超声波辅助酸酶法提取碎米抗性淀粉工艺的优化

[目的]优化超声波辅助酸酶法提取抗性淀粉工艺条件,为碎米抗性淀粉的提取和高值化利用提供技术支持.[方法]以碎米淀粉为原料,抗性淀粉提取率为评价指标,在单因素试验基础上,利用Design-Expert 8.05进行响应面分析,并建立二次多项式数学模型,依据回归分析确定超声波辅助酸酶法提取抗性淀粉的最优工艺条件.[结果]建立了抗性淀粉提取率(Y)对盐酸浓度(A)、酶用量(B)、酸解时间(C)和超声波时间(D)的二次回归方程:Y=51.99+1.03A+0.93B+0.88C-0.64D-0.55AB+0.58AC-0.73AD+1.12BC+0.56BD+0.52CD-1.25A2-2.28B2-5.24C2-1.60D2.各因素对碎米抗性淀粉提取率的影响排序为盐酸浓度>酶用量>酸解时间>超声波时间;酶用量与酸解时间的交互作用对碎米抗性淀粉提取率影响极显著(P<0.01),盐酸浓度与超声波时间的交互作用影响显著(P<0.05).超声波辅助酸酶法提取抗性淀粉最优工艺条件为:盐酸浓度0.5 mol/L、酶用量3.5 U/g、酸解时间1.5 h、超声波时间25 min,在此条件下,抗性淀粉提取率为51.99%,与预测值(52.44%)接近.[结论]通过响应面试验优化的超声波辅助酸酶法可有效提取碎米抗性淀粉,建立的回归模型可用于实际生产预测.     

积极推进教学改革全方位提高学生的英语水平

通过对新旧<大学英语教学大纲>在阅读、写作、听力要求的比较,结合语言学习规律和教学实践经验,提出了符合农林院校实际的外语教学方法及改革措施,旨在全面、切实提高学生的英语水平.     

种子液传代次数对纳豆芽孢杆菌固体发酵的影响

通过采用连续传代的纳豆芽孢杆菌种子液接种豆粕进行固体发酵,测定发酵产物中的细菌总数及活菌数,发现种子液传代次数对纳豆芽孢杆菌固体发酵的产量有很大的影响,同时菌种在多次连续传代后、会产生菌种退化现象。本试验研究表明,Na和N1型纳豆芽孢杆菌菌株自斜面培养基接种后进行4次传代,是比较合适的。     

五龙鹅对黑麦草结构日粮消化代谢规律的研究

选取4.5月龄的五龙鹅32只进行试验,试验分为4个组,1个对照组,3个处理组,每组8个重复,对照组饲喂基础日粮,处理组饲喂基础日粮与青绿冬牧-70黑麦草重量的比例分别为1:2、1:3、1:4(CF占日粮干物质的量分别为9.14％、17.92％、20.40％、22.27％),试验采用全收粪法,连续收集正试期4d排泄物,分析饲料及排泄物中的CF、NDF、ADF、AA、N、Ca、P等的含量。试验结果表明：在能量和CP摄入量一致的条件下,随着日粮粗纤维含量的提高,CF、NDF、ADF消化率逐渐提高;净蛋白利用率处理组间逐渐升高;除蛋氨酸(Met)和胱氨酸(Cys)外,其余氨基酸消化率(AAAD)变化不大;但降低Ca的吸收率,增加P的吸收率。     

口蹄疫病毒结构蛋白的二级结构及其B细胞抗原表位的预测

以口蹄疫病毒OLZ02株基因组序列为材料，采用Garnier—Robson法、Chou-Fasman法和Karplus—Schulz法预测了其结构蛋白的二级结构，用Kyte-Doolittle法分析了各结构蛋白的亲水性，Emini法预测了各结构蛋白的表面可能性，Jameson—Wolf法预测了各蛋白的抗原指数，综合评价了口蹄疫病毒结构蛋白的B细胞抗原表位。结果表明，VPl蛋白含有的B细胞优势抗原表位最多，是研制口蹄疫基因工程疫苗的首选免疫原，但其他结构蛋白也含有少量的B细胞抗原表位，有的甚至有可能成为优势抗原表位。     

