运用RT-PCR一步法和Nested-CR法快速检测FMDV的研究

将Ｏ、Ａ型ＦＭＤＶＲＮＡ分离纯化，用ＲＴ－ＰＣＲ法扩增其聚合酶编码基因，可检测到Ａ型１０－６倍稀释、Ｏ型１０－４倍稀释乳鼠肌肉毒。Ｎｅｓｔｅｄ－ＰＣＲ扩增该基因内部片段，进一步说明该方法准确可靠。ＲＴ－ＰＣＲ一步完成使整个检测时间不超过１２小时，可在本病的诊断和检疫中推广此法     

鸡J亚群禽白血病病毒与七种常见病毒混合感染的调查

应用PCR方法对2009年6月到2009年9月来自不同地区、不同品种、不同日龄的45个疑似感染J亚群禽白血病病毒(ALV-J)的病鸡病料进行检测,同时对ALV-J与新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)、H9N2亚型禽流感病毒(H9N2 AIV)、包涵体肝炎病毒(IB-HV)、鸡传染性贫血病毒(CIAV)和呼肠病毒(REOV)等病毒的混合感染情况进行了调查。结果表明,采用ALV-J的特异性引物H5/H7,在45份送检病料中,有3份检出ALV-J,阳性率为6.67%。绝大多数病例检测出内源性禽白血病病毒,部分病例检测有其他7种病毒中的一种或几种。混合感染病例中以IBHV和IBV混合感染的比率较高,其中ALV-J与H9N2亚型AIV混合感染多见。     

2008年～2012年山东胶东鸡场NDV IBV AIV(H9)感染情况调查

为了解2008年1月～2012年6月山东胶东青岛、潍坊和烟台三地区新城疫病毒(NDV)、传染性支气管炎病毒(IBV)和H9亚型禽流感病毒(AIV(H9))的感染情况,采用RT-PCR对送检的5 001份患有呼吸道症状的病料进行了检测.结果显示,3地区3种病毒的总阳性率为48.49％,其中AIV(H9)感染率最高,为26.15％.青岛地区NDV和IBV的阳性率均最高,分别为15.94％和11.63％,潍坊地区AIV(H9)阳性率最高(29.23％).4年半间AIV(H9)感染下降明显,但NDV近3年感染明显抬头.寒冷月份3种病毒感染较高,3月份NDV和AIV(H9)阳性率均最高,分别为21.07％和38.17％;10月份IBV阳性率最高为15.40％.3种病毒混合感染阳性率为6.66％,以NDV+ AIV(H9)二重感染最常见(2.98％),NDV+IBV+AIV(H9)三重感染为0.40％.结果表明,山东胶东地区NDV、IBV和AIV(H9)的感染情况较普遍,存在一定程度的混合感染,为有效防控山东省规模鸡场该3种主要疾病提供了依据.     

百病清防止肉仔鸡大肠杆菌病效果观察

百病清防止肉仔鸡大肠杆菌病效果观察尹燕博，郭福生康顺文，冯韬（农业部动物检疫所青岛２６６０３２）（诸城市外贸集团公司山东诸城２６２２０赵亚荣，孟怀旺（德国拜耳公司北京联络处北京１０００２０）在新城疫、肾型传染性支气管炎等病毒病的基础上继发感染大肠杆菌...     

通用基因芯片对奶牛乳房炎主要致病菌的检测

应用生物信息学手段和查阅文献资料设计了金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、无乳链球菌、绿脓杆菌、停乳链球菌、乳房链球菌6种奶牛乳房炎主要致病菌的通用引物和金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、绿脓杆菌的寡核苷酸探针及无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌的特异引物,并用这3种特异引物扩增片段的纯化产物作为这3种链球菌的检测探针。在引物对样品中细菌的相应基因片段扩增的同时进行靶基因的生物素标记,扩增的产物与硝酸纤维素膜上的探针进行杂交,酶联、显色后根据芯片扫描仪的判读结果来确定奶牛乳房炎致病菌感染的种类。结果表明,建立的以16S rDNA为对象的基因芯片技术可以快速的检测出以上6种细菌,整个检测过程需要6h-7h,灵敏度高,特异性好,能快速的对奶牛乳房炎的主要致病菌做出诊断。     

狂犬病诊断基因芯片的建立和检测应用的初步研究

根据已发表的狂犬病病毒（RV）的序列,设计合成能扩增高度保守核（N）蛋白片断的一对引物。通过生物素标记PCR技术,将核（N）蛋白基因片断作为探针点在硝酸素纤维膜上,制作成疾病诊断基因芯片。取160份可疑动物的血液,提取核酸作模板进行PCR扩增,将其产物与诊断基因芯片进行特异性逆向点杂交检测;并用蔗糖密度梯度离心和凝胶层析纯化狂犬病病毒作抗原,建立检测RV抗体的间接ELISA。把以上两种方法应用于临床,结果基因芯片的检测率比ELISA方法和（RT）PCR要高15％左右,表明建立的狂犬病诊断基因芯片具有更高的灵敏度和特异性。     

2007-2008年同一地点H9N2亚型禽流感病毒连续分离毒株HA基因序列分析

2007年3月到2008年3月,某大型肉鸡养殖场发生H9N2亚型禽流感疫情,临床症状多为呼吸道症状,发病鸡群生长缓慢、死亡率上升较快.在此时间段,我们对此养殖场发病的鸡群进行了连续的病毒的分离和病原鉴定,共分离和鉴定出11株H9N2亚型禽流感病毒.     

现代生物安全体系亟待建立（上）

生物安全作为国际社会所面临的最紧迫的问题之一日趋明显。从根本上讲，就是“控制与粮食和农业，包括林业和水产有关的所有生物和环境风险”，即涉及粮食安全以及动植物生命与卫生领域。该风险包括所有范围，从转基因作物，外来品种和传入的动植物害虫，到生物多样性侵蚀、跨国界动物疾病的