猪巨细胞病毒gB基因的克隆与序列分析

应用PCR方法,从郑州、福建、浙江金华和宁波猪肺脏中分别扩增出4段PCMV gB基因,并将其分别克隆入pMD18-T载体,经蓝白斑筛选和PCR鉴定,将阳性克隆进行序列分析并构建系统进化树。序列分析表明,其gB基因全长为2 580bp,编码860个氨基酸,与PCMV其他序列相比,其同源性在96.1%～99.7%,与β疱疹病毒亚科中其他常见毒株同源性在25.9%～38.1%;推导的氨基酸序列,有11个半胱氨酸,17个潜在N-糖基化位点,其裂解位点是RYKR;系统进化树分析发现,推导的氨基酸序列出现两个分支,而且来自上述4个地区PCMV gB糖蛋白氨基酸序列处在不同的分支中。     

一例比格犬肺炎克雷伯氏菌病的诊断及防控

为了诊断青岛博隆实验动物养殖基地比格犬病死原因并制定有效防控措施,试验通过临床观察和病理解剖对病犬进行初步诊断;无菌采集病死幼犬肺组织,采用特异性聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)诊断三种常见犬呼吸道病毒,通过细菌形态学观察、生化试验、基因测序鉴定分离病原菌,并通过小鼠致病性试验和药敏试验分析其致病性和优化用药方案。结果表明：犬发病时主要表现为咳嗽、流鼻涕、食欲不振和轻度腹泻等症状。剖检可见胸腔积液,肺叶淤血和坏死。PCR鉴定犬腺病毒2型(canineadenovirus type 2, CAV 2)、H3N2亚型犬流感病毒(H3N2 subtype canine influenza virus, CIV)和犬副流感病毒(canine parainfluenza virus, CPIV)均为阴性。细菌分离培养显示为该菌革兰氏阴性的粗短杆菌;生化试验和16S rDNA测序鉴定该菌为肺炎克雷伯菌。回归试验结果表明该菌可引起小鼠肺炎症状,具有较强致病力。药敏试验结果显示分离菌株对阿奇霉素、环丙沙星、恩诺沙星敏感,对氨苄西林、头孢他啶、庆大霉素、头孢...     

H9亚型禽流感病毒感染鸡生理指标的分析

通过测定H9亚型禽流感发病鸡群及健康鸡群的某些生化指标,发现H9亚型禽流感疾病状态下皮质醇激素、甲状腺激素和血清钙的水平均与健康鸡群差异显著,而生长激素和血清磷无明显差异.这些变化是由于机体对疾病的抵抗或代谢紊乱产生的,可以作为疾病诊断的依据.     

百病清防止肉仔鸡大肠杆菌病效果观察

百病清防止肉仔鸡大肠杆菌病效果观察尹燕博，郭福生康顺文，冯韬（农业部动物检疫所青岛２６６０３２）（诸城市外贸集团公司山东诸城２６２２０赵亚荣，孟怀旺（德国拜耳公司北京联络处北京１０００２０）在新城疫、肾型传染性支气管炎等病毒病的基础上继发感染大肠杆菌...     

鸡14种病毒病基因芯片的研究

应用PCR或RT—PCR方法分别获得鸡新城疫(ND)、禽流感(AI)、鸡传染性支气管炎(IB)、鸡传染性法氏囊病(IBD)、鸡传染性喉气管炎(ILT)、鸡马立克氏病(MD)、减蛋综合征(EDS-76)、禽网状内皮组织增生症(RE)、鸡脑脊髓炎(AE)、鸡传染性贫血症(CIA)、鸡病毒性关节炎(AVA)、包涵体肝炎(IBH)、禽白血病(AL)、鸡痘(FP)各一特异性片断，以这些片断为探针，采用接触式点样技术，制成低密度的DNA阵列芯片。自病料中提取核酸，通过生物标记技术，使样品核酸标记上生物素。当样品和预点在硝酸纤维素膜上的探针杂交后．通过显色技术，即可得出诊断结果。     

鸡新城疫病毒荧光双链引物实时荧光PCR检测方法的研究

根据鸡新城疫F糖蛋白的保守基因序列,设计一对正引物。根据正引物设计一对与之相互补的负引物。正引物的5’端标记FAM,负引物的3’标记淬灭剂DABCYL。反应体系中进行引物杂交后,由于正、负引物完全互补,FAM产生的荧光被标记在负引物上的DAB—CYL淬灭掉。然后利用杂交后生成的荧光双引物对鸡新城疫及AIV、ILTV、IBV四种病毒争MG进行了实时荧光PCR检测。结果表明,只有以鸡新城疫标准毒株的克隆质粒为模板的管中能够检测到荧光信号,其他管中没有信号产生。该方法特异性强,灵敏度高,重复性好,在鸡新城疫临床诊断和出入境检疫中有着广阔的应用前景。     

猪流感病毒分型基因芯片的建立和初步应用

根据流感病毒血凝素（HA）和神经氨酸酶（NA）亚型基因序列间的差异性,分别设计H1、H3、H9、N1和N2的特异分型引物,并根据M基因设计A型流感病毒的通用引物。RT-PCR扩增猪流感病毒各亚型HA、NA和M基因的特异片段,克隆至pMD18-T构建重组质粒,制备探针。将各探针按一定的阵列点加到硝酸纤维素膜上,制成基因芯片。并对217份不同地区的样品进行检测。结果表明：该芯片可以同时检测待检样品中5种亚型A型流感病毒,并显示了较高的灵敏度和特异性,灵敏度比PCR高1个稀释度,比病毒分离高2个稀释度。该方法的建立为猪流感的检测及猪流感病毒各亚型在猪群中的流行病学调查提供了一种快速、灵敏和高通量的手段。     

RT—PCR一步法检测鸡传染性支气管炎病毒的研究

根据已发表的ＩＢＶＳ基因核苷酸序列,自行设计合成了一对跨幅约０．９ｋｂ的引物。该区段包括了Ｓ１基因Ｃ末端的４００ｂｐ和Ｓ２基因Ｎ末端的５００ｂｐ。用该引物对５株ＩＢＶ参考毒株Ｇｒａｙ、Ｍ４１、Ｈ１２０、Ｈ５２和ＭＡ５进行ＲＴ－ＰＣＲ一步法扩增均获得预期的ＰＣＲ产物,该引物的ＲＴ－ＰＣＲ灵敏度检测结果表明,可以检测出０．１１２ｐｇ／μＬ的模板。用该引物对３０个地方分离株进行检测,１８株呈阳性,与鸡胚传代及电镜观察结果一致。     

猪圆环病毒:一种新发现的病原

１９７４年,Ｔｉｓｃｈｅｒ［３２］发现,在多株连续传代的ＰＫ－１５细胞中存在一种形态类似小ＲＮＡ病毒的圆型小颗粒病毒,该病毒可以持续感染ＰＫ－１５细胞,不会引起细胞病变。Ｔｉｓｃｈｅｒ［３３］证实,ＰＫ－１５细胞中存在的这种病毒来源于当初制备ＰＫ－１５细胞的猪肾组织,病毒的基因组由一个单股呈圆环状的ＤＮＡ链组成,是一种新发现的病毒,称为猪圆环病毒（ＰＣＶ）。血清学调查表明,ＰＣＶ在柏林附近猪群中的阳性感染率高达７７％－９５％［３４］,之后加拿大［１１］、新西兰［１８］、英国［１２］、北爱尔兰［１…