延边黄牛和延黄牛脂肪组织FASN基因mRNA表达水平与肉质的关系

为了探讨不同品种牛不同脂肪沉积部位FASN基因mRNA表达水平与肉质的关系,采用荧光定量PCR技术检测延边黄牛和延黄牛皮下脂肪、腹部脂肪、肾周脂肪与其他器官的FASN基因mRNA表达水平。结果表明,2个牛品种的FASN基因mRNA在不同脂肪组织中表达量均高于背最长肌,而延黄牛皮下脂肪和腹部脂肪中FASN基因mRNA表达量都高于延边黄牛。通过对肺、小肠、肾脏、肝脏和心脏中FASN基因mRNA研究发现,延边黄牛和延黄牛肺中FASN基因mRNA的表达量高于其他脏器。由此可见,FASN是影响脂肪酸合成的关键酶,与肉质相关,其中皮下脂肪和腹部脂肪是脂肪酸合成的主要部位。     

6月龄去势对延边黄牛生长性能、血液睾酮及生长激素水平的影响

为研究6月龄去势对延边黄牛生长性能及血液激素的影响,试验选用20头6月龄体重、体况相近的延边黄牛,随机分成2组,每组10头,试验组黄牛6月龄去势,对照组不去势,试验期12个月。试验期间在试验牛6、8、10、12、14、16及18月龄的当月12号称重并测量体尺,每次称重前一天早上空腹经颈静脉采血,检测血清睾酮和生长激素的含量。结果显示,试验期间试验组黄牛去势后体重均低于对照组,其中8月龄时差异显著（P < 0.05）;试验组延边黄牛体高、胸围、体斜长均低于对照组,但差异均不显著（P > 0.05）,6~8月龄时,试验组去势黄牛体高的增长显著低于对照组（P < 0.05）,12~14月龄时,试验组显著高于对照组（P < 0.05）,其他月龄间两组差异不显著（P > 0.05）。试验组黄牛去势后血清睾酮水平极显著或显著低于对照组（P < 0.01;P < 0.05）,试验组黄牛血液生长激素水平低于对照组,其中8月龄时差异显著（P < 0.05）。综上所述,6月龄去势能够降低延边黄牛体重的增长,但对体尺影响不大,且能降低延边黄牛血清睾酮及生长激素水平。     

猪胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣA基因特异片段的克隆和表达

以猪胸膜肺炎放线杆菌的血清7型国内分离株25-4株基因组DNA为模板,PCR方法扩增apxIVA特异片段,PCR产物经纯化后与载体PMD18-T进行连接、转化,经酶切及序列分析鉴定后,亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1中,构建成重组表达质粒pGEX-apxIVA,转入到大肠杆菌BL21中,以IPTG进行诱导,进行SDS-PAGE电泳.结果表明,25-4株apxIVA gene与基因库中标准7型apxIVA gene同源性达97%,所表达的融合蛋白相对分子量为44kD,与实际预测相符.apxIVA毒素特异片段的成功表达为猪胸膜肺炎放线杆菌病的诊断打下基础.     

胸膜肺炎放线杆菌ApxⅡ毒素的基因序列特征

为了深入地了解胸膜肺炎放线杆菌（APP）分泌的ApxⅡ毒素的分子结构及序列特征，本实验以一株APP7型现地分离株L25-4株为实验材料，对其分泌的ApxⅡ毒素的结构基因apxⅡA及其上游启动子区进行了PCR扩增和测序。结果表明APP7型L25-4株apxⅡA基因与其它血清型apxⅡA基因核苷酸序列同源性达99．5％以上，氨基酸序列同源性达98．5％以上。在ApxⅡA蛋白的N末端有3个大的疏水结构域，分布在240422位氨基酸之间。在ApxⅡA蛋白的C末端有富含甘氨酸（Gly）和天门冬氨酸（Asp）的九肽（nonapeptides）重复序列Leu／I1e／Phe-Xaa-Gly—Gly-Xaa-Gly-Asm／Ssp-Asp-Xaa，串连重复9次。这些结构域的起始氨基酸的位置分别为374、503、630、735、753、762、771、780和802。推定的赖氨酸酰基化作用位点为557位氨基酸，与E．coil的H1yA相比，在688位氨基酸处少了一个赖氨酸酰基化作用位点。apxⅡA基因启动子-10区序列为AATAAT，-35区序列为TTAAT，-10区与-35区间隔序列为11个碱基。     

