体病的预防和诊断中发挥重要作用。     

抗原浓缩纯化工艺对口蹄疫灭活疫苗免疫效果评价

为增强牛口蹄疫O型、Asia-Ⅰ型二价灭活疫苗免疫效果,本试验应用超滤技术浓缩口蹄疫(FMD)抗原来制备浓缩疫苗,通过免疫血清学检测及本动物攻毒保护试验来评价所制疫苗效果.结果显示,浓缩抗原疫苗安全检验合格,全剂量(2 mL)、1/3剂量(0.67 mL)、1/9剂量(0.22 mL)组牛血清抗体水平均较常规疫苗有显著提升(P＜0.05),阳转率高于常规灭活疫苗;本动物攻毒保护试验效果明显,Asia-Ⅰ型、O型抗原PD50值分别达到了每剂12.51和10.32.结果表明,应用超滤技术浓缩FMD抗原可提高FMDV二价灭活疫苗的免疫效果.     

O型口蹄疫病毒不同基因型联合RT-PCR检测方法的建立

在比较国内外口蹄疫病毒(FMDV)流行毒株序列的基础上，设计了检测FMDV的PCR引物及O型FMDV不同基因型即中国型(Cathay)与乏亚株(PanAsia)的二联PCR引物。在确定单项RT-PCR反应条件的基础上，建立、优化了二联RT-PCR反应体系和条件，并进行了相关病毒检测试验。结果表明，建立的检测O型FMDV不同基因型中国型与泛亚株的二联RT-PCR，有效、特异且敏感，为FMD的诊断、流行病学调查及疫苗应用奠定了基础。     

O型口蹄疫病毒VP1基因的克隆及其在重组杆状病毒中的表达

利用杆状病毒表达系统进行了口蹄疫病毒VP1基因在Sf9细胞中的表达研究。首先克隆了VP1基因片段．将pMD18-VP1质粒及杆状病毒转座载体质粒pFastBacⅠ分别用BamHⅠ及Hind Ⅲ酶切后，用T4 DNA连接酶连接。构建了重组质粒pFastBac-VP1；再将该重组质粒转化DH10Bac感受态细菌。在菌体内进行重组，并经三重抗性与蓝白斑筛选。得到杆状病毒重组质粒Bacmid-VP1；将Bacmid-VP1转染Sf9细胞．获得重组杆状病毒．并进行表达水平的检测。经SDS-PAGE和Western-blotting检测。结果表明，VP1蛋白在重组杆状病毒中获得表达。     

云南省规模化猪场秋冬季猪繁殖与呼吸综合征病毒感染状况调查

为了解年龄、季节对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染的影响,以及PRRS在云南省不同区域的分布情况,用RT-PCR方法对秋冬季云南省不同地区32个规模猪场552份抗凝全血样品进行PRRSV检测。结果表明,不同年龄阶段的猪只,以仔猪带毒的阳性率最高,为78.5%(113/144);秋季比冬季的感染率相对偏低,秋冬季的平均阳性率分别为64.86%和75.36%;从区域看,滇东最高(73%),其次为滇南(72.7%),滇中(72.2%),滇西(67.2%),滇北(65.6%)。     

耐甲氧西林金黄色葡萄球菌分离鉴定及耐药基因检测

为了解动物源性金黄色葡萄球菌对市售常见的各种兽用抗生素药物的耐药情况,掌握并分析其耐药性,指导临床合理使用抗菌药物。本研究通过常规细菌分离鉴定患病动物炎性分泌物,对分离菌株进行生化试验、耐药性试验、耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistant S.aureus,MRSA)鉴定和耐药基因鉴定,获得4株耐药金黄色葡萄球菌,2株为MRSA,2株为甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌(Methicillinsusceptible S.aureus,MSSA);4株金黄色葡萄球菌均检测出tetA、aac(6')/aph(2')、sul1耐药基因,其中2株MRSA检测出mecA。MRSA与MSSA均表现出了多重耐药现象,其中MRSA比MSSA的耐药现象更为广泛。因此,要更加关注MRSA的流行情况,制定规范的用药行为,严控抗生素药物的滥用。     

攀枝花地区山羊传染性胸膜肺炎病原学检测

为了解攀枝花地区山羊传染性胸膜肺炎的流行情况,采用PCR检测方法,对随机抽样的50份山羊肺脏样品进行了山羊传染性胸膜肺炎病原学检测。结果检出5份阳性,阳性率为10%。本次病原学检测结果为攀枝花地区山羊传染性胸膜肺炎的防控提供了有力的参考。     

云南省猪圆环病毒2型感染状况调查

为了解云南省猪圆环病毒2型(PCV-2)的感染状况,试验采用间接ELISA方法对从云南省部分规模化猪场采集的未经PCV-2疫苗免疫的猪只血样进行抗体阳性率检测.结果表明:所有被检猪场均存在PCV-2感染,PCV-2抗体总阳性率为41.5%.哺乳仔猪PCV-2抗体阳性率最高,为45.8%;后备母猪最低,为35.7%.表明...     

云南地区2008~2011年部分猪场CSF、PCV-2、PRRS、PR流行情况调查与分析

为了解云南地区部分猪场CSF、PCV-2、PRRS和PR发病情况,设计引物对291个猪场2008~2011年送检的979份组织病料进行PCR检测.结果显示,这4种病在猪场都有发生, PRRS检出率最高为55.88%,CSF、PCV-2、PR 分别为30.02%、36.57%、44.91%,混合感染检出率为64.45%,单独感染占35.24%;二重感染占64.76%;三重感染占21.55%;四重感染占2.66%,二重感染以CSF+PRRS最多,占15.24%,三重感染以CSF+PR+PRRS为主,占8.08%.说明在云南地区部分猪群中的这4种疫病感染比较严重,以混合感染为主,PRRS是主要的致死疫病,年度发生和流行规律变化大,应加强监督和防控工作,减少猪群呼吸道和繁殖障碍疫病的发生.