猪瘟病毒胶体金免疫层析检测方法的建立及应用

为建立一种猪瘟病毒的快速检测方法，采用柠檬酸三钠还原氯金酸制备胶体金，选择15nm胶体金标记兔抗猪瘟病毒抗体，对胶体金标记抗体采用低温超速离心法进行纯化，组装免疫层析试纸条。用试纸条对猪瘟可疑病料进行检测，同时用直接荧光抗体试验和RT—PCR做平行试验。结果显示，用试纸条检测猪瘟病毒，10min左右即可显示结果，试纸条、直接猪瘟荧光抗体试验和RT—PCR的阳性检出率依次为36．36％（4／11）、45．45％（5／11）和72．72％（8／11）。表明，用胶体金免疫层析试纸条检测猪瘟病毒操作简便，需时短，可以用于猪瘟的流行病学调查。     

应用PCR方法快速检测绵羊肺炎支原体

有研究表明,在引起羊只发生羊支原体性肺炎的病原中,绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae ,MO)的Y98株和丝状支原体山羊亚种LC型( M. mycoides subsp.mycoides LC, MmmLC)的 Y-goat株是目前流行于我国一些地方的优势致病菌,两者均可引起绵羊和山羊的严重发病,而且常呈混合感染.同时还证明,这两种菌型缺乏共同抗原和免疫原.以往仅以流行特点、临床症状及病理变化对本病进行诊断,但两者所致的病例在这些方面都很相似,因此建立一种简便、快速、特异、灵敏的检测方法用于该病早期诊断和流行病学普查对于及早发现和控制该病具有重要意义.     

牛病毒性腹泻高效纳米PCR检测方法的建立及初步应用

为建立快速、灵敏的牛病毒性腹泻病毒(BVDV)的检测方法,根据GenBank已发表的序列,在其5′端非结构蛋白区域设计了1对特异性引物,用来检测BVDV,PEDV,SRV,TGEV等,同时建立了牛病毒性腹泻纳米PCR检测方法,经优化找出最佳的NanoPCR反应条件。经过检测,纳米PCR的最小检出量为15.2×10~(-4),PCR的最小检出量为15.2×10~(-3);BVDV的敏感性试验表明纳米PCR方法的敏感性是普通PCR的10倍。该BVDV纳米PCR具有较高的敏感性和特异性,是一种高效的检测手段,可应用于流行病学调查,同时也为BVDV的及时检测、预防和治疗奠定基础。     

人兽共患病的现状、危害及防控措施

人兽共患病是指那些由人和脊椎动物共同的病原体引起的、在流行病学上有关联的、可在非人类脊椎动物和人类之间传播的感染性疾病。近年发生的SARS、人感染高致病性禽流感和人感染猪链球菌病都属于动物源性的人兽共患病,对我国的经济发展、公共卫生、应急处理的体系、机制、能力、水平都是一个严峻的挑战。目前,在世界范围内,对人兽共患病暴发流行的处理工作尚无统一的操作规范,论文试图对人兽共患病的现状、危害及对其防控做一些探索与归纳。     

牛轮状病毒RT-LAMP检测方法的建立

建立一种适用于牛轮状病毒(BRV)的反转录-环介导等温扩增(RT-LAMP)的快速检测方法。根据GenBank中登录的BRV VP7基因序列,针对其保守区设计了4条引物,利用RT-LAMP方法进行检测,并优化了反应体系与反应时间,检测了该方法的特异性和灵敏度。结果表明,该方法在等温条件下只需要50min就能检测出结果,与普通RT-PCR相比,具有较短的检测时间、良好的特异性和较高的灵敏度。论文针对BRV建立的RT-LAMP快速检测方法操作简便、无需昂贵设备、结果可视,适用于BRV在基层的快速检测。     

猪脑心肌炎病毒RT—LAMP检测方法的建立

针对猪脑心炎病毒（Encephalomyocarditis virus,EMCV）3D基因保守序列的6个特异性部位设计了2对引物,利用BstDNA聚合酶,63℃恒温保持50min即可完成反转录与扩增反应,产物中加入SYBR GreenI染料,在紫外光下可直接观察判定扩增结果,试验成功建立了猪EMCV的RT-LAMP检测方法。结果表明：该方法灵敏度比RT-PCR高100倍,具有良好的重复性和稳定性,而且对其他病毒均无扩增结果,可作为猪EMCV的快速诊断方法。     

鸡的减蛋综合症-76的研究进展

鸡的减蛋综合症(Eggdropsyndrome简称EDS-76)是鸡的一种由腺病毒Ⅲ群病毒引起的以鸡的产蛋率下降为特征的一种传染病。本文从该病的病原、流行病学、症状和病理变化、实验室诊断技术、预防和治疗几个方面就该病的研究进展作一综述。     

双夹心ELISA检测鸡EDS-76病毒抗原的研究

应用鸡抗EDS-76病毒、兔抗EDS-76病毒抗体和羊抗兔抗体,建立了检测EDS-76的双夹心ELISA方法,本试验确定的鸡抗EDS-76病毒抗体、兔抗EDS-76病毒抗体和HRP-羊抗兔抗体的最佳工作浓度分别为1∶160、1∶300和1∶1000。本法对纯化EDS-76病毒的最低检出量约为5 ng/孔。通过对EDS-76病毒试验感染鸡脏器带毒、排毒情况和临床样本的检测,表明双夹心ELISA方法对EDS-76病毒的检测特异性强、敏感度高、适合于成批样本的检测。     

北京地区规模化猪场繁殖障碍性疾病的诊断研究

为了给猪病毒性繁殖障碍性疾病的鉴别诊断提供一个快速、灵敏、特异的检测手段,本试验应用ELISA、PCR、RT-PCR及细胞培养等方法对北京某猪场弱仔、流产、死胎、木乃伊胎及出生后几天死亡的小猪进行猪瘟病毒(CSFV),伪狂犬病毒(PRV),圆环病毒2型(PCV-2),细小病毒(PPV)和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRS...     

2008-2009年部分地区新城疫病毒分离株的进化分析

本研究旨在从分子水平上掌握中国新城疫病毒的变异情况和新城疫的流行规律,对2008-2009年从中国部分省市养殖场分离的9株新城疫病毒毒株,采用RT-PCR方法扩增其F和HN基因,经克隆和测序,对所得序列进行同源性和遗传进化分析。结果显示,9株分离株有8株为基因Ⅶ型,1株为基因Ⅱ型,F基因开放性阅读框架(ORF)为1662 bp,强毒株同La Sota的核苷酸同源性为83.5%~84.2%。HN基因开放性阅读框架(ORF)为1716或1734 bp,强毒株在538位缺失1个糖基化位点。结果表明,近年流行的ND疫情主要是由基因Ⅶ型NDV引起,F和HN基因的变异可能与频繁的疫苗免疫选择压力有关。