鸡新城疫病毒荧光双链引物实时荧光PCR检测方法的研究

根据鸡新城疫F糖蛋白的保守基因序列,设计一对正引物。根据正引物设计一对与之相互补的负引物。正引物的5’端标记FAM,负引物的3’标记淬灭剂DABCYL。反应体系中进行引物杂交后,由于正、负引物完全互补,FAM产生的荧光被标记在负引物上的DAB-CYL淬灭掉。然后利用杂交后生成的荧光双引物对鸡新城疫及AIVI、LTVI、BV四种病毒和MG进行了实时荧光PCR检测。结果表明,只有以鸡新城疫标准毒株的克隆质粒为模板的管中能够检测到荧光信号,其他管中没有信号产生。该方法特异性强,灵敏度高,重复性好,在鸡新城疫临床诊断和出入境检疫中有着广阔的应用前景。     

鸵鸟采精方法研究

对 1 0只体况较好的黑颈公鸵鸟进行假阴道法采精试验 ,结果获得优良品质的精液 ,平均精液量为 0 94mL ,精子活率平均为 0 88。试验表明 ,在对公鸵鸟进行一定时间的调教之后 ,采用假阴道法采精是简单可行、具有实践意义的方法     

鸵鸟输精方法初探

采用手臂引导法给５只鸵鸟进行阴道内输精,共输精１６次,并在２周内收蛋１７枚,其中有受精蛋８枚,受精率为５０%,经孵化获得雏鸟７只。试验初步认为,对母鸵鸟进行训练后,用此方法进行输精是可行的;对鸵鸟这样大型的鸟类,进行阴道浅部输精效果较好。     

鸵鸟新城疫研究进展(下)

由于鸵鸟的体型大、寿命长，以及开放的饲养方式等特点．对鸵鸟进行新城疫的免疫预防，的确不同于鸡和其他家禽。人们对鸵鸟的免疫应答所知甚少。Allwright D(1996年)通过对4和14月龄鸵鸟攻毒．研究了几种免疫程序，并报道说疫苗免疫是有效的，但也指出加佐剂疫苗的一些副作用，特别是油佐剂疫苗。Verwoerd D J，Gerdes G H等(1997年)报道，分别在4周龄和10周龄免疫La Sota活疫苗的10只     

微量凝集试验对鸡大肠杆菌O抗原血清型鉴定的研究及初步应用

为改进大肠杆菌血清型鉴定方法,用５株标准菌株在９６孔Ｕ型板上进行微量凝集试验,优选了反应及观察条件：每孔中加５０μＬ菌体抗原（浓度为１．５×１０９－２．０×１０９个菌／ｍＬ）和５０μＬＯ抗原单因子血清（稀释度从１／１０－１／８０）混合,于３７℃反应１．５－２ｈ,阳性结果可在黑色背景上清晰观察到片状凝集。试验各株均与原血清型一致。用此法对１７株来自山东某地的鸡大肠杆菌进行了血清型鉴定,结果Ｏ７８为５株,Ｏ３６５株,Ｏ１３１４株,Ｏ７０３株,与以前用常规方法对该地区菌型鉴定结果相符。     

鸡传染性支气管炎ELISA抗体检测试剂盒的研制

采用加蔗糖垫离心纯化鸡传染性支气管炎病毒(IBV)制备抗原，用提纯的IBV抗原包被微量板，建立了检测鸡传染性支气管炎(IB)抗体的ELISA试剂盒。抗原、被检血清和酶标结合物的最佳工作浓度分别为10ug／ml、1：200和1：3200。与IDEXX试剂盒相比，其敏感性、重复性、特异性均接近国外同类产品水平。对SPF鸡血清、实验免疫与攻毒的SPF鸡血清进行检测，结果表明所建立的ELISA特异性为95．6％，与IDEXX试剂盒符合率为95．6％。用于检测抗IBV特异性IgG抗体发现在免疫接种IB弱毒苗后，第4天即可检测到IgG抗体，峰值在第3周。试验鸡在通过滴鼻、点眼途径人工感染IBV强毒后，第5天抗体滴度明显上升。我们认为，该法是目前我国SPF鸡质量监测、养鸡生产中进行IB监测较好的方法。     

