口蹄疫病毒P1+2A基因真核表达载体的构建

通过RT-PCR方法获得了口蹄疫病毒O型,编号为OF3毒的P1+2A区的目的基因,并将其克隆到克隆载体pMD18-T上,再根据表达载体pQE-Trisystem的特性及酶切位点设计合适的表达引物.由表达引物通过PCR技术从克隆载体上扩增出带有特定酶切位点的目的片段,再对载体和目的片段进行酶切处理,处理后由T4 DNA连接酶将二者连接.通过PCR及酶切鉴定,结果证明口蹄疫病毒目的基因片段已被正确克隆到表达载体pQE-Trisystem上.     

锦鲤品种选育与体色选择试验

为了获得优质的锦鲤后代,对锦鲤进行了品种选育和体色选择试验,取得了良好的效果.在试验的基础上,总结出锦鲤亲鱼培育、人工繁育和体色选择的方法,为锦鲤品种的选育和体色选择提供了技术指导.     

猪源口蹄疫病毒China99/S株基因组全长cDNA的构建及其感染性鉴定

提取猪源FMDV China99/S组织样品总RNA,利用设计的引物对,分段进行扩增,获得覆盖全基因组的4个重叠片段(A、B、C和E),然后用BsmB Ⅰ/Xma Ⅰ、Xma Ⅰ/BamH Ⅰ、BamH Ⅰ/Not Ⅰ、Hpa Ⅰ/Kpn Ⅰ分别双酶切A、B、E、C,并纯化回收,依次定向克隆到带有聚合酶Ⅰ的pPⅠ cDNA3.1(+)转录载体内,最终得到重组质粒pP1-FMDVcDNA3.1(+);然后对该质粒进行序列测定.结果表明,China99/S株基因组全基因组序列长8 116 nt(含Poly(C)和Poly(A)片段),其中5′NCR长1 064 nt,蛋白编码区核苷酸序列为6 318 nt,编码1个由2 106个氨基酸组成的聚合蛋白,3′NCR长93 nt,其后是含有38个A碱基的Poly(A)尾.其中5′NCR引入含41个C的Poly(C)片段.将pPⅠ FMDVcDNA3.1(+)用脂质体转染法导入BHK-21细胞,传代培养,可以观察到典型的FMDV致细胞病变效应.利用CPE、电镜、动物试验、RT-PCR和序列测定进行检测,结果表明,从该系统中成功拯救出具有感染性的猪源FMDV China99/S株重组病毒.     

广西油茶产业发展现状与对策

为广西油茶产业高质量发展提供参考,从保障国家食用油安全、推进生态文明建设、促进农业产业结构调整等方面分析发展高质量油茶产业的战略意义,并对广西油茶产业发展的现状、趋势、存在的问题及其原因进行系统分析,从而提出广西油茶产业健康发展的对策措施和建议。     

五龙鹅对鲜黑麦草结构日粮粗蛋白质和氨基酸代谢规律的研究

选120日龄健康五龙鹅,饲喂含不同比例的冬牧-70鲜黑麦草日粮。采用全收粪法收集粪便,检测粪便中粗蛋白质和氨基酸含量,研究日粮粗蛋白质和氨基酸的代谢规律。结果表明：对照组与饲喂基础日粮与鲜黑麦草比例为1：3、1：4的试验组间净蛋白质利用率(NPU)差异不显著,试验组中随着鲜黑麦草比例的提高NPU呈现出升高的趋势,组问差异显著;必需氨基酸利用率(除蛋氨酸、胱氨酸、异亮氨酸和苯丙氨酸外)组间差异不显著,饲喂基础日粮与鲜黑麦草比例为1：4的试验组蛋氨酸和胱氨酸消化率最低,与对照组差异极显著。     

氯己定碘溶液对奶牛乳头消毒效果的研究

为评估氯己定碘溶液对奶牛乳头消毒效果,90头泌乳奶牛被平均分成3个组:Ⅰ组和Ⅱ组奶牛在挤奶前后分别使用氯己定碘溶液和聚维酮碘溶液来对乳头进行药浴消毒,Ⅲ组奶牛不做任何消毒处理。试验持续至12周。结果表明,1)与试验前相比,Ⅰ组和Ⅱ组奶牛日均奶产量和体细胞数(SCC)差异不显著,Ⅲ组奶牛的日均奶产量极显著下降(P0.01),SCC值极显著升高(P0.01);2)持续用药12周后,Ⅰ、Ⅱ组奶牛乳房检出菌株数明显减少,头感染率(33.3%、46.7%)和乳区感染率(11.7%、26.7%)均发生极显著或显著下降(P0.01或P0.05),而Ⅲ组奶牛却发生了显著上升(P0.05);3)持续用药12周后,Ⅰ组奶牛乳房内感染菌的头清除率(60.0%)和乳区清除率(83.3%)显著高于Ⅱ组(44.0%和50.0%),而Ⅲ组奶牛的头清除率和乳区清除率均为0。研究表明,在挤奶前后对奶牛进行乳头消毒可有效预防乳房感染风险,且使用氯己定碘溶液对乳头进行药浴消毒,其功效优于聚维酮碘溶液。     

