蒜芥茄SsWRKY1基因克隆及黄萎病病原菌胁迫下表达分析

【目的】克隆蒜芥茄WRKY1基因(SsWRKY1),并分析其在黄萎病病原菌胁迫下的表达模式,为探究WRKY1基因在野生蒜芥茄黄萎病抗性中的调控机制提供理论参考。【方法】利用染色体步移技术克隆SsWRKY1基因,通过在线生物信息学软件进行序列分析及构建系统发育进化树;采用GFP融合蛋白表达法对WRKY1蛋白进行亚细胞定位,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测SsWRKY1基因在不同组织及接种黄萎病病原菌后不同时间的相对表达量。并分析9种野生茄材料接种黄萎病病原菌后的病情指数与WRKY1基因表达变化量的相关性。【结果】克隆获得的SsWRKY1基因(GenBank登录号MZ846202)ORF序列长度为1224 bp,编码407个氨基酸残基,蛋白相对分子量为44.87 kD,理论等电点(p I)为6.91,属于亲水性不稳定蛋白,亚细胞定位于细胞核,符合转录因子特征。SsWRKY1蛋白含有2个WRKY保守结构域和C2H2型锌指结构,属于Ⅰ类WRKY转录因子,其二级结构主要由α-螺旋(7.13%)、β-折叠(4.67%)、无规则卷曲(73.71%)和延伸链(14.50%)组成。SsWRKY1蛋白与番茄、野生潘那利番茄、野生番茄、马铃薯WRKY1蛋白的亲缘关系较近。SsWRKY1基因在根和茎的相对表达量显著高于叶中的相对表达量(P<0.05,下同)。黄萎病病原菌接种后不同时间,SsWRKY1基因的相对表达量均低于对照组(无菌水接种),但仅在24 h时二者差异达显著水平。9种野生茄材料接种黄萎病病原菌后的病情指数与接种前后WRKY1基因表达变化量间呈显著正相关。【结论】SsWRKY1属于第Ⅰ类WRKY转录因子,序列高度保守,在细胞核中表达,其基因具有组织表达特异性,黄萎病菌胁迫后该基因的表达下调,推测WRKY1在野生茄黄萎病抗性中起负调控作用。     

灰霉菌MyosinⅠ的体外表达纯化及抑制剂筛选

[目的]本文旨在体外表达纯化灰霉菌Ⅰ型肌球蛋白(MyosinⅠ)及筛选抑制剂。[方法]采用SF9昆虫细胞蛋白表达系统表达灰霉菌MyosinⅠ(BcMyosinⅠ)马达结构域，用亲和层析和凝胶过滤层析纯化方法纯化蛋白，用SDS-PAGE和Western blot检测蛋白表达情况。从实验室已有的化合物库中，用ATPase活性试剂盒测定化合物对BcMyosinⅠ的酶活性抑制率。采用菌丝生长速率法测定部分化合物对灰霉菌的菌丝生长抑制活性。以禾谷镰刀菌Ⅰ型肌球蛋白(FgMyosinⅠ)三维结构为模板，同源模建预测BcMyosinⅠ三维结构。用AutoDock-Vina软件将部分化合物与BcMyosinⅠ进行分子对接。[结果]成功在体外表达纯化BcMyosinⅠ。20μmol·L^-1条件下，化合物B1和B17对BcMyosinⅠ的酶活性抑制率分别为56.24%和65.39%,显著高于对照药剂氰烯菌酯对酶活性的抑制率(27.29%);B1和B17对灰霉菌的菌丝生长抑制率分别为32.90%和83.44%,显著高于对照药剂氰烯菌酯对菌丝生长的抑制率(1.06%)。对照药剂氰烯菌酯与...     

滨海盐碱地生物改良措施在内陆盐碱地改良中的应用效果研究

为探索江苏沿海地区盐碱地的生物改良技术在内陆盐碱地改良中的应用前景，本研究以滩涂耐盐植物品种和耐盐微生物菌剂为材料，选取了包括黏壤土和沙壤土在内的4个盐碱地试验点，探索江苏沿海滩涂的改土措施在内陆地区的应用前景。结果表明，利用盐地碱蓬的生物移盐能力，4个试验点土壤可溶性盐含量显著降低，降幅为38.7%~44.10%。豆科绿肥田菁翻压腐解后，土壤养分含量得到较大提升，并在土壤改良剂的作用下，土壤容重降低，总孔隙度增加。耐盐微生物菌剂的施用有助于活化土壤并促进植物的生长。通过2年的土壤改良，试验地块实现了向日葵的生产活动。本研究表明，江苏沿海滩涂地区“碱蓬移盐、田菁改土”的改良措施，结合土壤改良剂和耐盐微生物菌剂的施用，能够有效改善内陆地区的土壤盐碱化。     

硫酸铜和过氧化钙对海水及沉积物磷赋存形态的影响

生源要素磷的生态功能受其赋存形态影响，金属阳离子和DO影响其赋存形态转化，故推断渔药CuSO₄和CaO₂影响磷的赋存形态。为验证这一假说，分别在充气和不充气的条件下将海水和沉积物分别暴露于浓度为0、0.35、0.70、1.05 mg/L的CuSO₄和浓度为0、5.00、35.00、50.00 mg/L的CaO₂中，21 d后测定上覆海水和间隙水的总磷(TP)、活性磷酸盐(IP)浓度，沉积物中的总磷(TP)、盐酸可浸取态磷(HClP)、可交换态磷(Ex-P)含量。结果表明：充气时，CuSO₄降低上覆水IP浓度和沉积物TP含量，增加沉积物Ex-P含量；不充气时，CuSO₄降低上覆水TP浓度和沉积物TP、Ex-P含量，增加间隙水IP浓度；充气时，过氧化钙降低上覆水IP、TP浓度，增加沉积物HCl-P和Ex-P含量；不充气时，过氧化钙降低上覆水TP浓度，增加间隙水IP浓度和沉积物Ex-P含量。因此，CuSO₄和CaO₂将...