鸡γ-干扰素基因在大肠杆菌中的高效表达及多克隆抗体的制备

将克隆得到的鸡 IFN- γ基因亚克隆到大肠杆菌原核表达载体 p PROEXTMHT的 Pst 和 Kpn 位点上 ,构建了重组表达质粒 p PROEXTMHT- IFN -γ,经序列分析鉴定 ,确证目的基因克隆入载体的预期位点。将重组质粒转化大肠杆菌 DH5 α,于 37℃不同时间诱导培养 ,SDS- PAGE电泳表明 ,该基因在大肠杆菌中发生高水平表达 ,表达的鸡 IFN- γ融合蛋白相对分子质量约为 2 2 0 0 0。重组蛋白占菌体总蛋白的 33%。经 Western blot鉴定 ,该重组蛋白质具有生物学活性。包涵体被 6 mol/ L 盐酸胍裂解后 ,通过镍离子亲和树脂进行了纯化。用所获得的重组鸡 IFN- γ融合蛋白及其纯化产物经 3次肌肉注射于新西兰白兔 ,制备了兔抗鸡 IFN- γ多克隆抗体。琼脂扩散结果表明 ,多克隆抗体可与纯化的鸡IFN -γ重组蛋白发生特异性反应     

多拉菌素浇泼剂对小鼠旋毛虫的疗效研究

研究了多拉菌素浇泼剂对小鼠旋毛虫各个时期的驱杀效果。采用多拉菌素浇泼剂按5mg·kg^-1·bw^-1为小鼠背部浇泼给药一次,对小鼠旋毛虫成虫、移行期幼虫和包囊期幼虫进行驱杀。结果表明。多拉菌素浇泼剂对旋毛虫成虫的杀虫效果最好,杀虫率可达99．5％,其次是旋毛虫的移行期幼虫,杀虫效果达96．62％,而对包囊期幼虫的杀虫效果最差,只有31．98％。多拉菌素浇泼剂治疗小鼠旋毛虫的成虫和移行期蚴虫疗效显著,而对包囊期幼虫效果不明显。本研究为该药进一步的广泛应用于家畜提供理论与试验依据。     

旋毛虫排泄/分泌抗原研究进展

旋毛虫病由于其对人、畜危害严重历来被人们所重视 ,其免疫防制是当今国内外学者研究的重要方向。通过对旋毛虫几种抗原的对比研究 ,排泄 /分泌抗原效果最好 ,它具有双重的免疫学功能 ,成为众多学者研究的热点 ,人们对排泄 /分泌抗原成分进行了大量研究。作为蛋白质其主要成分是三种糖蛋白 (分子量分别为4.5万 ,4.9万 ,5.3万 ) ,他们可以发生免疫学交差反应。目前人们已经获得了编码这三种蛋白的基因序列 ,并通过分子生物学技术对其基因进行克隆和表达 ,将表达蛋白用于旋毛虫病的防制。本文介绍了旋毛虫排泄 /分泌抗原的组成成分与功能 ,以及检测抗原和免疫原方面研究状况。     

正视寄生虫病的危害保障畜牧业健康发展

我国疆域辽阔，大部分地区处于温带和亚热带，自然条件极其复杂。跨古北界及东洋界两大动物区系，动物种类繁多，寄生虫病原种类也多。近些年随着我国公共卫生事业和畜牧业的发展，人们对寄生虫的认识不断加深，某些种类的寄生虫得到了明显的控制，但还有部分种类的寄生虫仍然危害着人们的健康和畜牧业的发展。     

奶牛附红细胞体病三种检测方法的比较研究

对黑龙江省5个奶牛小区中的近444头奶牛分别运用悬滴法、直接涂片法、染色法进行了附红细胞体感染情况检测。结果表明,悬滴法和直接涂片法的感染率为68.2%￣78.6%,姬姆萨染色法为54.5%￣64.7%、吖啶橙染色法为31.8%￣50.8%,悬滴法和直接涂片法的阳性率较高,染色法的结果更接近于实际。建议临床诊断应尽量采用染色法,并结合流行病学、临床症状、治疗等情况进行综合判断。     

犬旋毛虫幼虫在犬体内的分布

研究了哈尔滨地区犬旋毛虫在犬体内的分布情况，结果表明犬旋毛虫在其体内寄生较多的肌肉是咬肌、肠肌和舌肌，而膈肌虫体含量较少。     

鸡柔嫩艾美耳球虫3-1E真核重组表达质粒的构建及其免疫保护性分析

为构建鸡柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)重组真核表达质粒并检测其免疫保护性,本实验将E.tenella表面抗原基因3-1E(E)与鸡IFN-γ、IL-2基因分别串联在真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建真核重组表达质粒pcDNA-E-IFNγ、pcDNA-E-IL2,同时构建对照质粒pcDNA-E、pcDNA-IFNγ、pcDNA-IL2.经酶切鉴定得到预期大小目的片段,测序结果与预期序列一致.将构建的重组质粒免疫鸡只,经western blot检测表明该重组质粒在鸡体内可以正常表达;对感染鸡只的免疫保护效果显示,pcDNA-E-IFNγ、pcDNA-E-IL2组抗球虫指数(ACI)分别为181.04、187.30,具有高效的抗球虫效果,为将其进一步研制成为具有实用价值的抗球虫疫苗奠定了基础.     

siRNA-881干扰GLS基因对旋毛虫肌幼虫抗酸能力的影响

为探究旋毛虫肌幼虫中是否存在谷氨酰胺依赖性抗酸机制(AR4),本研究根据GenBank中旋毛虫肌幼虫谷氨酰胺酶(TsGLS)基因序列设计3条特异性siRNA分子,并通过浸泡法分别导入旋毛虫肌幼虫体内,利用荧光定量PCR(qPCR)、western blot以及间接免疫荧光试验(IFA),筛选沉默效果最佳的siRNA分子...     

旋毛虫各隔离种快速诊断方法的研究

提取４个旋毛虫隔离种的ＤＮＡ，应用Ｊｅａｎ设计的引物序列进行了ＰＣＲ扩增。结果黑龙江猪旋毛虫和Ｔ．ｓｐｉｒａｌｉｓ均显示出家畜型旋毛虫特异的６０２ｂｐ目的ＤＮＡ基因片段，而犬旋毛虫和Ｔ．ｎａｔｉｖａ未见此片段。扩增结果显示，黑龙江猪旋毛虫相当于Ｔ．ｓｐｉｒａｌｉｓ，犬旋毛虫相当于Ｔ．ｎａｔｉｖａ。     

本地毛形线虫49 ku排泄分泌蛋白基因的克隆及序列分析

为了获得本地毛形线虫(Trichinella nativa)49 ku ES蛋白的结构基因,用Trizol提取T.nativa肌幼虫的总RNA,用RT-PCR方法扩增出了编码T.nativa49 ku排泄分泌蛋白的结构基因。将PCR产物与T载体连接并经过大肠埃希菌增殖后送检测序。序列测定表明,目的基因TNPG长度为951bp,核苷酸序列同已发表的T.spiralis相应的序列P49同源性为98.63%,所推导的氨基酸序列同源性为99.05%。为T.nativa49 ku ES蛋白结构基因的进一步研究打下基础。