鸡致病性大肠杆菌抗药性调查

鸡大肠杆菌病,对养禽业危害严重,许多常用抗菌药已不能有效控制。在生产中由于长时间大剂量使用抗菌药物及其它原因造成抗药性菌株不断出现,不仅造成浪费,也带来药物残留,鸡的免疫机能下降等诸多问题。为此,从山东７个地市（日照、莱芜、潍坊、青岛、泰安、济宁、东营）和东北某一市的病死鸡中分离出２４株Ｅ．ＣｃｏＩｉ。用２１种药物进行抗药性测试。结果表明２４株Ｅ．ｃｏｌｉ抗药性相当严重,每种药物的抑菌范围也有差异。２１种药物只有２种药最敏感,８种药完全不敏感,其余间种药也只对３个～８个菌株产生高度敏感,对１个～…     

非洲猪瘟间接ELISA诊断试剂盒的研究

用带有编码非洲猪瘟病毒衣壳蛋白Ｐ７２ 基因的重组杆状病毒（Ｂａｃｐ７２）作载体,在ｓｆ９细胞中表达并得到重组Ｐ７２蛋白,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ可得到分子量在 ７２ｋＤａ左右的电泳带。用标准阳性非洲猪瘟血清对 Ｐ７２蛋白进行 ＥＬＩＳＡ检测,证明该蛋白具有生物学活性。用Ｐ７２作为间接法的包被抗原,对ＥＬＩＳＡ反应条件进行了优化。确定最佳包被液为ＰＢＳ（ｐＨ７．２）、最佳封闭液为１％ＰＣＴ、最佳血清稀释液为４％ＰＥＧ６０００／ＰＢＳ、最佳冲洗液为０．５Ｍ ＮａＣｌ／０．５％Ｔｗｅｅｎ－２０／ＰＢＳ（ｐＨ７．２）。本实验反应体系采用５０μｌ的微量法,可节约试剂及抗原。反应在２小时内即可完成,达到了快速诊断的目的。包被了抗原并用封闭液封闭后的酶标板密封后保存于－２０℃的冰箱中,至少可以保存５个月。阻断试验和交叉试验表明ＥＬＩＳＡ法有良好的特异性。间接ＥＬＩＳＡ比Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ法具有更高的灵敏性。血清学调查没有得到阳性结果,与我国实际情况相符。用Ｂａｃｐ７２表达的非洲猪瘟病毒Ｐ７２蛋白抗原作为间接ＥＬＩＳＡ的检测抗原来检测非洲猪瘟血清具有快速、简单、无感染的特点。本实验为非洲猪瘟ＥＬＩＳＡ检测试剂盒的最终组装提供了实验依据。     

鸵鸟精子的超微结构

为了丰富鸵鸟精子的形态资料和为提高鸵鸟的人工授精技术提供参考,采用透射电镜和扫描电镜对鸵鸟精子的超微结构进行观察,并且与其它非雀形目鸟类以及哺乳动物的精子结构进行了比较。结果表明,鸵鸟精子呈细长的圆柱状,分为头部、颈段、中段、尾段、末段,其结构与美洲鸵和Tinamou精子相似。鸵鸟精子头部由顶体和精子核组成,精子核中有一条顶体刺。鸵鸟精子没有明显的颈部。中段的外周环绕着线粒体鞘。主段的中央为轴丝,轴丝外周有纤维鞘。鸵鸟精子的超微结构与美洲鸵和tinamou相似,但是与其它非雀形目的鸟类和哺乳动物的精子有很大的区别。     

通用基因芯片对奶牛乳房炎主要致病茵的检测

应用生物信息学手段和查阅文献资料设计了金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、无乳链球菌、绿脓杆菌、停乳链球菌、乳房链球菌6种奶牛乳房炎主要致病菌的通用引物和金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、绿脓杆菌的寡核苷酸探针及无乳链球菌、停乳链球菌、乳房链球菌的特异引物,并用这3种特异引物扩增片段的纯化产物作为这3种链球菌的检测探针。在引物对样品中细菌的相应基因片段扩增的同时进行靶基因的生物素标记,扩增的产物与硝酸纤维素膜上的探针进行杂交,酶联、显色后根据芯片扫描仪的判读结果来确定奶牛乳房炎致病菌感染的种类。结果表明,建立的以16S rDNA为对象的基因芯片技术可以快速的检测出以上6种细菌,整个检测过程需要6h~7h,灵敏度高,特异性好,能快速的对奶牛乳房炎的主要致病菌做出诊断。