羊口疮病毒ORF129基因的原核表达、纯化及鉴定

试验旨在克隆羊口疮病毒ORF129基因,并对其编码蛋白进行表达及纯化。参照GenBank已发表羊口疮病毒OV-IA82株ORF129基因序列（登录号：AY386263.1）,用Primer Premier 5.0软件设计合成1对特异性引物,利用PCR方法扩增ORF129全基因序列,将其与质粒pET-28a （+）经BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切后连接,构建重组质粒pET-28a （+）-ORF129。重组质粒经双酶切和测序鉴定后转化大肠杆菌Rosttta感受态细胞,利用IPTG诱导ORF129基因的表达,经SDS-PAGE分析后,将表达产物超声破碎、洗涤、溶解,然后采用尿素梯度透析方法进行复性,经亲和层析法纯化目的蛋白并通过Western blotting对其进行鉴定。双酶切鉴定和测序结果表明,本试验成功构建了重组质粒,读码框正确,菌液起始D_{600 nm}值为0.4~0.8,37℃、220 r/min、1 mmol/L IPTG诱导3 h时能得到ORF129包涵体蛋白,蛋白大小为58 ku,在加入精氨酸、甘油的复性液中,蛋白复性率较高,将复性后蛋白与Ni柱结合,在咪唑浓度为500 mmol/L时,能将蛋白洗脱,纯化的蛋白经Western blotting鉴定正确,证明蛋白成功表达。本研究成功构建了羊口疮病毒ORF129基因原核表达重组质粒,并成功表达和纯化了ORF129蛋白,为后续羊口疮病毒检测方法的建立奠定基础。     

猪瘟兔化弱毒株E~(rns)基因的克隆及序列分析

从兔脾组织中提取猪瘟病毒兔化弱毒株RNA,利用RT-PCR技术,扩增了猪瘟兔化弱毒的第一个囊膜糖蛋白基因Erns,并对其进行了序列分析。核苷酸序列比较发现,CSFV与Brescia株和GPE-株的同源性为94.6 %,与石门毒株和Alfort/A19株的同源性为95.0 %,与ALD株的同源性为95.4 %。根据核苷酸序列推导出氨基酸序列,并进行氨基酸序列同源性比较,结果表明,CSFV与Alfort/A19株和ALD株的同源性为93.8 %,与GPE-株的同源性为93.0 %,与石门毒株和Brescia株的同源性分别为94.7 %和95.2 %。 rns     

四川省稻渔综合种养产业发展现状及建议

稻渔综合种养是为适应新时代现代农业农村发展要求,在传统稻田养鱼的基础上,继承并创新发展的一种生态循环农业发展模式。这种模式是利用了稻田浅水生态环境,进行田间工程改造,通过种养结合,在保障水稻稳产的前提下,既产出水稻又产出水产品,对促进农业调结构转方式和可持续发展具有重要意义。当前,稻渔综合种养产业已成为影响水稻生产和水产品稳定供给的重要产业,成为乡村振兴的重要抓手。文章通过文献查阅和实地调研等,就四川省稻渔综合种养产业发展现状和存在的问题进行分析,并对未来产业发展提出建议,以期为四川省稻渔综合种养产业发展提供参考。     

家畜布鲁氏菌BP26基因的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

利用原核表达的布鲁氏菌BP26蛋白作为标准抗原蛋白,建立布鲁氏菌病抗体检测方法。本试验从布鲁氏菌S2疫苗株通过PCR扩增获得BP26基因,构建融合表达质粒pET-28a-BP26后并转化BL21宿主菌,IPTG诱导表达,应用Western blot鉴定表达产物,并以纯化的重组蛋白作为包被抗原,通过优化反应条件,建立布鲁氏菌病抗体ELISA检测方法。结果表明,通过反应条件优化确定抗原的适宜包被浓度为5μg/mL,血清适宜稀释度为1∶20,二抗的适宜工作浓度为1∶20 000;通过敏感性试验结果表明,当血清稀释至1∶1 280时,仍检测为阳性;通过批间、批内重复性试验,变异系数均小于10%,表明本检测方法具有较高的重复性。用该方法对100份临床样本进行检测,并与试管凝集试验(SAT)进行相符性验证,符合率为94%,为布鲁氏菌病临床血清抗体检测及流行病学调查提供了技术手段。