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为获得可溶性表达的兔NF-κB p50蛋白,本研究对兔p50基因进行大肠杆菌密码子优化及合成,并连接于原核表达载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌Origami B(DE3)菌株,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,获得GST-p50融合蛋白。聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示,GST-p50蛋白主要以可溶形式高效表达。经谷胱甘肽S转移酶(GST)磁珠纯化及蛋白免疫印迹(western blot)鉴定,所表达的GST-p50蛋白具有良好的反应原性。研究结果为进一步开展兔NF-κB互作蛋白及信号通路的研究奠定了基础。 相似文献
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为了原核表达兔源抗凋亡蛋白Bcl-2,并诱导表达纯化该蛋白后制备多抗,采用RT-PCR扩增Bcl-2编码序列,并将该序列克隆至pET-32a(+)载体,获得重组pET-32a-Bcl-2质粒转化BL21(DE3),筛选最佳表达条件,通过亲和层析纯化目的蛋白质,最后经Western blot鉴定后免疫小鼠。结果显示,成功扩增Bcl-2编码序列并构建了pET-32a-Bcl-2表达载体;SDS-PAGE结果显示,在16℃,5 h,0.5 mmol/L IPTG的表达条件下,重组蛋白Bcl-2能够高效可溶性表达;Western blot结果表明纯化后的表达产物为高纯度的Bcl-2重组蛋白,将该蛋白质免疫小鼠后获得了特异性抗体,该抗体能够特异性识别重组Bcl-2蛋白,并应用该抗体鉴定RK13-B细胞中Bcl-2蛋白的过表达。 相似文献
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以原核表达纯化的猪(嗜血)支原体MSG1蛋白免疫BALB/c小鼠,运用细胞融合技术筛选分泌针对MSG1蛋白抗体的融合细胞。通过间接ELISA方法筛选获得2株能稳定分泌抗体的融合细胞株,分别命名为1A7和3G6,Western blot结果证明这2株细胞分泌的抗体能够与重组MSG1蛋白发生特异性反应。细胞上清和腹水中的ELISA抗体效价分别为1∶4 096、1∶1 024和1∶1 638 400、1∶51 200,其单抗亚类鉴定均属于IgG1,轻链为κ型。抗原识别位点分析结果表明,2株单抗所识别的抗原位点相同。猪(嗜血)支原体MSG1蛋白特异性单克隆抗体的制备成功,为制备免疫诊断试剂盒和致病机制的研究奠定了基础。 相似文献
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利用空间统计分析方法对中国1950年~1999年50年的年平均和季平均气温格点数据进行空间自相关分析,发现中国气温分布存在明显的空间集聚现象。结果表明,中国气温分布在空间上存在两个低温集聚区和一个高温集聚区,分别为东北低温集聚区、青藏高原低温集聚区和东南部近海高温集聚区,其余地区为介于高温集聚和低温集聚区之间的过渡区;而在春夏两季,塔里木盆地也形成一个高温集聚区。最后,本文对形成这种气温空间分布特征的影响因素进行了分析探讨。期望本研究对气候区划研究提供有益参考。 相似文献
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猪皮肤病是由多种原因导致猪表皮及其附属器官的疾病。在开展技术服务和现场诊断的时候,笔者都会对猪的皮肤情况以及受损情况进行研究,为判断提供依据。主要是注意病猪的皮肤损伤和变化,根据临床的不同表现来进行诊断,一般病猪的皮肤表现比较多,有些是局部的变化,在耳部等处出现,有些是全身性症状变化,如水疱、斑点等,这些多是因为病毒导致的,有的病猪呈一过性变化,有些猪患病后无法进行治疗。所以,对现场的病猪进行诊断,了解病猪皮肤的状况,对其进行准确地评估,为病猪的病史进行调查和研究,以此来制定治疗方案。 相似文献
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