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[目的]了解山东省猪流感病毒(Swine influenza virus,SIV)的流行状况及其进化趋势,为有效防控山东猪流感(Swine influenza,SI)提供理论依据.[方法]从山东各地疑似发生SI的猪群中采集猪鼻拭子,接种于10日龄SPF鸡胚,盲传3代后进行病毒分离、亚型鉴定,并对八片段基因进行克隆测序及遗传进化分析.[结果]从150份猪鼻拭子中分离得到一株SIV,命名为A/Swine/LXB/1016/2012,经鉴定属于H9N2亚型.A/Swine/LXB/1016/2012 (H9N2)毒株HA基因的裂解位点为VSSR/GL,无多个连续性碱基插入,属于低致病性流感病毒;而其受体结合位点与A/chicken/Heilongjiang/35/2000、A/duck/HK/168/1977、A/duck/HK/702/1979、A/duck/HK/Y439/1997、A/northernshoveler/Missouri/298/2009、A/swine/Korea/S452/2004和A/turkey/Wiaconsin/1966毒株一致,同时具有禽源流感病毒和猪源流感病毒的特征.遗传进化树分析结果也表明,A/Swine/LXB/1016/2012(H9N2)毒株与A/turkey/Wisconsin/1966、A/swine/Korea/S452/2004毒株的亲缘关系最近,可能来自相同的祖先.[结论]A/Swine/LXB/1016/2012毒株同时具有禽源流感和猪源流感的特征,推断该毒株是一株禽流感病毒向猪体适应的毒株. 相似文献
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第2.3.2.1分支H5N1亚型禽流感病毒(AIV)抗原性目前已发生显著变异。为应对变异株可能引发的流行,利用反向遗传技术,以鸡胚适应毒A/Puerto Rico/8/34(PR8)的内部基因为骨架,以H5N1亚型AIV A/duck/JS/ZJ/2016(H5N1)(ZJ,第2.3.2.1d分支)、A/Chicken/SD/YT/2015(H5N1)(YT,第2.3.2.1e分支)的基因组为模板,扩增其HA及NA基因,并对HA基因进行修饰,去除裂解位点处的多个碱性氨基酸,使其获得低致病性AIV的分子特征,成功构建了第2.3.2.1分支H5N1亚型AIV疫苗候选株rZJ和rYT。抗原性分析显示,rZJ和rYT与Re-6疫苗株之间的抗原性已有显著差异。免疫效力试验表明,rZJ和rYT重组灭活疫苗免疫21 d的平均HI抗体效价分别达到8.8 log2和8.9 log2,说明重组疫苗具备良好的免疫原性。免疫攻毒保护试验表明,rZJ和rYT重组灭活疫苗可以提供SPF鸡抵抗同源H5N1病毒100%的保护,而针对第2.3.2.1分支的Re-6疫苗仅能提供大约40%和30%的保护。利用反向遗传技术构建的rZJ和rYT重组候选疫苗株为该分支病毒的防控提供了技术支持。 相似文献
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为建立简便快速检测H7N9亚型流感病毒的方法,根椐GenBank中H7亚型流感病毒的HA基因序列和N9亚型流感病毒的NA基因序列,设计2对特异性引物,在建立H7亚型和N9亚型单项RT-PCR的基础上,优化双重RT-PCR反应条件,建立同时检测H7亚型和N9亚型的双重RT-PCR。对H7N9亚型流感病毒核酸模板进行双重RT-PCR扩增,结果可同时扩增HA基因263bp、NA基因520 bp的特异性片段,而对其他常见亚型的流感病毒的RT-PCR扩增结果均为阴性。敏感性试验结果表明,该双重RT-PCR方法的检测下限为3 pg的H7N9病毒模板。利用该双重RT-PCR方法对30份临床样品进行H7N9病毒进行检测,与病毒分离方法进行对比,结果显示,两者的符合率为100%。结果表明建立的双重RT-PCR检测方法,具有特异、快速、敏感、准确的特点,可用于H7N9流感病毒的同时检测和鉴别诊断,为H7N9亚型流感的有效防控提供技术支撑。 相似文献
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本试验旨在建立一种用SYBR GreenⅠ荧光染料检测HeLa细胞Ⅰ型干扰素效应因子ISG15、ISG56、Mx1、OAS和PKR mRNA表达水平的实时荧光定量RT-PCR检测方法,并在口蹄疫病毒(FMDV)L蛋白抑制Ⅰ型IFN发挥效应的信号通路中进行初步应用。利用TRIzol法提取总RNA,经Oligo d(T)15进行反转录,利用PCR扩增各段目的基因,并克隆至pMD18-T载体,转化大肠杆菌DH5α,经鉴定为阳性的重组质粒作为标准品模板建立SYBR GreenⅠ荧光定量RT-PCR标准曲线和熔解曲线,并进行灵敏性、特异性和重复性试验。根据建立的实时荧光定量RT-PCR方法,检测FMDV L蛋白对Ⅰ型IFN效应因子的抑制效果。HeLa细胞在转染FMDV L蛋白真核表达质粒,并受到Ⅰ型IFN刺激后ISG15、ISG56、Mx1、OAS和PKR的相对表达量较转染空载体或表达GST的真核表达质粒明显降低。本试验建立了HeLa细胞Ⅰ型IFN效应因子的实时荧光定量RT-PCR检测方法,为在mRNA水平上对HeLa细胞Ⅰ型IFN效应因子的定量分析奠定了基础,并成功地初步应用于FMDV L蛋白抑制Ⅰ型IFN发挥效应的信号通路的研究中。 相似文献
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为给猪病防控措施的制定提供参考,2014—2015年对山东省主要猪群疫病进行了抗原抗体检测,分析其感染状况与流行趋势。结果显示:2014—2015年间,猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)抗原阳性率由48.10%降低到40.56%,而其抗体阳性率由74.88%提高到84.39%。伪狂犬病(PR)抗原阳性率由4.07%提高到10.86%,期间的野毒(gE)抗体阳性率和免疫(gB)抗体阳性率基本一致。猪瘟(CFS)抗原阳性率由25.80%降低到12.61%,而其抗体阳性率由56.46%提高到71.54%。除CFS在2014年第二季度高发外,PRRS和PR的发生无明显季节性,三者的抗原阳性率与抗体阳性率大致呈负相关。猪流行性腹泻(PED)抗原阳性率由65.48%提高到77.73%,其在2014年第三季度高发,而在2015年全年高发。传染性胃肠炎(TGE)仅为零星发生。猪链球菌(SS)的抗原阳性率变化不大,平均为9%左右。副猪嗜血杆菌(HPS)抗原阳性率由30.42%降低到20.22%。总之,山东省PRRS和CFS等疫病的抗原感染率呈下降趋势,抗体阳性率呈上升趋势,说明山东省的主要猪病得到一定程度地控制。同时,依据生猪养殖业中存在的问题,提出了相应的防控对策。 相似文献
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为了筛选出适合静宁县山旱地种植的优质、高产、商品性好马铃薯新品种,依托静宁县马铃薯产业发展项目,从甘肃省一航薯业有限公司引进马铃薯新品种9个,在界石铺、曹务、原安三镇山旱梯田地开展对比试验。结果表明:青薯9号折合产量最高,为44 256.33 kg/hm~2,较陇薯7号增产44.18%;L1036-34折合产量为35 493.55 kg/hm~2,较陇薯7号增产15.63%;陇薯14号折合产量31 804.55 kg/hm~2,较陇薯7号增产3.61%。这 3 个品种产量高、植株生长整齐、品质好,综合性状表现良好,适宜在静宁县及其生态类似区域推广种植。 相似文献