胸膜肺炎放线杆菌ApxII毒素结构基因的原核表达以及重组蛋白的免疫原性分析

猪传染性胸膜肺炎(Porcine infectious pleuropneumonia)是由胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)引起的猪的一种呼吸道疾病。本实验以APP血清7型的一株现地分离株L25-4株为研究对象,对其分泌的ApxⅡ毒素的结构基因apxⅡA进行了全基因克隆和测序,并利用原核表达载体pGEX-6P-1在E.coli中进行了原核表达。表达产物以包涵体形式存在,包涵体蛋白经过洗涤后作为抗原用于Western-blotting免疫印迹实验,结果表明重组的ApxⅡA蛋白具有良好的免疫原性。     

牛分枝杆菌mpb64-ag85b-esat6融合基因的分子克隆及表达

以牛分枝杆菌valleeⅢ株基因组DNA为模板,PCR扩增mpb64、ag85b和esat6 3个目的基因片段,采用重叠延伸剪接技术（SOE）和基因重组技术获得融合基因mpb64-ag85b,将mpb64-ag85b和esat6串联到同一原核表达载体pET32a（＋）中获得重组质粒pET64-85b-e6。将其转化到大肠杆菌感受态细胞BL21（DE3）中,以IPTG（终浓度1 mmol/L）进行诱导,SDS-PAGE电泳分析表达情况,以Ni^2＋亲和层析柱纯化表达的融合蛋白和Western blot分析融合蛋白的免疫活性。结果表明：表达的融合蛋白大约为76 Ku,与预测大小相符,以Ni^2＋亲和层析柱纯化的融合蛋白能与牛结核病阳性血清发生反应。     

牛结核病研究进展

牛结核病(bovine tuberculosis)是由牛分枝杆菌(Mycobacterium bovis)和结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)所引起的一种人畜共患的慢性消耗性传染病,可通过病畜传染给人类或其他动物。牛结核病在世界各国均有发生,在我国依然是最常见的多发性疾病,牛结核病有众多的宿主谱,几乎可以感染所有的温血脊椎动物。牛结核病的传染流行严重地影响到畜牧业的持续健康发展,不仅造成奶牛乳房炎、结核性胸膜炎等疾病,还造成牛奶产乳率和乳质下降,更严重威胁着人类的身心健康。     

牛分枝杆菌分枝菌酸环丙烷合酶PCAA的表达与鉴定

以牛分枝杆菌Vallee株基因组为模板,利用PCR方法扩增该菌株的环丙烷一分枝茵酸合酶pcaA基因,并克隆到原核表达载体pET-32a（＋）中,通过大肠杆菌BL21（DE3）表达重组融合蛋白,并利用Ni-亲和层析的方法纯化出重组蛋白。通过鉴定其免疫活性。试验结果表明,成功扩增出了牛分枝杆菌中pcaA基因并纯化出了重组的融合蛋白,通过免疫印记发现,重组蛋白可与牛结核阳性血清发生特异性反应,为进一步研究牛分枝杆菌的致病机理奠定基础。     

牛结核病新型疫苗的研究现状

在过去的20年里,人们应用分子生物学技术来研制更为有效的结核病疫苗,新型候选疫苗大量涌现。这些新型疫苗主要包括减毒活疫苗、重组活疫苗、亚单位疫苗和核酸疫苗。对防制牛结核病的各种新型疫苗也进行了相应的研究,并取得了令人振奋的进展。各种新型疫苗各有优缺点。目前看来,重组卡介苗和DNA疫苗被认为是最有前途的候选疫苗。但是,所有候选疫苗共同的也是致命的缺点是免疫保护力低。因此,牛结核病疫苗研制的主要努力方向还是在研究分支杆菌免疫机制和免疫失败原因的基础上,进一步增强现有候选疫苗的免疫效力或研制更为有效的新型疫苗。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型7型25-4株ApxⅡCA基因的克隆和基因缺失

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌血清型7型25-4株ApxIICA基因用特异性引物进行PCR扩增并克隆到T载体上,构建重组质粒pMD18-ApxIICA,将pMD18-ApxIICA转化到E.coli JM83中并测序.序列分析表明血清型7型25-4株ApxII CA与其它血清型(5型和9型)核苷酸序列同源性达98%以上,氨基酸序列同源性达90%以上.利用ApxIIC基因内部单一的SpeI位点,设计特异性的引物,利用PCR技术在ApxIIC基因内部缺失165bp的核苷酸片段,PCR产物再用SpeI进行酶切,并体外连接构建得到含有ApxIIC缺失基因的重组质粒pMD18-ApxII△/CA.