单核细胞增生性李斯特菌感染ICR小鼠模型的建立

单核细胞增生性李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)是一种人畜共患食源性致病菌,能引起人和动物较为严重的感染症状。现广泛使用具有免疫活性的小鼠模型测定半数致死量(LD₅₀)来评价不同LM菌株的致病性。为建立LM的ICR小鼠模型,本研究采用1/2a血清型的N21 LM菌株,分别以10⁶、10⁷、10⁸、10⁹和10¹⁰ CFU的剂量口腔灌注感染6周龄ICR小鼠,每组10只;另取10只接种PBS作为对照组,测定LM对ICR小鼠的LD₅₀;另取40只小鼠,平均分为2组,公母各半,以测定的LD₅₀剂量接种LM,分别对各组小鼠临床症状、组织病理变化、体重变化及组织中细菌载量进行评价。结果发现,N21 LM菌株对ICR小鼠的LD₅₀为10^9.25 CFU;感染周期为10 d左右,感染小鼠出现被毛粗糙、精神萎靡、阴茎垂出及体重下降等临床症状。组织病理学分析结果显示,肝脏先后出现实质内灶状细菌团块、形成血栓、细胞坏死等;脾脏主要表现为白髓内淋巴细胞减少;肺脏主要表现为纤维素性肺炎。菌落计数和Real-time PCR的检测结果发现肝脏中细菌载量最高,脾脏次之。结果表明,ICR小鼠能作为单核细胞增生性李斯特菌的感染模型。本试验结果为研究LM的致病机制、疫苗研究及抗菌肽转基因小鼠抗LM的评价奠定了基础。     

荧光定量PCR方法检测禽白血病病毒的研究

根据禽白血病病毒各亚群pol基因序列相对保守的特点,在其保守区内设计了1对引物,进行RT-PCR反应,扩增产物为214 bp,将该产物连接T载体作为Real-time PCR反应的标准品,利用SYBR Green I染料进行Real-time PCR反应,建立了标准曲线,并进行反应灵敏性、特异性和重复性试验。试验结果表明：标准曲线线性关系R值均为0.999以上,检测极限约为8.21E＋01拷贝数质粒DNA,比RT-PCR灵敏100倍以上;特异性分析表明只有禽白血病病毒能检测到特异性的熔解度峰值;批内和批间重复性试验的变异系数均小于5%;用已建立的方法对人工感染SPF鸡的不同组织进行3次重复检测,病毒RNA的检出率为100%。以上结果表明：该方法稳定可靠,为禽白血病的早期诊断建立了特异、灵敏和快捷的方法。     

牛流行热病毒灭活疫苗免疫后牛外周血淋巴细胞亚类分布的研究

对牛流行热病毒灭活疫苗免疫并攻每后，牛外周血淋巴细胞亚类的变化进行了研究。结果表明，灭活苗免疫后，牛的CD4^ 显著升高，可能与参与辅助B淋巴细胞合成抗体有关，攻毒后，γδT细胞均显著上升，免疫组在攻毒后3周仍保持在相当的高水平，IL－2Rα阳性细胞在攻毒后高热期也有显著升高，而CD8^ 细胞没有明显变化。     

鸡胚胎胸腺、胰腺、性腺的组织发生

在孵化的第4d,鸡胚胸腺的原基发生于第Ⅲ、Ⅵ咽囊的背壁上皮。到第9d,胸腺被间充质分叶。胸腺小体发生于第13d。在第15d,胸腺的皮质与髓质开始分化。到20～21d,在封闭的微血管周围,由数层网状细胞形成典型的胸腺小体。背侧胰芽及腹侧胰芽发生于孵化的第3～4d。到第15d,外分泌部由初期的复管状腺变成复管泡状腺。胰岛细胞团在第11d发生。随着鸡胚的发育,胰岛的数目逐渐增多。生殖嵴在第3d发生。到第4d,从卵黄囊内胚层来的原性细胞,便向雌性左侧的性腺转移。初级性索仲入髓质形成间质细胞。次级性索形成卵泡细胞。第5d时,雄性的初级性索,仲入间充质内形成曲细精管及间质细胞群的原基。第8d以后,性腺的性别可以区分。     