持续感染黄牛体内口蹄疫病毒抗原性和血清中和特性分析

以口蹄疫病毒O/Akesu/58毒株感染黄牛获得口蹄疫病毒持续带毒动物,定期分离黄牛食道/咽喉部黏性液体（O/P液）和血清,研究病毒分离毒株抗原基因变异及其血清中和特性,从基因水平和血清学方面研究口蹄疫病毒持续感染分离株的抗原变异性。用RT-PCR扩增分离株抗原基因VP1,分析VP1基因变异情况;用微量血清中和试验检测了口蹄疫病毒持续感染血清与对应动物分离毒株的中和特性,并用液相阻断ELISA方法检测了口蹄疫病毒持续感染血清的抗体水平变化,并对其相关性进行了分析。结果发现所有持续感染分离毒株的VP1基因核苷酸和氨基酸同源性都在98%以上,没有碱基缺失或插入现象;与O/Akesu/58的核苷酸同源性仅为85%左右,氨基酸同源性也仅为90%。持续感染分离株VP1基因有多处位点发生突变,其中有16个核苷酸位点发生一致突变,但只有2个位点造成氨基酸突变（I 56→T、A 210→E）;而持续感染分离毒株有4个核苷酸位点和3个氨基酸位点发生了颠换突变;同时证实不同时间分离株与对应血清都能相互中和,且中和作用能力随着时间延续呈下降趋势,最低为1∶80,具有较强的中和能力,这与LPB-ELISA检测结果基本一致。这说明口蹄疫病毒持续感染分离株抗原变异不显著,没有变异到动物自身血清不能识别的程度,而且分离毒株与自身动物血清具有较强的中和特性;在持续感染过程中,动物血清保持高水平抗体滴度,且持续感染毒株的分离与否与抗体水平没有显著相关性。     

羊口疮病毒ORF129基因的原核表达、纯化及鉴定

试验旨在克隆羊口疮病毒ORF129基因,并对其编码蛋白进行表达及纯化。参照GenBank已发表羊口疮病毒OV-IA82株ORF129基因序列(登录号:AY386263.1),用Primer Premier 5.0软件设计合成1对特异性引物,利用PCR方法扩增ORF129全基因序列,将其与质粒pET-28a(+)经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后连接,构建重组质粒pET-28a(+)-ORF129。重组质粒经双酶切和测序鉴定后转化大肠杆菌Rosttta感受态细胞,利用IPTG诱导ORF129基因的表达,经SDS-PAGE分析后,将表达产物超声破碎、洗涤、溶解,然后采用尿素梯度透析方法进行复性,经亲和层析法纯化目的蛋白并通过Western blotting对其进行鉴定。双酶切鉴定和测序结果表明,本试验成功构建了重组质粒,读码框正确,菌液起始D600nm值为0.4~0.8,37℃、220r/min、1mmol/L IPTG诱导3h时能得到ORF129包涵体蛋白,蛋白大小为58ku,在加入精氨酸、甘油的复性液中,蛋白复性率较高,将复性后蛋白与Ni柱结合,在咪唑浓度为500mmol/L时,能将蛋白洗脱,纯化的蛋白经Western blotting鉴定正确,证明蛋白成功表达。本研究成功构建了羊口疮病毒ORF129基因原核表达重组质粒,并成功表达和纯化了ORF129蛋白,为后续羊口疮病毒检测方法的建立奠定基础。     

羊传染病防控措施

秋季是引种、母羊配种、羔羊育肥的最佳时节,羊只的流通比较频繁,为疾病的传播创造了条件。做好秋季羊病的防控,不仅有利于该季的养羊生产活动,而且能为羊群顺利过冬打下良好的基础。本期继续邀请来自国家肉羊产业技术体系疫病防控功能研究室的专家,分别从传染病、普通病、寄生虫病三个方面介绍秋季羊病的流行特点、发病规律与预防控制措施。我们还将介绍冬季羊病防制专题,敬请继续关注!     

羊口疮病毒疫苗株与野毒株VIL-10基因的比较分析

试验旨在比较分析羊口疮病毒(orf virus,ORFV)VIL-10基因在疫苗株和野毒株之间的差异特征。参照GenBank中公布的ORFV NZ2株的VIL-10基因序列设计并合成1对特异性引物,分别以疫苗株和野毒株提取的基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增ORFV的VIL-10基因全序列并进行测序,应用生物信息学相关软件分析基因的核苷酸、氨基酸变异情况及蛋白结构。结果显示,本试验测定的疫苗株和野毒株VIL-10基因核苷酸序列同源性为94.4%,差异主要是单个碱基的突变,其中疫苗株在132~134bp核苷酸序列出现缺失;氨基酸序列同源性为92.5%,出现了15个氨基酸位点的突变,其中疫苗株第42位氨基酸天冬酰胺出现缺失;蛋白质在一级结构及理化性质、二级结构、三级结构、抗原表位参数及有无信号肽之间均存在一定程度的差异,而疫苗株和野毒株编码的蛋白质均无跨膜结构域。系统进化树分析结果表明,本试验测定的野毒株与疫苗株属于不同分支,遗传关系较远。研究结果提示,野毒株与疫苗株的VIL-10基因发生较明显的变异,这些变异可能与ORFV疫苗株的毒力致弱有关。     

湖北省羊口疮病毒的分离鉴定

利用MDBK传代细胞系对湖北通山县某羊场疑似羊口疮(Orf)的黑山羊病料进行分离,通过病毒理化特性试验、动物回归试验和PCR等方法对分离的毒株进行鉴定。结果表明,病料悬液接种MDBK细胞后出现细胞病变,接种病料的羊只出现典型的Orf症状,扩增出羊口疮病毒(Orf virus)B2L基因,该毒株与台湾山羊株(EU935106.1、DQ904351.1)相似性最高(均为99%),亲缘关系最近。本研究成功分离鉴定到一株ORFV,命名为ORFV/HB/09。