基于生态足迹的雅安市土地生态安全研究

以雅安市1999-2006年的统计数据为基础,利用生态足迹理论与方法,对雅安市的生态足迹、生态承载力、生态赤字进行了研究,对雅安市的生态安全情况进行了评价.结果表明:雅安市人均生态足迹从1999年的1.068 hm2增加到2006年的1.657 hm2,而同期的人均生态承载力则由0.925 hm2下降到0.833 hm2,人均生态赤字由0.143 hm2增大为0.825 hm2,生态压力指数由0.858上升为1.126;万元GDP生态足迹在1.87～2.78 hm2之间上下波动,平均值为2.212 hm2.研究期内雅安市的人均生态足迹超出了人均生态承载力,表现出巨大的生态赤字,且生态赤字基本上呈直线上升趋势,雅安市的经济社会发展处于不可持续状态,土地生态系统始终处于超负荷和不安全的状态.这为揭示区域土地生态安全的本质提供一定参考,同时也指出协调人口、资源和区域经济发展可缓解这种不安全状态.     

禽流感病毒A/PFV/Restock/34(H7N1)HA基因在昆虫/杆状病毒系统中的表达

经RT-PCR扩增了禽流感病毒A/PFV／Restock／1／34（H7N1）1．7kbHA基因的cDNA，将其克隆到pMD18-T中并测序。在去除编码HA信号肽的核苷酸序列后，亚克隆到杆状病毒转移载体pBlueBacHis，筛选到重组质粒命名为pBlueBacHisH7HA，测序正确后与线性化的杆状病毒DNA（Bac-N-Blue^TMDNA）共转染sf9昆虫细胞，挑取蓝色蚀斑，经三轮蚀斑纯化，获得数株重组杆状病毒rpBlueHisH7HA。提取重组病毒DNA，经PCR证明目的基因片段已插入到杆状病毒基因组中，血凝实验、SDS-PAGE和Western blot实验结果表明HA基因在重组杆状病毒感染的HFive细胞中获得了表达。     

细菌载体技术研究进展

随着重组DNA 技术的发展和应用,基因工程疫苗的研究取得了快速的进展.其中,最有发展前景的研究领域之一是以细菌为活载体的疫苗,即将所需的编码病原菌特异性抗原的DNA 片段插入减毒的病原菌或者共生菌中,以递呈表达所编码的抗原,以期达到预防一种或多种疾病的作用.细菌载体疫苗是新型疫苗的重要发展方向,文章主要对卡介苗、志贺菌和乳酸杆菌等细菌载体疫苗加以介绍.     

非典型肺炎--考验人类的一场攻坚战

根据世界卫生组织网站统计,我国称为非典型肺炎的严重急性呼吸综合征(Severe AcuteRespiratory Sydrome, SARS)已经在30个国家和地区发生.从2002年11月1日至2003年5月5日日内瓦时间18:00,全球累计报告病例6583例,死亡病例461例,治愈出院病例2764例.……     

鸭肝炎病毒Ⅰ型结构基因vp1的原核表达及其抗原性分析

通过RT-PCR方法克隆出DHV-1：161／79／V结构蛋白vp1基因片段,将其克隆到pMD18-T载体中,测序结果为714bp。vp1经EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切后,亚克隆到原核表达载体pET-32a（＋）,获得重组质粒pET—VP1,转入E．coli Rosetta-gami（DE3）pLysS,经IPTG诱导,SDS-PAGE检测结果表明在大肠杆菌中表达了1个相对分子量约为47ku的融合蛋白（Trx-His—VP1）,将此融合蛋白用His-Ni^＋亲和层析法进行纯化。Westernblot分析表明,Trx-His-VP1能与DHV-1阳性血清发生特异性反应,说明表达的结构蛋白VP1具有良好的抗原性。     

猪β2-微球蛋白基因在大肠埃希氏菌中的表达与纯化

在病毒感染机体时,MHC-I类分子限制的抗原特异性CTL反应是清除病毒、控制病毒复制和散播的主要机制[1].